島津GPC基礎(chǔ)知識(shí)注意事項(xiàng)

1、優(yōu)秀精品課件文檔資料2 2gpc基礎(chǔ)知識(shí)島津國(guó)際貿(mào)易島津國(guó)際貿(mào)易( (上海上海) )有限公司有限公司分析中心分析中心3shimadzu international trading (shanghai) co. limited3 3sec定義v sec全稱size exclusion chromatography(體積排阻色譜，或者尺寸排阻色譜）v sec定義：是利用多孔凝膠固定相的獨(dú)特特性，而產(chǎn)生的一種主要依據(jù)分子尺寸大小的差異來(lái)分離的液相色譜方法。4shimadzu international trading (shanghai) co. limited4 4sec分類v 凝膠滲透色譜凝膠滲

2、透色譜 (gpc)(gpc)v主要用于聚合物領(lǐng)域v以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相(氯仿，thf(四氫呋喃)，dmf(二甲基甲先胺)v常用固定相填料：苯乙烯二乙烯基苯共聚物v 凝膠過(guò)濾色譜凝膠過(guò)濾色譜 (gfc)(gfc)v主要用于生命科學(xué)領(lǐng)域v以水溶液為流動(dòng)相v常用固定相填料：親水性有機(jī)凝膠(葡聚糖，瓊脂糖，聚丙烯酰胺等)5shimadzu international trading (shanghai) co. limited5 5gpc用途v 高聚物的分子量及其分布是高聚物最基本的參數(shù)之一。高聚物的許多性質(zhì)是與分子量有關(guān)的。例如沖擊強(qiáng)度、模量、拉伸強(qiáng)度、耐熱、耐腐蝕性都與高聚物的分子量和分子量分布有關(guān)

3、。6shimadzu international trading (shanghai) co. limited6 6gpc分離原理v 固定相是多孔填料，小分子樣品可以進(jìn)入孔徑內(nèi)部v 樣品與固定相之間無(wú)作用力v 遷移時(shí)間不同孔穴孔穴填充物填充物顆顆粒粒 大大 中中小小樣樣品品7shimadzu international trading (shanghai) co. limited7 7mw與rt之間的關(guān)系log (mw)排阻極限排阻極限滲透極限滲透極限gpc柱柱8shimadzu international trading (shanghai) co. limited8 8gpc術(shù)語(yǔ)v 排阻極

4、限排阻極限排阻極限是指不能進(jìn)入凝膠顆粒孔穴內(nèi)部的最小分子的分子量。所有大于排阻極限的分子都不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，直接從凝膠顆粒外流出，所以它們同時(shí)被最先洗脫出來(lái)。排阻極限代表一種凝膠能有效分離的最大分子量，大于這種凝膠的排阻極限的分子用這種凝膠不能得到分離。隨固定相不同，排阻極限范圍約在 400至60106之間。v 滲透極限滲透極限能夠完全進(jìn)入凝膠顆粒孔穴內(nèi)部的最大分子的分子量。在選擇固定相時(shí)，應(yīng)使欲分離樣品粒子的相對(duì)分子質(zhì)量落在在選擇固定相時(shí)，應(yīng)使欲分離樣品粒子的相對(duì)分子質(zhì)量落在固定相的滲透極限和排阻極限之間。固定相的滲透極限和排阻極限之間。 9shimadzu international

5、trading (shanghai) co. limited9 9平均分子量計(jì)算公式數(shù)均分子量數(shù)均分子量 重均分子量重均分子量 z均分子量均分子量z+1均分子量均分子量hi： 峰高峰高 mi：分子量：分子量mw =s s mi his s hi mn =s s his s (hi / mi)mz =mi 2his s mi hi mz+1 =mi 3his s mi 2hi 10shimadzu international trading (shanghai) co. limited1010平均分子量含義v 數(shù)均分子量數(shù)均分子量 (mn)(mn)v拉力、抗沖擊性拉力、抗沖擊性v 重均分子量重均

