大孔樹脂富集蟾皮總二烯內(nèi)酯的工藝研究

1、大孔樹脂富集蟾皮總二烯內(nèi)酯的工藝研宄作者：趙大洲，邱鷹昆，陳繼永，劉淑梅，姜永濤 【關(guān)鍵詞】蟾皮二烯內(nèi)酯；，大孔樹脂；，工藝 摘要：目的建立大孔樹脂富集蟾皮總二烯內(nèi)酯的工藝。方法蟾皮醇提液減壓回收醇，經(jīng)石油醚脫脂，水層上dm 130 大孔樹脂，不同濃度乙醇梯度洗脫，tlc顯色結(jié)合hplc法 檢測二烯內(nèi)酯所在洗脫部位，比色法測定總二烯內(nèi)酯含量。 結(jié)果蟾皮中二烯內(nèi)酯集中在70%乙醇洗脫部分；采用本實驗 確定的工藝，制得蟾皮總二烯內(nèi)酯含量為，收率為。結(jié)論 該工藝可以較好地富集蟾皮總二烯內(nèi)酯。關(guān)鍵詞：蟾皮二娣內(nèi)釀；大孔樹脂；工藝stud yonenrichingtotalb ufadienolides

2、fromt heskinoftoadbymaco roporousresinabst ract : objectivetoes tablishprocessingmethodforenrichingtfromtheskinoftoadbymacoroporousresinextractionoftheski dbywater-petroleum iminatingalcohol. taddedtothecolumnof esin,andelutedgradotalbufadienol ides.methodsthealcohol noftoadwasseparate etherphasesaf

3、terel henthewaterpartwas dm130macoroporousr uallybyalcohol. thetotalbufadienolideinwhichpartbyhplcatwasdeterminedbyuvreferencesubstanceideswasgatheredin7ntoftotalbufadieno ctingratewas%. cone gtechnologycanbeusswasidentifiedtobendtlc,andtheconten ,telocinobufaginas ,attotalbufadienol0%alcohol. theco

4、ntelideswas%,theextra lusiontheprocessin edtoenrichtotalbufadienolidesfromthe skinoftoad.keywords:bufadienol ides; macoroporousresin ； process蟾皮為蟾蜍科動物中華大蟾蜍bufobufogarga rizanscantor 或黑眶蟾蜍 b ufomelanostictussc hneider 的 干燥表皮，臨床用于治療多種癌癥、小兒疳積、局限性硬皮 病及小兒腮腺炎等。現(xiàn)代藥理研究表明，二烯內(nèi)酯為其主要 活性成分，具有抗腫瘤、抗病原微生物及強心等作用廣4，

5、其分離工藝未見報道。本實驗旨在找到一種利用大孔樹脂分 離蟾皮總二烯內(nèi)酯的工藝條件。1儀器與材料waters 2487型高效液相色譜儀，water s515泵， discoveryc18柱；uv-2550型紫外分光光度計，1cm石英吸 收池；甲醇為分析純，乙腈為色譜純；遠華蟾毒精對照品；蟾皮藥材購自亳州藥材市場，產(chǎn)地為山東；大孔樹脂dm130 購于山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司。2 方法分析方法制得遠華蟾毒精對照品和蟾皮總二烯內(nèi)酯的 甲醇溶液，在200400nm之間紫外掃描，測得最大吸收峰分 別為nm和nm，確定hplc法及比色法檢測波長為299n m。光遠華蟾毒精測定方法waters2487型高效液

6、相色譜儀； waters515 泵；disco very c18 柱；檢測波長：299 nm;流 動相為乙腈水。蟾皮總二烯內(nèi)酯含量測定方法按分光光度法，在299 nm 測定遠華蟾毒精對照品不同濃度溶液的吸光度，以濃度為橫 坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程為： y=,相關(guān)系數(shù)：r=l。結(jié)果表明，遠華蟾毒精對照品在4w0 pg/ml線性關(guān)系良好。樣品溶液在299nm測定吸光度，按 比色法計算出蟾皮總二烯內(nèi)酯的含量。大孔樹脂上樣液的制備稱取蟾皮藥材150g，剪碎，加入 95%乙醇回流提取兩次，1500ml/次，合并兩次提取液，減壓 回收乙醇后，加入石油醚萃取兩次，水層約150ml，

7、即得。1遠華蟾毒精及贍皮總二烯內(nèi)酯紫外吸收光譜總二烯內(nèi)酯洗脫劑的選擇分別以水、30%乙醇、50%乙醇、 70%乙醇和95%乙醇各1000m 1洗脫大孔樹脂柱，每1000ml接收1份，以hplc法定性檢測遠華蟾毒精。tlc定性檢測各 餾分中的二烯內(nèi)酯5:硅膠g薄層板，丙酮氯仿環(huán)己烷 為展開劑，10%硫酸顯色；硅膠g薄層板，氯仿甲醇為展 開劑，20%三氯化銻氯仿溶液顯色?？偠?nèi)釀樣品的制備及檢驗稱取蟾皮藥材kg，制得上 樣液，上大孔樹脂柱，先用50%乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用70% 乙醇洗脫，70%洗脫液減壓干燥，得蟾皮總二烯內(nèi)酯，測定含 量，計算收率。3結(jié)果與討論h plc法檢測各洗脫液，僅70%

8、乙醇洗脫液中檢出遠華蟾 毒精，與對照品對照，保留時間為min；同時對比各洗脫液 液相圖譜，可以看出，水、30%乙醇和5 0%乙醇洗脫液成分 各峰保留時間均小于5min，而石油醚萃取成分及95%洗脫成 分，在此條件下均無明顯吸收峰，只有70%乙醇洗脫液在 515min之間，出現(xiàn)一系列的吸收峰，且tlc顯色僅70°/0乙 醇洗脫液呈現(xiàn)陽性，推測液相色譜中，5min以前出的峰主要 為糖、氨基酸和色胺生物堿等極性較大的成分，蟾皮二烯內(nèi) 酯成分集中在70%洗脫液中，由此確定大孔樹脂的洗脫工藝 為：50 %乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用70%乙醇洗脫。按本法制 得樣品總二烯內(nèi)酯含量為，計算得收率為。石油

9、醚萃取液 及各洗脫液的液相色譜圖見圖2。2石油醚萃取液及不同濃度乙醇洗脫液hplc4結(jié)論本實驗確定的工藝可以有效地富集蟾皮總二烯內(nèi)酯。參考文獻：1 賈彩云，呼文亮，俞小瑞，等.蟾蜍靈對白血病 u937細胞生長抑制和凋亡誘導(dǎo)作用j.中草藥，xx， 36(2):244.2 eno motoa, rhomc, komiya mak, eteffectsofbufadienolidesoninterleukin-6inmh-60celisj . jnatprod,xx,67(12)：2070.3 c unhafilhoga,schwar tzca,resckis,etactivityofthebufadienolidesmarinobufaginandtelocinobufaginisolatedasmajorcomponentsfromskinse cretionofthetoadbu forubescensj .tox icon,xx,45(6):777.4 usanovalv,khu shbaktovaza,syrowv n,etacti