醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)方法

1、1 醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)相關(guān)1.1空氣培養(yǎng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床意義：醫(yī)院是病原微生物聚集的場(chǎng)所， 患者和病原攜帶者體內(nèi)的微生物能以多種形式排 出體外污染周?chē)h(huán)境， 如不及時(shí)將其殺滅， 可能導(dǎo)致醫(yī)院感染的發(fā)生， 對(duì)其他患 者甚至醫(yī)護(hù)人員造成危害。 手術(shù)室空氣中細(xì)菌可能直接沉降到傷口上， 或沉降到 醫(yī)務(wù)人員的手和器械上， 能引起傷口感染。 監(jiān)護(hù)病房中病人抵抗力極差， 易發(fā)生 呼吸道和其他部位感染，定期監(jiān)測(cè)可及時(shí)發(fā)現(xiàn)消毒和通風(fēng)系統(tǒng)存在的問(wèn)題。原理：用9 直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露 5min 后送檢。置于 37培養(yǎng)箱孵育， 按照相應(yīng)公式計(jì)數(shù)菌落總數(shù)（ N）。采樣原則：1. 采樣時(shí)間：選擇消毒處理后與進(jìn)行

2、醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。2. 采樣高度：與地面垂直高度 80150cm。3. 布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積 30 ，設(shè)一條對(duì)角線上取 3 點(diǎn)，即中心一點(diǎn)、兩端各 距墻 1m處各取一點(diǎn)；室內(nèi)面積 >30m2，設(shè)東、西、南、北、中各 5 點(diǎn)，各個(gè)點(diǎn)均 距墻 1m。4. 采樣方法：用 9 直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露 5min 后送檢培養(yǎng)。 檢查原則：采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過(guò)6h，若樣品保存于 04條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò) 24 小時(shí)。菌落總數(shù)計(jì)算：空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（ cfu/m3 ） 50000×N / AT式中： A-平板面積， cm2；T-平板暴露時(shí)間，

3、 min;N- 平均菌落數(shù)， cfu/m3規(guī)定使用 9cm 平板，暴露 5min，所以經(jīng)換算，公式簡(jiǎn)化為： 空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（ cfu/m3 ） 157.25×N報(bào)告結(jié)果和解釋?zhuān)?. 有細(xì)菌生長(zhǎng)：參照菌落總數(shù)計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。2. 無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)：置于 35溫箱繼續(xù)孵育 24 小時(shí)后再觀察結(jié)果。3. 若培養(yǎng)48h 后仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，報(bào)告：無(wú)菌生長(zhǎng)。注意事項(xiàng)： 不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。1. 溶血性鏈球菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。2. 沙門(mén)氏菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。3. 銅綠假單胞菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。4. 金黃

4、色葡萄球菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。 各類(lèi)環(huán)境下空氣培養(yǎng)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)： 環(huán)境類(lèi)別范圍空氣標(biāo)準(zhǔn)（ cfu/m3 ）I 類(lèi)層流潔凈手術(shù)室、 層流潔凈病房 10不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌II 類(lèi)普通手術(shù)室、禪房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌 區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房 200不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌III 類(lèi)兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類(lèi)普通病房和房間 500不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性 鏈球菌1.2物體表面采樣及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床意義：醫(yī)院感染的主要對(duì)象是住院病人和醫(yī)院職工。 住院病人抵抗力差，

5、 更易感染。 醫(yī) 院感染的監(jiān)測(cè)是預(yù)防醫(yī)院感染的前提， 只有進(jìn)行了深入細(xì)致的監(jiān)測(cè)， 發(fā)現(xiàn)各個(gè)科 室存在的問(wèn)題才能有針對(duì)性和有效的防治醫(yī)院感染。 在某些情況下， 物體表面作 為傳播媒介和儲(chǔ)源， 引起醫(yī)院感染的危險(xiǎn)是存在的。 因此， 有目的和有選擇的對(duì) 物體表面采樣進(jìn)行培養(yǎng)很有必要。目的：1. 通過(guò)定性和定量檢查，了解物體表面的細(xì)菌污染情況。2. 評(píng)價(jià)物體表面的清潔和消毒結(jié)果標(biāo)本采集要求：1. 采集時(shí)間：選擇消毒處理后的 4h 內(nèi)進(jìn)行采樣。2. 采集面積：被采表面 <100cm2, 取全部表面。被采表面 100cm2，取 100cm2。3. 采集方法：用浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭子 1 支在