6、分子量 (mw)(mw)v脆度脆度v z z 均分子量均分子量 (mz)(mz)v彈性、硬度彈性、硬度分布寬度指數(shù)分布寬度指數(shù)d(d(分散度分散度)= mw/mn)= mw/mn對(duì)于多分散試樣對(duì)于多分散試樣 mn mn mw mw mzmz11shimadzu international trading (shanghai) co. limited1111高聚物多分散性表征v 樣品間分子量分布寬度的比較，最直接的方法是樣品間分子量分布寬度的比較，最直接的方法是將實(shí)驗(yàn)所得到的分子量分布曲線作對(duì)比。將實(shí)驗(yàn)所得到的分子量分布曲線作對(duì)比。v 分子量分布曲線有兩種形式：分子量分布曲線有兩種形式：v用累積

7、重量分布對(duì)分子量作圖的曲線叫做積分分布曲用累積重量分布對(duì)分子量作圖的曲線叫做積分分布曲線。線。v用重量分?jǐn)?shù)用重量分?jǐn)?shù)w w對(duì)分子量作圖的曲線叫做微分分布曲線；對(duì)分子量作圖的曲線叫做微分分布曲線；v 還有一種更一般化且最常用的方法就是重均數(shù)均還有一種更一般化且最常用的方法就是重均數(shù)均比，即：比，即：mw/mnmw/mn。mdmmwmi0)()(mdmmwmi0)()()(/ )(mwdmmdi)(/ )(mwdmmdi12shimadzu international trading (shanghai) co. limited1212測(cè)定聚合物分子量的方法v 直接方法直接方法v滲透壓方法 (fo

8、r mn)v光散射方法 (for mw)v粘度方法 (for mv)v超速離心方法 (for mz)v 間接方法間接方法vgpc (for mn, mw and mz)用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣得到分子量校正曲線，間接算出聚合物樣品的相對(duì)分子量。如和標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)構(gòu)不同，還需進(jìn)行相應(yīng)的計(jì)算才能得到聚合物樣品自身的分子質(zhì)量。13shimadzu international trading (shanghai) co. limited1313為什么要用gpc方法v 相對(duì)分子量分布(多分散性指數(shù))對(duì)聚合物的性質(zhì)有重要影響。v 在相對(duì)分子質(zhì)量分布（多分散性指數(shù)）成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)后，經(jīng)典方法卻不能同時(shí)測(cè)定聚合物的相對(duì)分子

9、質(zhì)量分布。凝膠滲透色譜(gpc)的應(yīng)用改善了測(cè)試條件，并提供了可以同時(shí)測(cè)定聚合物的相對(duì)分子質(zhì)量及其分布的方法，使其成為測(cè)定高分子相對(duì)分子質(zhì)量及其分布最常用、快速和有效的技術(shù)。 14shimadzu international trading (shanghai) co. limited1414gpc系統(tǒng)配置泵泵進(jìn)樣進(jìn)樣器器色色譜譜柱柱柱溫箱柱溫箱檢測(cè)檢測(cè)器器thf, 氯氯仿仿, dmf示差示差檢測(cè)檢測(cè)器器需要gpc軟件才可計(jì)算mw15shimadzu international trading (shanghai) co. limited1515配置實(shí)例no.產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品名稱型

10、號(hào)型號(hào)數(shù)量數(shù)量1 1228-45011-38228-45011-38系統(tǒng)控制器系統(tǒng)控制器cbm-20alitecbm-20alite1 12 2228-45000-38228-45000-38輸液?jiǎn)卧斠簡(jiǎn)卧猯c-20adlc-20ad1 13 3228-45018-32228-45018-32在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)dgu-20a3dgu-20a31 14 4228-45041-91228-45041-91容器盤容器盤- -1 15 5228-45006-38228-45006-38自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器sil-20asil-20a1 16 6228-46606-96228-46606-96自動(dòng)進(jìn)

11、樣器用自動(dòng)進(jìn)樣器用gpcgpc對(duì)應(yīng)組件對(duì)應(yīng)組件- -1 17 7228-45009-38228-45009-38柱溫箱柱溫箱cto-20acto-20a1 18 8228-45095-38228-45095-38示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器rid-10arid-10a1 19228-20810-91228-20810-91色譜柱色譜柱gpc-80m110228-20812-91228-20812-91保護(hù)柱保護(hù)柱gpc-800p111223-05671-92223-05671-92lclc工作站工作站lcsolution singlelcsolution single1 112223-0565

