最新吉林大學(xué)HE染色

1、薛輝薛輝吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院封固封固石蠟切片石蠟切片取材取材固定固定(24-48h)脫水脫水(70,80%4h;90,95%2h,100%1h(2)透明透明(二甲苯二甲苯10min(2)浸蠟浸蠟(30min(3)包埋包埋切片切片染色染色從保存時(shí)間長短分，有臨時(shí)玻片標(biāo)本和永久玻片標(biāo)本。從制作的方法從保存時(shí)間長短分，有臨時(shí)玻片標(biāo)本和永久玻片標(biāo)本。從制作的方法來分，有涂片、壓片、裝片來分，有涂片、壓片、裝片(也叫整裝法也叫整裝法)、磨片和切片等、磨片和切片等 。l切片法切片法l徒手切片法徒手切片法l石蠟切片法石蠟切片法l火棉膠切片法火棉膠切片法l冰凍切片法冰凍切片法材料和夾持物材料和

2、夾持物切取的標(biāo)本1.1.徒手切片法徒手切片法 1. 材材 料料 新新 鮮鮮 最最 好好 是是 動(dòng)動(dòng) 物物 的的 心心 臟臟 還還 在在 跳跳 動(dòng)動(dòng) 時(shí)時(shí) 取取 材材 ， 立立 即即 投投 入入固固 定定 液液 內(nèi)內(nèi) 。 應(yīng)應(yīng) 爭(zhēng)爭(zhēng) 取取 在在 死死 后后 半半 小小 時(shí)時(shí) 內(nèi)內(nèi) 處理處理 完完 畢畢 2. 組組 織織 塊塊 力力 求求 小小 而而 薄薄 ,以以 不超不超 過過 5毫毫 米米 為為 在在 可可 能能 范范 圍圍 內(nèi)內(nèi) 也也 應(yīng)應(yīng) 力力 求求 短短 小小 。 以以 使使 固固 定液定液 能能 迅迅 速速 而而 均均 勻勻 地地 滲滲 入入 組組 織織 塊塊 內(nèi)內(nèi) 部部 3. 勿勿

3、使使 組組 織織 塊塊 受受 擠擠 壓壓 。 取取 材材 時(shí)時(shí) ， 組組 織織 塊塊 可可 稍稍 取取 大大 一一 點(diǎn)點(diǎn) 。4. 要要 熟熟 悉悉 取取 材材 的的 部部 位位 要要 能能 準(zhǔn)準(zhǔn) 確確 地地 按按 解解 剖剖 部部 位位 取取 材材 ， 如如 胰腺胰腺 ， 一一 般般 取取 胰胰 島島 較較 多多 的的 胰胰 腺腺 尾尾 部部 ， 脊脊 髓髓 取取 腰腰 膨膨 大大 與與 頸頸 形形 大大 5. 選選 好好 組組 織織 塊塊 的的 切切 面面 縱縱 切切 或或 橫橫 切切 往往 往往 是是 顯顯 示示 組組 織織 結(jié)結(jié) 構(gòu)構(gòu) 明明 晰晰 的的 關(guān)鍵關(guān)鍵 。6. 保保 持持 材材

4、 料料 的的 清清 潔潔 組組 織織 塊塊 上上 如如 有有 血血 液液 、 污污 物物 、 粘粘 液液 、 食物食物 、 糞糞 便便 等等 ， 可可 用用 生生 理理 鹽鹽 水水 沖沖 洗洗 ， 然然 后后 再再 入入 固固 定定 液液 ， 但但 要要 注注 意意 防止防止 組組 織織 損損 傷傷 。l空腔性器官空腔性器官注意橫斷面和縱斷面注意橫斷面和縱斷面 保護(hù)內(nèi)皮和粘膜保護(hù)內(nèi)皮和粘膜橫斷：氣管、食管、血管橫斷：氣管、食管、血管縱斷：胃底、腸、心臟縱斷：胃底、腸、心臟心瓣膜心瓣膜左心室左心室左心左心房房l特殊的組織或者器官特殊的組織或者器官血液、骨髓：涂片血液、骨髓：涂片肌肉、神經(jīng)：肌肉、

