實(shí)驗(yàn)報(bào)告設(shè)計(jì)-葉綠體中色素的提取和分離

1、葉綠體中色素的提取和分離一、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)1 、知識(shí)方面（ 1 ）探究葉綠體中含有幾種種色素：理解它們的特點(diǎn)及與光合作用的關(guān)系（ 2 ）了解紙層析法的原理。2 、能力方面掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。3 、情感態(tài)度與價(jià)值觀方面認(rèn)識(shí)生物科學(xué)的價(jià)值，樂(lè)于學(xué)習(xí)生物科學(xué)，養(yǎng)成質(zhì)疑、求實(shí)、創(chuàng)新及勇于實(shí)踐的科學(xué)精神和科學(xué)態(tài)度二、實(shí)驗(yàn)原理1 、色素提取的原理：葉綠體中的色素能溶于有機(jī)溶劑中，故可用丙酮和無(wú)水乙醇提取色素。2 、色素分離的原理：葉綠體中的各種色素在層析液中的溶解度不同。溶解度大的色素，在濾紙上隨層析液的擴(kuò)散速度快；溶解度小的色素，在濾紙上隨層析液的擴(kuò)散速度慢。三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料：新鮮的綠葉（如

2、新鮮菠菜葉片） 。實(shí)驗(yàn)儀器及用具： 定性濾紙， 研缽， 玻璃濾斗， 脫脂棉， 尼龍布，毛細(xì)吸管，剪刀， 藥勺，量筒（ 10ml ） ，天平，試管，試管架，滴管，培養(yǎng)皿，三角瓶，燒杯試驗(yàn)試劑：無(wú)水乙醇（或丙酮），層析液（cc14）,石英砂（sio2）和碳酸鈣（caco3）四、實(shí)驗(yàn)步驟1 、葉綠體色素的提?。?）取菠菜新鮮葉片 5g ,洗凈，擦干，去掉中脈，剪碎，放入研缽中。（2）向研缽中加入少許碳酸鈣和二氧化硅，再加10ml無(wú)水乙醇，進(jìn)行迅速、充分研磨（二氧化硅有助于研磨得充分，碳酸鈣可防止研磨中色素被破壞）。（3）將研磨液迅速倒入漏斗（漏斗基部放一塊單層尼龍布）中進(jìn)行過(guò)濾。將濾液收集到試管中，

3、及時(shí)用棉塞將試管口塞嚴(yán)。2、制備濾紙條用預(yù)先干燥處理過(guò)的定性濾紙，將濾紙剪成長(zhǎng)10 cm、寬1cm的濾紙條，在濾紙條的一端剪去兩角（防止層析液在濾紙條的邊緣擴(kuò)散過(guò)快），并在距離這一端 1cm處用鉛筆畫一條細(xì)的橫線。一干燥的濾紙條/鉛筆細(xì)線入剪兩角3、畫濾液細(xì)線用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻地畫出一條細(xì)而直的濾液細(xì)線。待 濾液干后，再畫二三次。4、分離葉綠體中的色素將3 ml層析液到入燒杯中，將濾紙條（有濾液細(xì)線的一端朝下）略微斜靠著燒杯的內(nèi)壁，輕輕地插入到層析液中，隨后用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒壞。注意，不能讓濾液細(xì)線觸及層析液。5、觀察與記錄觀察濾紙條上出現(xiàn)了幾條色素帶，以及每條色素帶的顏色。將

4、觀察結(jié)果記錄下來(lái)。五、結(jié)果分析-可編輯修改-1、色素在濾紙條上的分布如下圖:色素種類色素顏色色素含量溶解度擴(kuò)散速度胡容卜素橙黃色最少最高最快葉黃素黃色較少較高較快葉綠素n藍(lán)綠色最多校低較慢葉綠素b黃綠色較多最低展慢2、葉綠體中的色素是有機(jī)化合物，不溶于水，能夠溶解在有機(jī)溶劑中，所以用丙酮、乙 醇可以將存在于葉綠體類囊體膜上的色素溶解，從而提取色素。經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾得到的色素濾液為綠色，葉綠體色素見(jiàn)光易分解，應(yīng)將色素濾液避光保存。3、層析液是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑，葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同，溶 解度高的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快，溶解度低的在濾紙上擴(kuò)散得慢， 所以用層析法來(lái)分離這四種色

5、素。六、注意事項(xiàng)1、各種試劑用途總結(jié):丙酮的用途是提取(溶解)葉綠體中的色素，層析液的的用途是分離葉綠體中的色素；石英砂的作用是為了研磨充分，碳酸鈣的作用是防止研磨時(shí)葉綠體中的色素受到破壞；2、提取色素(1)注意選材：應(yīng)選擇新鮮、濃綠、柔軟的葉片(色素含量多)。(2)研磨要充分、迅速，用紙蓋住研缽口，試管口要加塞。葉綠素不穩(wěn)定，已被細(xì)胞中 的葉綠素酶水解，迅速研磨可以盡量使葉綠素不被水解；充分研磨可以使葉綠體完全破裂， 便于提取較多的色素。(3)丙酮等有機(jī)溶劑的用量不宜過(guò)多，過(guò)多會(huì)影響色素的濃度，過(guò)少則不易過(guò)濾。(4)用尼龍布過(guò)濾，不能使用濾紙。(濾紙會(huì)吸附色素)3、濾紙條(1)干燥，有利于色

6、素?cái)U(kuò)散。(2)雙手盡量不接觸紙面，以免手上的油脂或其他臟物污染濾紙。(3)剪角：邊緣擴(kuò)散快，剪角可使邊加長(zhǎng)，保證色素水平擴(kuò)散。(4)濾紙條的高度要盡量高出燒杯，高出部分直角彎折，最好將其固定在培養(yǎng)皿蓋上。4、畫濾液細(xì)線(細(xì)、直、齊；干燥后再重復(fù)畫線，否則細(xì)線過(guò)粗，色素不易分開(kāi)；重復(fù): 增加色素量，使實(shí)驗(yàn)效果明顯)5、分離色素(1)層析液不能沒(méi)及濾液細(xì)線，否則色素將溶解在層析液中。(2)濾紙條尖端向下，斜靠壁。(貼壁會(huì)影響層析)(3)加蓋。(層析液易揮發(fā)，且有毒)6、色素的位置和功能葉綠體中的色素存在于葉綠體類囊體薄膜上。葉綠素a和葉綠素b主要吸收紅光和藍(lán)紫光；胡蘿卜素和葉黃素主要吸收藍(lán)紫光及保護(hù)葉綠素免受強(qiáng)光傷害的作用。mg是構(gòu)成葉綠素分子必需的元素。尸葉綠素a (藍(lán)綠色)葉綠素jl吸收紅光和藍(lán)紫光公外 c ' i葉綠素b (黃綠色)七口+1機(jī)素i l吸收藍(lán)紫光l胡蘿卜素(橙黃色)l類胡蘿卜素葉黃素(黃色)八思考討論1 為什么要選取新鮮的顏色較深的葉片做實(shí)驗(yàn)材料？2提取和分離葉綠體中色素的關(guān)鍵有哪些？3 、 “沒(méi)有光不