12、5-92223-05655-92gpcgpc軟件軟件lcsolution gpclcsolution gpc1 116shimadzu international trading (shanghai) co. limited1616gpc系統(tǒng)與常規(guī)hplc系統(tǒng)區(qū)別v 檢測(cè)器檢測(cè)器v gpc系統(tǒng)標(biāo)配示差折光檢測(cè)器v 常規(guī)hplc有多種檢測(cè)器可選v 梯度梯度v gpc系統(tǒng)是等度系統(tǒng)，并且用并聯(lián)泵v 常規(guī)hplc可以是等度或者梯度v 管路管路v gpc系統(tǒng)采用全不銹鋼流路v 常規(guī)hplc用peek或者不銹鋼流路v 自動(dòng)進(jìn)樣器針密封自動(dòng)進(jìn)樣器針密封v gpc系統(tǒng)采用vespel針密封，適用thf、氯仿

13、、dmf等v 常規(guī)hplc用peek針密封17shimadzu international trading (shanghai) co. limited1717lcsolution gpc軟件該 gpc 可選軟件可在 lcsolution 上無(wú)縫地運(yùn)行。作為 lcsolution 的一部分，此軟件擴(kuò)展了方法、數(shù)據(jù)和報(bào)告格式文件的功能，并可使用 lcsolution 的所有功能特性。特點(diǎn)：1) 可以操作 gpc 與 lc 工作站2) 對(duì)方法和數(shù)據(jù)文件的統(tǒng)一管理3) 兼容多個(gè)系統(tǒng)和多個(gè)檢測(cè)器（包括 pda 檢測(cè)器）4) 同時(shí)輸出色譜圖報(bào)告和 gpc 計(jì)算結(jié)果5) 可以根據(jù)控制樣品進(jìn)行保留時(shí)間的校準(zhǔn)

14、18shimadzu international trading (shanghai) co. limited1818gpc色譜柱系列v shim-pack gpc-80x for shim-pack gpc-80x for thfthfv shim-pack gpc-80xc for shim-pack gpc-80xc for 氯仿氯仿v shim-pack gpc-80xd for shim-pack gpc-80xd for dmfdmfv 排阻極限排阻極限 ( (聚苯乙烯聚苯乙烯) )v1.5x101.5x103 3(gpc-801), 5x10(gpc-801), 5x103 3(

15、gpc-802), 2x10(gpc-802), 2x104 4(gpc-(gpc-8025), 7x108025), 7x104 4(gpc-803), 4x10(gpc-803), 4x105 5(gpc-804), (gpc-804), 4x104x106 6(gpc-805), 4x10(gpc-805), 4x107 7(gpc-806)(gpc-806)，4x104x107 7 (mixed (mixed gelgel，gpc-80m), 2x10gpc-80m), 2x108 8(gpc-807)(gpc-807)19shimadzu international trading

16、(shanghai) co. limited1919gpc色譜柱類型v 普通凝膠柱普通凝膠柱v按照不同的排阻極限分成很多種型號(hào)(如gpc-80x)v每種排阻極限的柱子使用同一種凝膠顆粒v在一段范圍內(nèi)校正曲線成線性v 混合凝膠柱混合凝膠柱v一種型號(hào)(如gpc-80m)v使用混合凝膠顆粒v在較寬范圍內(nèi)校正曲線都成線性，可消除不同柱子串聯(lián)時(shí)可能產(chǎn)生非線性校正曲線導(dǎo)致結(jié)果偏差的問(wèn)題20shimadzu international trading (shanghai) co. limited2020gpc色譜柱類型混合凝膠柱混合凝膠柱gpc-80m21shimadzu international tra

17、ding (shanghai) co. limited2121gpc色譜柱選擇v 按照樣品所溶解的溶劑來(lái)選擇柱子所屬系列按照樣品所溶解的溶劑來(lái)選擇柱子所屬系列vthf、氯仿、dmfv必須選擇合適的溶劑來(lái)溶解聚合物v 按照樣品分子量范圍來(lái)選擇柱子型號(hào)按照樣品分子量范圍來(lái)選擇柱子型號(hào)v樣品分子量應(yīng)該處在排阻極限和滲透極限范圍內(nèi)，并且最好是處在校正曲線線性范圍內(nèi)22shimadzu international trading (shanghai) co. limited2222標(biāo)樣v 聚苯乙烯聚苯乙烯(ps(ps，溶于各種有機(jī)溶劑，溶于各種有機(jī)溶劑) )v 聚甲基丙烯酸甲酯聚甲基丙烯酸甲酯(pmma