6、物體表面來(lái)回涂抹， 若被采表面 <100cm2，取全部表面；若被采表面 100cm2，取 100cm2。1) 未用消毒劑的物體表面采集的標(biāo)本接種在裝有 5ml 無(wú)菌生理鹽水的試管內(nèi)送 檢。2) 已使用消毒劑物體表面采集的標(biāo)本接種在 5ml 0.1%硫代硫酸鈉肉湯的試管內(nèi) 送檢。檢測(cè)步驟： 從 5ml 送檢標(biāo)本中無(wú)菌條件下吸取 100l 液體平鋪于血平板上，用接種環(huán)均勻劃 線后置于 35孵箱中培養(yǎng) 2448h 后計(jì)數(shù)平板上菌落總數(shù)（ N）。 結(jié)果計(jì)算及解釋?zhuān)何矬w表面細(xì)菌菌落總數(shù)（ cfu/cm2 ）= 平皿上菌落總數(shù)（ N ）×采樣液稀釋倍數(shù) / 采樣面積；經(jīng)換算后，物體表面細(xì)菌

7、菌落總數(shù)（ cfu/cm2）=N ×2。 如在平板上發(fā)現(xiàn)致病菌（如：溶血性鏈球菌、沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假 單胞菌），有明顯溶血的菌落或氧化酶陽(yáng)性（ + ）菌落，或院內(nèi)發(fā)生感染則要求 作細(xì)菌鑒定。細(xì)菌鑒定參見(jiàn)細(xì)菌鑒定操作規(guī)則。附：各類(lèi)環(huán)境下物體表面衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境類(lèi)別范圍物體表面標(biāo)準(zhǔn)（ cfu/cm2 ）I 類(lèi)層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房 5II 類(lèi)普通手術(shù)室、禪房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌 區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房 5III 類(lèi)兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急 診室、化驗(yàn)室、各類(lèi)普通病房和房間 10IV 類(lèi)傳染病科及病房 1

8、51.3醫(yī)務(wù)人員手采樣及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床意義：醫(yī)務(wù)人員的手經(jīng)常直接或間接地同污染物品或病人接觸， 監(jiān)測(cè)手部細(xì)菌能了解手 部細(xì)菌污染情況和評(píng)價(jià)手的清潔和消毒效果。目的：1. 通過(guò)定性和定量檢查，了解手部細(xì)菌污染情況。2. 評(píng)價(jià)手的清潔和消毒效果。標(biāo)本采集要求：1. 采樣時(shí)間：在接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣。2. 采樣操作：2.1 沒(méi)有用消毒液，清水沖洗的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無(wú)菌生理鹽水采 樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次 （一只手涂擦面積 約 30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子， 剪去手接觸部位， 將棉拭子放入裝有 5ml 無(wú) 菌生理鹽水管內(nèi)送檢。2.2 用

9、消毒液，并用清水沖洗干凈的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無(wú)菌生理鹽 水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次 （一只手涂擦 面積約 30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有 5ml 無(wú)菌生理鹽水管內(nèi)送檢。2.3 用消毒液，但沒(méi)有用清水沖洗干凈的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無(wú)菌生 理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次 （一只手 涂擦面積約 30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入 裝有 5ml 含中和劑的肉湯管內(nèi)送檢。操作步驟：從 5ml 送檢標(biāo)本中無(wú)菌條件下吸取 25l 液體平鋪于血平板上，用接 種環(huán)

10、均勻劃線后置于 35孵箱中培養(yǎng) 24 48h 后計(jì)數(shù)平板上菌落總數(shù)（ N）結(jié)果計(jì)算及解釋?zhuān)?手細(xì)菌菌落總數(shù)（ cfu/cm2）=平皿上菌落總數(shù)（ N）×采樣液稀釋倍數(shù) /30 ×2 經(jīng)換算，公式簡(jiǎn)化為：手細(xì)菌菌落總數(shù)（ cfu/cm2 ） =N ×3.33。 如在平板上發(fā)現(xiàn)致病菌（如：溶血性鏈球菌、沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假 單胞菌），有明顯溶血的菌落或氧化酶陽(yáng)性（ + ）菌落，或院內(nèi)發(fā)生感染則要求 作細(xì)菌鑒定。細(xì)菌鑒定參見(jiàn)細(xì)菌鑒定操作規(guī)則。各類(lèi)環(huán)境下醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境類(lèi)別范圍手培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（ cfu/cm2 ）I 類(lèi)層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房 5II 類(lèi)普

