-植物組織培養(yǎng)技術(shù)試驗(yàn)方案

1、第五章植物組織培養(yǎng)技術(shù)一、植物組織培養(yǎng)中的基本概念(1)植物組織培養(yǎng)技術(shù)：在無(wú)菌培養(yǎng)的條件下，將離體的植物器官(根，莖，葉，花，果實(shí)等)、組織(形成層，花藥組織等)、細(xì)胞(體細(xì)胞，生殖細(xì)胞等)以及原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，并給予適當(dāng)?shù)呐?養(yǎng)條件，使其長(zhǎng)成完整植株的過(guò)程。(2)理論依據(jù)：植物細(xì)胞的全能性，即指植物機(jī)體的每個(gè)細(xì)胞都含有該物種全套的基因組，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛力。(3)外植體：從活體植株上切下的，用于組織培養(yǎng)的細(xì)胞、組織和器官。一般包括莖尖、根、莖、葉、花、種 子等器官以及他們形成的體細(xì)胞胚等材料。分化：在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，由一種相同的細(xì)胞類型經(jīng)細(xì)胞分裂后逐漸在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和

2、功能上形成穩(wěn)定性差異，產(chǎn)生不同的細(xì)胞類群的過(guò)程稱為細(xì)胞分化。(5) 脫分化：已經(jīng)高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞，在切割損傷和培養(yǎng)物內(nèi)外因素的共同作用下，逐漸喪失 原來(lái)的分化結(jié)構(gòu)和功能，最后形成無(wú)組織的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織的過(guò)程。(6) 愈傷組織：在人工培養(yǎng)基上由外植體脫分化形成的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。(具有細(xì)胞分裂能力)。(7) 再分化：已經(jīng)脫分化的細(xì)胞在一定條件下，又可經(jīng)過(guò)愈傷組織或胚狀體，再分化出根和芽，形成完整植株這一過(guò)程叫作再分化。(8) 不定芽：在高等植物正常的個(gè)體發(fā)育中，芽一般是只從莖尖或葉腋等的一定位置生出。所以這種象頂芽、 腋芽、畐U芽等均在一定部位生出的芽，稱為定芽。與此相反，

3、凡從葉、根、或莖節(jié)間等通常不形成芽 的部位生出的芽，則統(tǒng)稱為不定芽。(9) 胚狀體：在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過(guò)程中，由一個(gè)或一些體細(xì)胞，經(jīng)過(guò)胚胎發(fā)生和發(fā)育過(guò)程，形 成的與合子胚相類似的結(jié)構(gòu)。二、植物組織培養(yǎng)過(guò)程(菊花為例)1、培養(yǎng)基的配制： 方法：培養(yǎng)基干粉配制法稱取培養(yǎng)基干粉42g加水加熱煮沸溶解后定溶至1L,按照需要的濃度分別加入激素。(其中生根用的植物激素NAA為0.2mg/1000ml)用1mol/L NaOH和1mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至5.8。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至150ml組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋 121 C，滅菌20min。2、菊花接種與培養(yǎng)：(1) 取材:取菊

4、花生長(zhǎng)旺盛的嫩枝。(2) 消毒：(省略) 流水沖洗后，加少許洗衣粉刷洗，流水沖20分鐘； 放入70%75%酒精中搖動(dòng)23次，持續(xù)30秒，無(wú)菌水沖洗 23次，用無(wú)菌吸水紙吸干； 在2% 10%的次氯酸鈉溶液中消毒 810分鐘，無(wú)菌水沖洗 23次，無(wú)菌吸水紙吸干。接種：減去嫩枝3-4厘米(帶有3-4片嫩葉)接到培養(yǎng)基中(注意：不能將一片葉子接入進(jìn) 去并務(wù)必要提前做好殺菌、消毒、滅菌措施)培養(yǎng)：將無(wú)菌苗培養(yǎng)到光照培養(yǎng)箱中，條件溫度：25度、光照：12小時(shí)，每隔一周觀察幼苗生長(zhǎng)情況(3) 愈傷組織與不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)選用合適的培養(yǎng)基分別對(duì)植物材料進(jìn)行愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)。(4) 繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)是繼初

5、代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴(kuò)繁培養(yǎng)過(guò)程，目的在于繁殖出相當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌苗。(5) 生根培養(yǎng)當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)到23cm時(shí)，選用生根培養(yǎng)基剪取無(wú)菌苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)。(6) 煉苗、移栽煉苗：當(dāng)無(wú)菌苗根系長(zhǎng)出約 3cm,把無(wú)菌苗進(jìn)行煉苗適應(yīng)外界環(huán)境。先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉 3天,再開(kāi)瓶鍛煉3天(以培養(yǎng)基上開(kāi)始長(zhǎng)出菌為宜)。移栽：去凈培養(yǎng)基，可先在滅過(guò)菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達(dá)再轉(zhuǎn)移到土壤中?！咀⒁馐马?xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)所使用的器材要嚴(yán)格滅菌，注意無(wú)菌操作，避免因染菌導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗;pH過(guò)低培養(yǎng)基不能凝固，所以要調(diào)整好2、pH值對(duì)培養(yǎng)基的硬度有影響，pH過(guò)高培養(yǎng)基變硬,培養(yǎng)基的pH值；操作不當(dāng)引起的雜菌污染實(shí)驗(yàn)結(jié)果,被雜菌污染培養(yǎng)基精選3不要將一片葉子接入到培養(yǎng)基中拓展實(shí)驗(yàn)：選取不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽不同外植體的培養(yǎng)基激素配比如下:葉片:6 BA : 2mg/LNAA:0.5mg/L將葉片切成 0.5cm*0.5cm 小塊莖段：6 BA :3 mg/LNAA:0.2 mg/L腋芽：6 BA :3 mg/LNAA:0.2 mg/L將嫩枝切成1cm莖段將嫩枝切成1 2cm帶腋芽的莖段最后調(diào)節(jié)PH值至6.0(1) 20天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見(jiàn)圖5:圖520天后菊花不同外植體形態(tài)