18、)(pmma)v 聚環(huán)氧乙烷聚環(huán)氧乙烷 (peo(peo，也叫聚氧化乙烯，溶于水，也叫聚氧化乙烯，溶于水) )v 聚乙二醇聚乙二醇(peg(peg，溶于水，溶于水) )(peo與peg的碳鏈骨架相同，但是其合成原料和封端不同，由于原料的性質(zhì)，使其產(chǎn)物的分子量和結(jié)構(gòu)都有一定的區(qū)別。peo常是指一端為甲基封端，一端為羥基封端的聚環(huán)氧乙烷，而peg一般是兩端都是羥基封端的聚乙二醇。) 23shimadzu international trading (shanghai) co. limited2323校正曲線v 逐一注入聚合物標(biāo)樣以確定分子量與保留時(shí)間的關(guān)系逐一注入聚合物標(biāo)樣以確定分子量與保留時(shí)間的

19、關(guān)系idtimemw114.797853000215.559380000316.239186000416.888100000517.47648000618.03223700718.49512200819.0055800常用線性擬合或者三次方擬合15.016.017.018.0min4.04.55.05.56.0log(m.w.)1234567824shimadzu international trading (shanghai) co. limited2424gpc校正方法v 窄分布標(biāo)樣校正法窄分布標(biāo)樣校正法v選用與被測(cè)樣品同類型的單分散性(d1.1)標(biāo)樣，先用其他方法精確測(cè)定其平均相對(duì)分子質(zhì)

20、量，然后與被測(cè)樣品在同樣的條件下進(jìn)行g(shù)pc分析。 v 普適校正法普適校正法v此法的優(yōu)點(diǎn)是只要用一種高聚物（一般用窄分布聚苯乙烯）作標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以測(cè)定其他類型的聚合物，但先決條件是2種高聚物的k和值必須己知。v 漸進(jìn)試差法漸進(jìn)試差法( (寬分布標(biāo)樣校正法寬分布標(biāo)樣校正法) )v這種方法不需要窄分布樣品，其標(biāo)樣可為13個(gè)不同相對(duì)分子質(zhì)量的寬分布標(biāo)樣（平均相對(duì)分子質(zhì)量精確測(cè)量，mw和mn為已知），采用數(shù)學(xué)處理方法得到漸進(jìn)試差法的校正曲線。25shimadzu international trading (shanghai) co. limited2525窄分布標(biāo)樣校正法v 要有要有5 5個(gè)以上的不同

21、分子量的單分散標(biāo)樣來(lái)制作個(gè)以上的不同分子量的單分散標(biāo)樣來(lái)制作校正曲線校正曲線v 樣品最好與標(biāo)樣是相同的結(jié)構(gòu)。樣品最好與標(biāo)樣是相同的結(jié)構(gòu)。v如果樣品與標(biāo)樣結(jié)構(gòu)完全一樣，則結(jié)果不需再修正v如果樣品結(jié)構(gòu)與標(biāo)樣結(jié)構(gòu)不一樣，并且樣品是單鏈結(jié)構(gòu)，則可以用qf因子比來(lái)修正結(jié)果v如果樣品結(jié)構(gòu)與標(biāo)樣結(jié)構(gòu)不一樣，并且樣品帶有支鏈，則無(wú)法使用窄分布標(biāo)樣校正法26shimadzu international trading (shanghai) co. limited2626窄分布標(biāo)樣校正法-分子量轉(zhuǎn)換v qfqf因子比因子比(rqf)(rqf)vqfqf定義：?jiǎn)挝绘滈L(zhǎng)分子量定義：?jiǎn)挝绘滈L(zhǎng)分子量v僅適用于單鏈聚合物僅

