2019年食品企業(yè)微生物檢測控制程序

1、1.0目的可測試的樣品量較多（如大于30ml）,從而能較準(zhǔn)確地反映測試樣品的微生物狀況。2.0范圍適用于較容易過濾樣品的微生物測試，如常規(guī)水、礦物質(zhì)水、糖、糖漿、碳酸飲料、茶飲 料等。參見附表1:薄膜過濾法測試內(nèi)容。3.0職責(zé)3.1 微生物品控員負(fù)責(zé)本sop的具體操作。3.2 品控主任及領(lǐng)班負(fù)責(zé)本so刖行的有效性.4.0定義無5.0程序5.1 佩特利式培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備5.1.1 接待測樣品數(shù)目取出經(jīng)過滅菌的佩特利式培養(yǎng)皿，另加一個培養(yǎng)皿作每種介質(zhì)的 對照組。在各個佩特利式培養(yǎng)皿上分別標(biāo)上待測試樣品的記號。5.1.2 用燃燒過的鉗子逐一夾出試驗包內(nèi)的滅菌吸收墊，放到每個佩特利式培養(yǎng)皿中。每夾出一個吸

2、收墊之后都要燒一次鉗子。5.1.3 輕輕打開佩特利式培養(yǎng)皿的蓋子，向吸收墊灑上1.82ml介質(zhì)，蓋上培養(yǎng)皿的蓋5.1.4 每一個佩特利式培養(yǎng)皿都應(yīng)有足夠的介質(zhì)浸泡吸收墊而使它隨后與濾膜粘附。然 而過量液體會使菌落擴(kuò)散從而使菌落計數(shù)不準(zhǔn)確。有需要時，調(diào)整推薦的培養(yǎng)劑 量，以便于粘附和菌體生長。培養(yǎng)介質(zhì)的配制及滅菌參見附表2。5.2 濾器座的準(zhǔn)備5.2.1 拆包取出已消毒的濾器座?；蛘邔⒌鬃?、漏斗、漏斗蓋用沸水煮沸1分鐘加以滅菌。5.2.2 用煮沸或燃燒過的鉗子，將過濾器中已滅菌部件安裝在過濾燒瓶或真空瓶上。用 燃燒過的鉗子細(xì)心從預(yù)先滅菌的一疊濾膜中取出一片濾膜放在濾座上。為了盡量 減少膜面受損，

3、鉗子夾持濾膜時只許夾濾膜邊緣。測試不同微生物用不同孔徑的濾膜：總菌數(shù)/大腸桿菌：0.45um酵母和霉菌：0.8um注：進(jìn)行礦物質(zhì)水和反滲透水的酵母和霉菌測試時，也用 0.45um的濾膜。5.2.3 用燃燒過的鉗子將漏斗和蓋放到座上。在漏斗冷卻至低于40七前不要加樣品。如漏斗蓋帶有管口，則在管口處裝上過濾器，或予以封住。5.2.4 用無菌的方法將樣品直接倒入已冷卻、消毒的漏斗中，將漏斗蓋放回。如果用取樣 勺取樣，燃燒取樣勺，用樣品沖洗取樣勺兩次，使其冷卻，第三次裝滿取樣勺，倒 入漏斗中，然后沖洗取樣勺，將取樣勺燃燒后放回有95%酉精的燒杯中。5.2.5 開動真空泵將樣品抽過濾膜。不要用真空泵抽干

4、燥的濾膜，這樣空氣會被抽走。如 果需要用水沖洗，用無菌的方法打開裝有無菌水的瓶子，用火焰燃燒螺紋，向漏斗 中倒入20ml水，將沖洗水抽過濾膜。待樣品、無菌沖洗水抽濾完之后，不要讓真 空泵繼續(xù)抽濾超過30秒鐘。5.2.6 用火焰燃燒過的鉗子細(xì)心夾起濾膜。輕微提起裝有吸收墊和培養(yǎng)劑的培養(yǎng)皿的蓋子 并放下薄膜,直到銀子相對側(cè)的薄膜邊靠到吸收墊邊為止。將薄膜貼在吸收墊上滾 動，以排除氣泡。蓋上蓋子，在工作臺上輕輕地拍打培養(yǎng)皿，以驅(qū)除薄膜下面的氣 泡。5.2.7 重復(fù)從步驟1開始，直到所有樣品都完成過濾。5.2.8 用無菌水重復(fù)上述過濾和平板培養(yǎng)程序做對照組試驗。每一種介質(zhì)做一個對照試驗。5.2.9 每