11、通手術(shù)室、禪房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌 區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房 5III 類(lèi)兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急 診室、化驗(yàn)室、各類(lèi)普通病房和房間 10IV 類(lèi)傳染病科及病房 11.4使用中消毒劑的微生物學(xué)監(jiān)測(cè)（ 1）采樣時(shí)間： 采取更換前使用中的消毒劑。（2）采樣量及方法： 在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取 0.5ml 被檢樣 液，加入到 4.5ml 稀釋液中混勻。醇類(lèi)和酚類(lèi)消毒劑用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯 作稀釋液。含氯消毒劑、含碘消毒劑、過(guò)氧化物消毒液需在檢驗(yàn)地帶 網(wǎng)肉湯內(nèi)加入 0.1%硫代硫酸鈉作稀釋液。季銨鹽類(lèi)消毒液需在肉湯 中加入 3% Tw

12、een 80 和 0.3卵磷脂作稀釋液。含有表面活性劑的各 種復(fù)方消毒劑需在肉湯中加入 3Tween 80作稀釋液。（3）細(xì)菌菌落總數(shù)檢查： 分別取 200ul采樣液放入 2 只普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂 滅菌平皿內(nèi)，放 37溫箱內(nèi)培養(yǎng) 48 h 計(jì)數(shù)菌落。 平板上有菌生長(zhǎng)， 證明被檢樣液有殘存活菌，若每個(gè)平板菌落數(shù)在10 個(gè)以下，仍可用于消毒處理（但不能用于滅菌）；若每個(gè)平板菌落數(shù)超過(guò) 10 個(gè)，說(shuō) 明每毫升被檢樣液含菌量已超過(guò) 100 個(gè)，不宜再用。，病原微（4）判斷標(biāo)準(zhǔn)：使用中消毒劑，細(xì)菌菌落總數(shù)10 cfu/ ml生物不得檢出；。1.5無(wú)菌物品 縫合針、注射針頭、手術(shù)刀片、小棉球等小件醫(yī)療器械，用無(wú)

13、菌 方法各取 3-5只盛入滅菌的培養(yǎng)瓶中，待檢。無(wú)菌方法從無(wú)菌用具的不同部位如左上邊、中間、右下邊取 2 3個(gè)盛入滅菌的培養(yǎng)瓶中，待檢。敷料等較大塊的物品隨機(jī)用無(wú)菌方法采取 2 3塊盛入較大滅菌 的培養(yǎng)皿中，待檢。（注射器隨機(jī)抽取 23個(gè)連同包裝一起采集，待檢）。 各種包如：產(chǎn)包、胸穿包、骨穿包、導(dǎo)尿包等隨機(jī)抽取 23個(gè)， 待檢。1.6壓力蒸汽鍋滅菌效果監(jiān)測(cè)臨床意義：用于壓力蒸汽鍋（包括排氣鍋和預(yù)真空鍋）滅菌效果的生物監(jiān)測(cè)。原理：培養(yǎng)指示劑由含菌紙片、 培養(yǎng)基及塑料外殼組成， 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑紙片上含嗜熱脂肪桿菌芽胞 （ATCC 7953），選用標(biāo)準(zhǔn)抗力儀測(cè)試： 121飽和蒸汽條件下，菌株存活時(shí)間 5min，殺滅時(shí)間 15min；操作步驟：1. 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑1.1 將壓力蒸汽滅菌生物指示劑放于一標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包中；1.2 按照國(guó)家規(guī)范，分別將測(cè)試包放于鍋內(nèi)不同位置， 121， 15 分鐘；1.3 滅菌完畢，取出該生物指示劑；1.4 擠破內(nèi)含的安瓿，與一支對(duì)照管一起放于 56培養(yǎng)鍋（棕色）內(nèi)培養(yǎng)；1.5 培養(yǎng) 48h 后，閱讀結(jié)果。注： 以上第 1 至第3 步經(jīng)各部門(mén)操作完成后，由各科護(hù)士負(fù)責(zé)送至微生物實(shí)驗(yàn) 室檢測(cè)。結(jié)果判斷：1. 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)