22、適用于單鏈聚合物27shimadzu international trading (shanghai) co. limited2727聚苯乙烯的qfv qf=104 / 2.50 = qf=104 / 2.50 = 41.541.5 -( ch-ch -( ch-ch2 2 ) )n n- - c c6 6h h5 5 單位鏈長(zhǎng)的單位鏈長(zhǎng)的mw = mw = 104104v 一個(gè)單位長(zhǎng)度為一個(gè)單位長(zhǎng)度為 2.502.50 a. a.vc-c c-c 鍵長(zhǎng)度約為鍵長(zhǎng)度約為 1.54 a.1.54 a.vc-c-c c-c-c 鍵角度約為鍵角度約為 109109度度. .v一個(gè)單位長(zhǎng)度計(jì)算如下：一

23、個(gè)單位長(zhǎng)度計(jì)算如下： 1.54 x sin(109 / 2) x 2 =2.501.54 x sin(109 / 2) x 2 =2.5028shimadzu international trading (shanghai) co. limited2828聚苯乙烯的qfcccc1091.54 a1.54 x sin (109/2)1.54 x sin (109/2) x 22.50 acc29shimadzu international trading (shanghai) co. limited2929聚異丁烯的qfv qf = 56 / 2.50 = qf = 56 / 2.50 = 22

24、.322.3 ch ch3 3 -(c-ch -(c-ch2 2) )n n- - ch ch3 3 單位鏈長(zhǎng)的單位鏈長(zhǎng)的mw = mw = 5656v 一個(gè)單位長(zhǎng)度為一個(gè)單位長(zhǎng)度為 2.502.50 a. a.30shimadzu international trading (shanghai) co. limited3030rqfv 聚異丁烯與聚苯乙烯的聚異丁烯與聚苯乙烯的qfqf之比為之比為 rqf.rqf. rqf = 22.3 / 41.5 = 0.537 rqf = 22.3 / 41.5 = 0.537 m m 聚異丁烯聚異丁烯= m = m gpcgpc x 0.537 x 0

25、.53731shimadzu international trading (shanghai) co. limited3131rqf的制約因素v rqf rqf 僅適用于單鏈聚合物僅適用于單鏈聚合物v 如果聚合物有支鏈結(jié)構(gòu)如果聚合物有支鏈結(jié)構(gòu), mw, mw的計(jì)算就有誤的計(jì)算就有誤32shimadzu international trading (shanghai) co. limited3232普適校正法v 用一種高聚物標(biāo)樣做校正曲線，常用聚苯乙烯用一種高聚物標(biāo)樣做校正曲線，常用聚苯乙烯v 樣品結(jié)構(gòu)可以與標(biāo)樣不一樣，并且可以有支鏈樣品結(jié)構(gòu)可以與標(biāo)樣不一樣，并且可以有支鏈v 樣品及標(biāo)樣在流動(dòng)相

26、溶劑中的樣品及標(biāo)樣在流動(dòng)相溶劑中的k k和和值必須己知值必須己知v可以用粘度法來(lái)測(cè)定k和的值33shimadzu international trading (shanghai) co. limited3333普適校正法公式v gpcgpc反映的是淋洗體積與高聚物流體力學(xué)體積間的關(guān)系。反映的是淋洗體積與高聚物流體力學(xué)體積間的關(guān)系。根據(jù)根據(jù)einsteineinstein粘度關(guān)系：粘度關(guān)系： 為特性粘度；v表示聚合物鏈等效的流體力學(xué)體積；n為阿佛加德羅常數(shù)；m為聚合物分子量。根據(jù)上式可用m表示流體力學(xué)體積。 mnv / 5 .234shimadzu international trading (

27、shanghai) co. limited3434普適校正法公式v 當(dāng)樣品與標(biāo)樣有相同的淋洗體積時(shí)，下式成立：當(dāng)樣品與標(biāo)樣有相同的淋洗體積時(shí)，下式成立： 式中下標(biāo)式中下標(biāo)1 1為標(biāo)樣參數(shù)，為標(biāo)樣參數(shù)，2 2為樣品參數(shù)。為樣品參數(shù)。v 將將mark-houwinkmark-houwink方程方程(=km(=km) )代入，即得到：代入，即得到：從而得出：從而得出： 2121212lg11lg11lgkkmm11m11m2211mm21122111mkmk35shimadzu international trading (shanghai) co. limited3535漸進(jìn)試差法(寬分布標(biāo)樣校正