5、個平板上分別標(biāo)注對應(yīng)樣品的標(biāo)識。參閱sop-qa-mb-024樣品的標(biāo)識。5.3 樣品培養(yǎng)為了避免在濾膜表面形成冷凝水，所有培養(yǎng)皿必須倒轉(zhuǎn)放在培養(yǎng)箱中。5.3.1 在培養(yǎng)箱里放一個裝有水的燒杯，以保持一定的濕度。5.3.2 下面的溫度是最佳培養(yǎng)溫度：總菌數(shù)：35 c酵母和霉菌：28 c大腸桿菌：35 c如果共用一個培養(yǎng)箱，則把溫度調(diào)節(jié)至30±2oco5.4 菌落數(shù)的計算5.4.1 細(xì)菌總數(shù)必須在24小時及72小時之后計算總菌數(shù)。計算所有菌落（不管種類），并記錄最 高的數(shù)目。5.4.2 酵母和霉菌5.4.2.1 在培養(yǎng)72小時,96小時,120小時后點(diǎn)計酵母和霉菌數(shù)，記錄最高的數(shù)i5.

6、4.2.2 酵母和霉菌通常表現(xiàn)為圓的白色菌落，雖然有時也會出現(xiàn)顏色，在36-48小時之后，一些白色酵母菌由于吸收了介質(zhì)中的指示劑而會在菌落中 央逐漸 顯現(xiàn)藍(lán)色。5.4.2.3 霉菌菌落可有許多種顏色（如白、黃、紅、藍(lán)、黑），但由于外觀呈現(xiàn)細(xì)絨 毛狀或棉絮狀，所以容易辨認(rèn)。通常霉菌菌落大于細(xì)菌或酵母菌的菌 落。如果霉菌菌落在平皿上呈曼延的狀態(tài)，則記錄為“ spreaders”。5.4.2.4 細(xì)菌菌落通常吸收指示劑要比酵母菌快，可變?yōu)樗{(lán)色、綠色、藍(lán)綠色或褐 色。在這種培養(yǎng)基中，細(xì)菌菌落通常比酵母菌菌落小。5.4.3 大腸桿菌在35 c溫度下培養(yǎng)的大腸桿菌菌落是綠色或墨綠色，有強(qiáng)烈反射性的金屬光澤

7、。在24小時后計算有“光澤”的菌落。觀察大腸桿菌菌落的金屬光澤時可將濾膜傾斜到一個角度，使入射光在具有特殊金屬的菌落同沒有這種光澤的菌落之間產(chǎn)生 鮮明的對比。6.0參考文獻(xiàn)6.1 本文件支持綱要文件 r-qa-006微生物監(jiān)控綱要。6.2 相關(guān)sop參見附件一7.0附件/記錄7.1 附件：1.薄膜過濾法測試內(nèi)容測試內(nèi)容參考文件編號顆粒蔗糖的微生物測試sop-qa-mb-007常規(guī)水的微生物測試sop-qa-mb-008糖漿的微生物測試sop-qa-mb-009產(chǎn)品的微生物測試（薄膜過濾法）sop-qa-mb-010瓶/蓋的微生物測試sop-qa-mb-013棉球擦拭測試sop-qa-mb-0142.培養(yǎng)介質(zhì)的配制及滅菌表測試項 目介質(zhì)名稱供應(yīng)商名 稱配制方法滅菌方法細(xì)菌總 數(shù)m-tge brothdifco18g溶于1升蒸儲水 或去離子水中121124oc,15分鐘霉菌m-green yeast&mold brothmillipor e7.3g溶于100ml蒸儲水或去離子水中1210c,10 分鐘大腸桿 菌m-endo brothmillipor e48g溶于1升蒸儲水，加上20ml 95