5、神經(jīng)：骨、牙齒：脫鈣骨、牙齒：脫鈣 切片切片 酸1. 蒸 氣 固 定 法 比 較 細(xì) 小 而 薄 的 標(biāo) 本 ， 可 用 餓 酸 或 甲 醛 蒸 氣固 定 。 主 要 用 于 血 液 或 細(xì) 胞 涂 片 以 及 某 些 薄 膜 組 織 等 的 固 。 如血液 涂 片 ， 則 應(yīng) 在 血 片 未 干 燥 前 就 與 餓 酸 蒸 氣 接 觸2注 射 、 灌 注 固 定 法. 某 些 組 織 塊 由 于 體 積 過 大 或 固 定 掖極 難 滲 入 內(nèi) 部 或 需 要 對(duì) 整 個(gè) 臟 器 或 整 個(gè) 動(dòng) 物 進(jìn) 行 固 定 。如 肺 可 將 固 定 液 從 氣 管 或 支 氣 管 注 入入 .全 身

6、 灌 注 固 定 較 大 動(dòng) 物如 兔 、 貓 、 狗 、 猴 及 整 個(gè) 人 體 ,固 定 液 輸 入 后 ， 可 不 必 即 刻 取 材 。小 動(dòng) 物 ， 如 大 、 小 鼠 ，也可灌流固定. 3. 小 塊 組 織 固 定 法. 從 人 體 或 動(dòng) 物 取 下 的 小 塊 組 織 ， 須 立即 置 入 液 態(tài) 固 定 劑 中 進(jìn) 行 固 定 ， 這 是 應(yīng) 用 最 廣 泛 最 經(jīng) 常 的 方 法 。1. 迅 速 阻 止 組 織 、 細(xì) 胞 的 死 后 變 化 ， 防 止 自 溶 與 腐 敗 ， 使 之盡 量 保 持 生 前 的 狀 態(tài) 與 結(jié) 構(gòu) 。2. 使 細(xì) 胞 內(nèi) 的 蛋 白 質(zhì) 、

7、 脂 肪 、 糖 ， 酶 等 成 分 轉(zhuǎn) 變 為 不 溶 性物 質(zhì) ， 以 保 持 其 原 有 狀 態(tài) 。 3. 使 組 織 內(nèi) 各 種 物 質(zhì) 成 分 產(chǎn) 生 不 同 的 折 光 率 ， 以 便 染 色 后 易于 鑒 別 和 觀 察 4. 使 組 織 塊 在 脫 水 、 包 埋 、 切 片 、 染 色 等 過 程 中 不 易 損 壞 。5使 不 同 組 織 成 分 對(duì) 染 料 有 不 同 的 親 和 力 ， 經(jīng) 過 染 色 處 理 后易 于 辨 認(rèn) 。 6. 防 止 細(xì) 胞 過 度 收 縮 或 膨 脹 而 失 去 其 原 有 形 態(tài) 結(jié) 構(gòu) 。7. 使 組 織 塊 硬 化 ， 便 于 制 作

8、 薄 片 。1. 組 織 塊 不 宜 過 大 ， 一 般 以 厚 度 5毫 米 ， 長 寬 不 超 過 15x15毫 米 。2. 固 定 液 的 量 一 般 以 組 織 塊 大 小 的 20倍 為 宜 3. 必 須 選 擇 滲 透 力 強(qiáng) ， 又 不 使 組 織 過 度 收 縮 或 膨 脹 的 試 劑做固定劑.l固定液：固定液：10%中性福爾馬林中性福爾馬林l固定時(shí)間：室溫固定時(shí)間：室溫3個(gè)小時(shí)，個(gè)小時(shí)，1個(gè)小時(shí)后修塊。個(gè)小時(shí)后修塊。l固定方法：固定方法：容器底部墊上脫脂棉或者濾紙。容器底部墊上脫脂棉或者濾紙。肺臟：液體表面覆蓋脫脂棉。肺臟：液體表面覆蓋脫脂棉?？涨慌K器：漿膜面平鋪在紙板上用大

9、頭釘固定?？涨慌K器：漿膜面平鋪在紙板上用大頭釘固定。 膽囊放在單獨(dú)的容器內(nèi)。膽囊放在單獨(dú)的容器內(nèi)。腦、脊髓、松軟的腫瘤、病變組織：先固定后切開。腦、脊髓、松軟的腫瘤、病變組織：先固定后切開。 腦最好懸吊在固定液中。腦最好懸吊在固定液中。睪丸、囊性組織：向腔內(nèi)注入較高濃度的固定液。睪丸、囊性組織：向腔內(nèi)注入較高濃度的固定液。骨骼標(biāo)本：剝離軟組織后鋸成小塊固定。骨骼標(biāo)本：剝離軟組織后鋸成小塊固定。垂體等較小組織：擦鏡紙包好滴少量伊紅標(biāo)記后固定。垂體等較小組織：擦鏡紙包好滴少量伊紅標(biāo)記后固定。沖洗和保存沖洗和保存經(jīng)過長時(shí)間福爾馬林固定和保存的組織要充分水經(jīng)過長時(shí)間福爾馬林固定和保存的組織要充分水洗，