28、法)v 不需要窄分布標(biāo)樣，只需要寬分布標(biāo)樣不需要窄分布標(biāo)樣，只需要寬分布標(biāo)樣v 標(biāo)樣和樣品為同一種物質(zhì)標(biāo)樣和樣品為同一種物質(zhì)v 標(biāo)樣數(shù)量最少可以只有標(biāo)樣數(shù)量最少可以只有1 1個(gè)個(gè)v 標(biāo)樣的分子量標(biāo)樣的分子量mwmw和和mnmn必須已知必須已知v 標(biāo)樣校正曲線呈線性標(biāo)樣校正曲線呈線性36shimadzu international trading (shanghai) co. limited3636漸進(jìn)試差法(寬分布標(biāo)樣校正法)v 在一定條件下，有：在一定條件下，有：(1)(1)v 將標(biāo)樣色譜峰分成若干個(gè)切片，則：將標(biāo)樣色譜峰分成若干個(gè)切片，則：(2)(2)v 根據(jù)定義，有：根據(jù)定義，有： (3

29、) (4)(3) (4)v 將公式將公式(2)(2)代入公式代入公式(3)(3)和和(4)(4)，則：，則：(5)(5) (6) (6)v 標(biāo)樣的標(biāo)樣的mwmw和和mnmn已知，將已知，將hi,vihi,vi代入，軟件自動(dòng)算出代入，軟件自動(dòng)算出a,ba,b值。值。vbamlniiiiiwhmhmiiinmihihm)/()exp(iivbamiiiwhvbahm)exp()exp(/iiinvbahhm37shimadzu international trading (shanghai) co. limited3737gpc分析大致步驟v 根據(jù)樣品的特點(diǎn)選擇合適的根據(jù)樣品的特點(diǎn)選擇合適的gpc

30、gpc柱子和標(biāo)樣，并柱子和標(biāo)樣，并且確定采用的且確定采用的gpcgpc校正方法校正方法v 配制標(biāo)樣和樣品，用配制標(biāo)樣和樣品，用lcsolutionlcsolution進(jìn)樣得到色譜圖進(jìn)樣得到色譜圖v 用用lcsolution gpclcsolution gpc生成校正曲線并計(jì)算樣品平均生成校正曲線并計(jì)算樣品平均分子量，制作報(bào)告分子量，制作報(bào)告38shimadzu international trading (shanghai) co. limited3838gpc系統(tǒng)安裝注意事項(xiàng)v 安裝色譜柱安裝色譜柱v柱子串聯(lián)時(shí)排阻極限大的接前面v 管路選擇管路選擇v使用全不銹鋼流路，不能有peek材質(zhì)的部件

31、存在v 溶劑更換溶劑更換v水和氯仿不互溶v 最高壓力設(shè)置最高壓力設(shè)置v柱子串聯(lián)時(shí)將最高壓力設(shè)為所有柱子允許承受的最高壓力只和v 柱子使用注意事項(xiàng)柱子使用注意事項(xiàng)v一定要嚴(yán)格按照說(shuō)明書使用色譜柱(部分柱子不能用甲醇沖洗)39shimadzu international trading (shanghai) co. limited3939安裝色譜柱v 通常而言，分析結(jié)果與色譜柱組安裝的順序無(wú)關(guān)。盡管如此，為了提高分離度和延長(zhǎng)色譜柱壽命，應(yīng)按孔徑由大到小順序安裝色譜柱，即排阻極限大的接前面，排阻極限小的接后面。v 原因在于，孔徑越大，越粗糙，越能承受外來(lái)物質(zhì)的積累污染。而且，樣品中高分子量的物質(zhì)對(duì)樣

32、品的粘度影響最大。如果大分子先被分離，粘度下降更快，對(duì)色譜柱的壓力降低。40shimadzu international trading (shanghai) co. limited4040gpc分析注意事項(xiàng)v 如何配制標(biāo)樣和樣品如何配制標(biāo)樣和樣品v 系統(tǒng)平衡系統(tǒng)平衡v 柱子沖洗及保存柱子沖洗及保存v 校正曲線有效時(shí)間校正曲線有效時(shí)間v 親水性聚合物分析親水性聚合物分析v 積分參數(shù)的設(shè)置積分參數(shù)的設(shè)置( (基線及切片數(shù)基線及切片數(shù)) )41shimadzu international trading (shanghai) co. limited4141gpc標(biāo)樣配制v 由于凝膠色譜中濃度檢測(cè)通

33、常使用示差折光檢測(cè)器，其靈敏度不太高，所以試樣的濃度不能配置得太稀。但另一方面色譜柱的負(fù)荷量是有限的，濃度太大易發(fā)生“超載”現(xiàn)象。v 一般情況下，進(jìn)樣濃度按分子質(zhì)量大小的不同在0.050.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）范圍內(nèi)配置。分子質(zhì)量越大，溶液濃度越低。v 標(biāo)樣配制應(yīng)該嚴(yán)格按照標(biāo)樣說(shuō)明書進(jìn)行。通常室溫靜置12小時(shí)以上，然后輕輕混勻。絕對(duì)不能超聲或者劇烈振蕩來(lái)加速溶解。不要在配制過(guò)程中帶入污染物。v 溶液進(jìn)樣前應(yīng)先經(jīng)過(guò)過(guò)濾，以防止固體顆粒進(jìn)入色譜柱內(nèi)，引起柱內(nèi)堵塞，損壞色譜柱。42shimadzu international trading (shanghai) co. limited4242gpc標(biāo)樣配

34、制v 一種分子量的標(biāo)樣進(jìn)樣一次得到標(biāo)樣色譜圖，這樣的結(jié)果是最理想的。通常，為節(jié)約時(shí)間，可以將分子量相差較大(峰不會(huì)重合)的兩種標(biāo)樣配制在一個(gè)瓶中，然后進(jìn)樣，可以節(jié)約一半的標(biāo)樣分析時(shí)間。v 如8個(gè)不同分子量的標(biāo)樣可以按右表編成4組分別進(jìn)樣。組分子量1853000480002380000237003186000122004100000580043shimadzu international trading (shanghai) co. limited4343進(jìn)樣濃度范圍及體積v分子量范圍分子量范圍 樣品濃度樣品濃度v低于5,000 1.0%v5,00025,000 0.5%v25,000200,0

35、00 0.25%v200,0002,000,000 0.1%v高于2,000,000 0.05%v進(jìn)樣體積進(jìn)樣體積v50-100ul之間(濃度在0.05%-0.5%之間)44shimadzu international trading (shanghai) co. limited4444gpc系統(tǒng)平衡v 安裝色譜柱之前，用兩通管連接管路，用流動(dòng)相安裝色譜柱之前，用兩通管連接管路，用流動(dòng)相替換系統(tǒng)后換上替換系統(tǒng)后換上gpcgpc柱子。柱子。( (注意溶劑互溶情況注意溶劑互溶情況) )v ridrid平衡操作平衡操作v分析開始前，用流動(dòng)相沖洗檢測(cè)器流路。v流動(dòng)相流速1ml/min，切換到r flo

36、w，使流動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)池的樣品池和參比池，沖洗20min左右。v然后切換r flow 流路數(shù)次，將氣泡趕出檢測(cè)池。v關(guān)閉r flow，等待基線平穩(wěn)。v當(dāng)balance 值高于50，進(jìn)行balance 調(diào)整。v 色譜柱平衡色譜柱平衡v等溶劑峰出峰后在經(jīng)過(guò)約一次分析時(shí)間后基線才能走平。45shimadzu international trading (shanghai) co. limited4545gpc柱子沖洗及保存v 如果在如果在24h24h內(nèi)再次使用色譜柱，無(wú)需特別的處理內(nèi)再次使用色譜柱，無(wú)需特別的處理步驟。如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)用保存溶劑沖洗色步驟。如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)用保存溶劑沖洗色譜柱，