10、否則影響核的染色。洗，否則影響核的染色。一般置于一般置于7080%酒精中酒精中40c保存。當(dāng)酒精混濁時(shí)，保存。當(dāng)酒精混濁時(shí)，更換新的酒精。更換新的酒精。l扭曲變形與過度硬脆扭曲變形與過度硬脆容器過??；標(biāo)本數(shù)量過多；固定時(shí)間過長。容器過??；標(biāo)本數(shù)量過多；固定時(shí)間過長。取材過于薄小，尤其疏松結(jié)締組織。取材過于薄小，尤其疏松結(jié)締組織。l表層過度，中間沒有固定透表層過度，中間沒有固定透取材過厚過大；固定時(shí)間不足；固定液失效。取材過厚過大；固定時(shí)間不足；固定液失效。固定液濃度高、滲透力強(qiáng)，表面快速硬化。固定液濃度高、滲透力強(qiáng)，表面快速硬化。l局部固定不佳局部固定不佳組織與組織重疊；組織與容器接觸；組織露

11、出液面。組織與組織重疊；組織與容器接觸；組織露出液面。注意：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?。注意：根?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?。l（ 一 ） 脫 水 的 意 義 與 目 的l 常 用 的 固 定 劑 中 含 有 很 多 水 分 ， 在 石 蠟 或 火 棉 膠 包 埋 前 。 必 須l用 某 些 溶 劑 逐 步 將 組 織 塊 吸 收 的 水 分 置 換 出 來 ， 再 讓 石 蠟 或 火 棉l膠 將 該 溶 荊 里 換 ， 完 成 包 埋 步 驟 。 將 組 織 塊 內(nèi) 水 份 置 換 的 過 程 就l叫 脫 水 。l 脫 水 時(shí) 必 須 由 低 濃 度 脫 水 劑 開 始 ， 逐 步

12、轉(zhuǎn) 入 高 濃 度 脫 水 劑 ，l以 防 組 織 過 度 收 縮 而 變 形 ， 或 脫 水 不 完 全 而 影 響 制 片 效 果 。l 脫 水 劑 必 須 具 有 下 列 特 性 ： 脫 水 劑 能 與 水 按 比 例 混 合 ，l 高 濃 度 ， 一 般 指 不 含 水 份 ， 脫 水 劑 也 能 與 透 明 劑混 合 。前二者特 性 能 達(dá) 到 逐 步 除 去 組 織 塊 內(nèi) 的 水 份 ， 使 組 織 塊 內(nèi) 的 水 份 全 部 被脫 水 劑 所 取 代 ， 后二者 特 性 則 為 透明步驟的 透 明 劑 完 全 取 代 組 織l內(nèi) 的 脫 水 劑 創(chuàng) 造 條 件 。l 脫 水 時(shí)

13、 間 應(yīng) 視 組 織 塊 的 大 小 及 厚 度 而 定 ， 大 致 處 理 如 下 ： 組l織 塊 為 3-5毫 米 厚 者 ， 各 級(jí) 酒 精 為 3-6小 時(shí) ， 無 水 酒 精 對(duì) 組 織l有 脆 化 作 用 ， 浸 泡 時(shí) 間 還 應(yīng) 縮 短 。 實(shí) 質(zhì) 性 器 官 ， 如 腎 、 脾 和淋 巴 結(jié) 等 ， 在 酒 情 中 浸 泡 時(shí) 間 太 久 易 于 硬 脆 ， 脂 肪 組 織 與 疏 松 結(jié)締 組 織 在 酒 精 中 浸 飽 的 時(shí) 間 要 長 ， 特 別 是 在 95 酒 精 中 ， 以 盡 量溶 去 脂 肪 ， 并 脫 凈 殘 存 的 水 份 ， 有 利 于 包 埋 劑 滲