37、拆下色譜柱，上緊堵頭，放入色譜柱盒子譜柱，拆下色譜柱，上緊堵頭，放入色譜柱盒子中保存。中保存。v 嚴(yán)格按照柱子說(shuō)明書中允許條件下使用。嚴(yán)格按照柱子說(shuō)明書中允許條件下使用。v 避免振動(dòng)和機(jī)械撞擊。避免振動(dòng)和機(jī)械撞擊。v 專柱專用，經(jīng)常改變樣品和溶劑會(huì)加速色譜柱惡專柱專用，經(jīng)常改變樣品和溶劑會(huì)加速色譜柱惡化，降低分離度。化，降低分離度。46shimadzu international trading (shanghai) co. limited4646gpc校準(zhǔn)曲線有效時(shí)間v 每周用標(biāo)樣評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果偏差大于每周用標(biāo)樣評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果偏差大于0.10m0.10m，重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

38、v 更換色譜柱后，需重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。更換色譜柱后，需重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。47shimadzu international trading (shanghai) co. limited4747親水性聚合物分析注意事項(xiàng)v 使用親水性使用親水性 gpc gpc 柱柱vshodex ohpak sb-800 hq seriesshodex ohpak sb-800 hq seriesvtosoh tsk-gel pw series tosoh tsk-gel pw series v 使用葡聚糖，聚乙二醇和聚氧化乙烯作為標(biāo)使用葡聚糖，聚乙二醇和聚氧化乙烯作為標(biāo)準(zhǔn)物準(zhǔn)物v 使用鹽如使用鹽如 nacl, nanon

39、acl, nano3 3, licl , licl 等以消除離子等以消除離子間引力間引力v 使用有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈等以消除疏水性使用有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈等以消除疏水性作用力作用力48shimadzu international trading (shanghai) co. limited4848gpc分析例v 色譜柱：色譜柱：shodex gpc kf-804,802,801shodex gpc kf-804,802,801三根串聯(lián)三根串聯(lián)v 保護(hù)柱：保護(hù)柱：shodex gpc kf-gshodex gpc kf-gv 流動(dòng)相：流動(dòng)相：thfthfv 流流 速：速：1.0ml/min1.0

40、ml/minv 柱柱 溫：溫：5050v 進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：50ul50ulv 檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器rid-10arid-10av 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品：ps(8ps(8個(gè)不同分子量標(biāo)樣個(gè)不同分子量標(biāo)樣) )49shimadzu international trading (shanghai) co. limited4949標(biāo)準(zhǔn)品及樣品配制方法 v 分子量校準(zhǔn)曲線所用的標(biāo)準(zhǔn)品為分子量校準(zhǔn)曲線所用的標(biāo)準(zhǔn)品為psps，有，有8 8種不同分子量的標(biāo)種不同分子量的標(biāo)品。將它們按下表分為品。將它們按下表分為4 4組，每組含組，每組含2 2種標(biāo)品，各稱約種標(biāo)品，各稱約4mg4mg左左右，然

41、后用右，然后用20ml20ml流動(dòng)相溶解，配成流動(dòng)相溶解，配成4 4個(gè)標(biāo)樣。個(gè)標(biāo)樣。v 稱量稱量5mg5mg樣品，加入樣品，加入4ml4ml流動(dòng)相溶解過(guò)夜。流動(dòng)相溶解過(guò)夜。ps standard分子量稱量值(mg)std_15600004.2206504.1std_21560004.0116004.0std_3660004.270004.1std_4285004.029504.250shimadzu international trading (shanghai) co. limited5050標(biāo)樣圖譜15.016.017.018.019.020.021.022.0min0.51.01.52.

42、02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.5mv4 (#1) 3 (#1) 2 (#1) 1 (#1) 四種顏色分別表示四個(gè)標(biāo)樣的圖譜51shimadzu international trading (shanghai) co. limited5151分子量校準(zhǔn)曲線16.017.018.019.020.021.0min3.503.754.004.254.504.755.005.255.505.75log(m.w.)1234567852shimadzu international trading (shanghai) co. limited5252樣品分析結(jié)果0.05.010.015.020.025.030.0min-1.00.01.0mv(x10)detector b 17.723mnmwmzmz1mw/mnmz/mw43679731781013771251211.675341.3853653shimadzu international trading (shanghai) co. limited5353ps1和ps2為同一操作人員測(cè)定同一樣品的兩次測(cè)定結(jié)果ps3為另一實(shí)驗(yàn)室對(duì)同一樣品測(cè)得的結(jié)果結(jié)果評(píng)價(jià)示例54shimadzu international trading (shanghai) co. limited5454v 重復(fù)性考察