14、 入 組 織 內(nèi) 。l目的：利于石蠟包埋劑滲入。目的：利于石蠟包埋劑滲入。l酒精脫水：酒精脫水：70%和和80%：可以長期保存：可以長期保存90%、95%：2個(gè)小時(shí)。個(gè)小時(shí)。100% i、 ii：各：各1小時(shí)。小時(shí)。注意：注意：某些檢查，不能經(jīng)過低濃度酒精脫水。如糖原、尿酸結(jié)晶。某些檢查，不能經(jīng)過低濃度酒精脫水。如糖原、尿酸結(jié)晶。肝、脾、淋巴結(jié)：適當(dāng)縮短在無水乙醇內(nèi)的時(shí)間。肝、脾、淋巴結(jié)：適當(dāng)縮短在無水乙醇內(nèi)的時(shí)間。脂肪、疏松結(jié)締組織、腦：適當(dāng)延長脫水時(shí)間。脂肪、疏松結(jié)締組織、腦：適當(dāng)延長脫水時(shí)間。l二甲苯二甲苯i和和ii：各：各10分鐘左右。分鐘左右。l透明時(shí)間不宜太長，否則組織收縮硬化。透

15、明時(shí)間不宜太長，否則組織收縮硬化。第一第一，透明是在組織脫水后浸蠟前進(jìn)行，其目的不在于，透明是在組織脫水后浸蠟前進(jìn)行，其目的不在于為了顯微鏡觀察，而是作為從脫水劑進(jìn)入包埋劑的橋?yàn)榱孙@微鏡觀察，而是作為從脫水劑進(jìn)入包埋劑的橋梁。因此，透明劑必須既能與酒精混合，又能與石蠟梁。因此，透明劑必須既能與酒精混合，又能與石蠟融合無間，二甲苯即具此性質(zhì)，故被選為常用的透明融合無間，二甲苯即具此性質(zhì)，故被選為常用的透明劑。劑。 第二第二，透明是在片子脫水與封藏之間進(jìn)行。其目的除，透明是在片子脫水與封藏之間進(jìn)行。其目的除了作為從脫水劑進(jìn)入封藏劑的橋梁外，尚有使標(biāo)本透了作為從脫水劑進(jìn)入封藏劑的橋梁外，尚有使標(biāo)本透

16、明而便于觀察的作用。明而便于觀察的作用。 l透蠟 是指將材料中的透明劑逐步清除，以至完全由石蠟充分滲透。l石蠟熔點(diǎn)選擇石蠟熔點(diǎn)選擇54580c，浸蠟溫度較熔點(diǎn)高，浸蠟溫度較熔點(diǎn)高230c。l較硬的致密組織，例如骨、軟骨、肌腱、皮較硬的致密組織，例如骨、軟骨、肌腱、皮膚、子宮肌選用熔點(diǎn)較高的石蠟。膚、子宮肌選用熔點(diǎn)較高的石蠟。l疏松及脆嫩組織，例如腦、脊髓、小動(dòng)物肝疏松及脆嫩組織，例如腦、脊髓、小動(dòng)物肝脾選用熔點(diǎn)較低的石蠟。脾選用熔點(diǎn)較低的石蠟。l石蠟石蠟i：1020分鐘。分鐘。l石蠟石蠟ii：2030分鐘。分鐘。l石蠟石蠟iii：3040分鐘。分鐘。l是把被石蠟浸透的材料連同熔化的石蠟一起倒入

17、一定形狀的容器內(nèi)，并立即投入冷水中，使它凝固成含材料的蠟塊，以備切片。l新蠟反復(fù)熔化、冷凝，改善密度，提高韌性，質(zhì)新蠟反復(fù)熔化、冷凝，改善密度，提高韌性，質(zhì)地均勻。地均勻。l包埋溫度包埋溫度65700c.l準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作 熔蠟備用；預(yù)熱包埋用具熔蠟備用；預(yù)熱包埋用具l注蠟、取放組織注蠟、取放組織 切面向下切面向下l擺正壓平擺正壓平 保留適當(dāng)距離保留適當(dāng)距離l附貼標(biāo)記附貼標(biāo)記l移置冷凝移置冷凝l修整蠟塊修整蠟塊l粘貼標(biāo)記粘貼標(biāo)記l包埋l修塊 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)l實(shí)質(zhì)性器官：最大切面向下。實(shí)質(zhì)性器官：最大切面向下。l空腔性器官：管壁切面向下空腔性器官：管壁切面向下l相同性質(zhì)的小塊組織可以包埋在一個(gè)蠟塊相同性質(zhì)的小塊組織可以包埋在一個(gè)蠟塊中。中。l難切的組織單獨(dú)包埋。難切的組織單獨(dú)包埋。l操作要迅速，組織不能在空氣中停留太久。操作要迅速，組織不能在空氣中停留太久。l準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作l切片切片 通常通常46微米微米l展片展片 550cl附貼附貼 蛋白甘油