歐蒙過敏原總IgE說明書

1、總IgE檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書產(chǎn)品名稱 通用名稱 總IgE檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)英文名稱 Total IgE ELISA 包裝規(guī)格 訂貨號(hào)靶抗原基質(zhì)規(guī)格EV 3840-9601E人IgE包被抗體的微孔板96´01(96)預(yù)期用途 用于體外定量檢測(cè)人血清或血漿中總IgE。適應(yīng)癥：過敏性疾病 、蠕蟲病、濕疹性或非濕疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。臨床意義：1） 過敏反應(yīng)和特應(yīng)性疾病的診斷：除了皮膚和激發(fā)實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)特異性IgE外，變態(tài)反應(yīng)性疾病的診斷還包括檢測(cè)總IgE水平。但是，過敏反應(yīng)并不總伴有總IgE水平的升高（成人>100 IU/ml）。相反，低水平的IgE（成人<2

2、5 IU/ml）也不能排除患有特應(yīng)性過敏反應(yīng)。通過長(zhǎng)期脫敏治療和遠(yuǎn)離過敏原，總IgE滴度通常會(huì)下降。通過測(cè)定總IgE水平可以區(qū)分過敏性哮喘和內(nèi)源性哮喘，過敏性鼻炎和血管舒縮性鼻炎以及嬰兒特應(yīng)性皮炎和脂溢性皮炎。在特應(yīng)性皮炎患者中可見極高濃度的IgE（數(shù)千IU/ml）。其他過敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性復(fù)發(fā)性或慢性蕁麻疹、復(fù)發(fā)性Quincke水腫（血管神經(jīng)性水腫）、胃腸道不耐受和不明原因的疹病。檢測(cè)總IgE也可用于鑒別診斷肺部嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、變態(tài)反應(yīng)性曲霉病、外源性變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎（農(nóng)夫肺和養(yǎng)鴿者肺）和Churg-Strau 綜合征。2） 其他疾病中的IgE：高IgE水平的非變態(tài)反應(yīng)性

3、疾病包括多種形式的蠕蟲病，如弓蛔蟲病、蛔蟲病、血吸蟲病、鉤蟲病、利什曼原蟲病、毛線蟲病。然而，在絳蟲病和蟯蟲病中未見有IgE水平升高。對(duì)于大多數(shù)病例，經(jīng)有效治療后，IgE水平可降至正常值范圍內(nèi)。在下列疾病中可檢測(cè)出高濃度的IgE：· 濕疹性或非濕疹性皮炎；· IgE骨髓瘤；· 急性系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）；· 移植物抗宿主反應(yīng)；· T細(xì)胞缺陷（Wiskott-Aldrich 綜合征）；· 2度或3度燒傷；· 耳鼻喉腫瘤；· 肝?。ㄓ绕渑c酒精濫用有關(guān)）；· AIDS晚期階段（CD4+ T細(xì)胞明顯下降）。在下

4、列疾病中可有IgE缺陷： · X-染色體相關(guān)低丙種球蛋白血癥；· 嚴(yán)重的聯(lián)合免疫缺陷（SCID）；· 毛細(xì)管擴(kuò)張性運(yùn)動(dòng)失調(diào)；· 肺纖維化疾??；· 極少數(shù)的健康人。歐 蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司檢驗(yàn)原理 試劑盒中每個(gè)微孔板條有8個(gè)可拆分的包被有抗人IgE多克隆抗體的微孔。第一次溫育時(shí)，稀釋后的樣本在微孔中反應(yīng)。如果樣本陽(yáng)性，特異性IgE與抗體結(jié)合。為了檢測(cè)結(jié)合的IgE，加入能發(fā)生顏色反應(yīng)的酶標(biāo)抗人IgE抗體（酶結(jié)合物）進(jìn)行第二次溫育。然后加入酶底物，發(fā)生顏色反應(yīng)。通過標(biāo)準(zhǔn)品1-4繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定IgE濃度。 主要組成成分 成分顏色規(guī)格標(biāo)識(shí)1. 微

5、孔板：包被有抗原的微孔12條，每條有8個(gè)可拆分的微孔，直接使用 -12´8STRIPS2. 標(biāo)準(zhǔn)品1：500 IU/ml（IgE， 人），直接使用 紅色，顏色隨抗體濃度的降低而變淺1´2.0mlCAL1 3. 標(biāo)準(zhǔn)品2：100 IU/ml（IgE， 人），直接使用 1´2.0mlCAL24. 標(biāo)準(zhǔn)品3：10 IU/ml（IgE， 人），直接使用 1´2.0mlCAL35. 標(biāo)準(zhǔn)品4： 0 IU/ml（IgE， 人），直接使用 1´2.0mlCAL46. 陽(yáng)性對(duì)照1：（高濃度IgE，人），直接使用 深藍(lán)1´2.0mlPOS CONTRO

6、L17. 陽(yáng)性對(duì)照2：（低濃度IgE，人），直接使用 淺藍(lán)1´2.0mlPOS CONTROL28. 酶結(jié)合物：過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgE（小鼠），直接使用紫色1´12mlCONJUGATE9. 樣本緩沖液：直接使用橙色1´100mlSAMPLEBUFFER10. 清洗緩沖液：10倍濃縮無色1´100mlWASHBUFFER 10×11. 色原/底物液：TMB/H2O2，直接使用無色1´12mlSUBSTRATE12. 終止液：0.5M硫酸，直接使用無色1´12mlSTOP SOLUTION13. 產(chǎn)品說明書-1份14. 質(zhì)

7、控表-1張LOT 產(chǎn)品批號(hào)儲(chǔ)存溫度IVD 體外檢測(cè)未開封可穩(wěn)定至1不同批號(hào)試劑盒內(nèi)的酶結(jié)合物、樣本緩沖液、清洗緩沖液、色原/底物液和終止液可互換。2定標(biāo)：采用國(guó)際參考品NIBSC 75/502 (National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, England) 定標(biāo)，采用國(guó)際單位(IU)。NIBSC 75/502血清中抗體濃度為5000 IU/ml。儲(chǔ)存條件及有效期 2-8°C保存，不要冰凍。未開封前，試劑盒中各成分在有效期前均穩(wěn)定有效。1. 包被有抗原的微孔板：自第一次開封后，抗原包被的

8、微孔板在干燥的2-8°C的環(huán)境中保存4個(gè)月。2. 清洗緩沖液：稀釋后的緩沖液于2-8°C最多可穩(wěn)定4周。樣本要求 樣本：人血清或EDTA、肝素、檸檬酸鹽抗凝的血漿。穩(wěn)定性：待測(cè)患者樣本于2-8°C可儲(chǔ)存14天，稀釋后的樣本需在同一個(gè)工作日檢測(cè)。樣本稀釋：患者樣本用樣本緩沖液1:10稀釋。例如，可取100l血清用900l樣本緩沖液稀釋并使用混勻器混勻(加樣槍不適合于混勻）。注意：標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品已經(jīng)稀釋，直接使用，勿需再稀釋！ 檢驗(yàn)方法 試劑的準(zhǔn)備和穩(wěn)定性注意：所有試劑在使用前均應(yīng)在室溫（18-25°C）平衡約30分鐘。試劑首次開封后，在無污染的情況下，于2

9、-8°C保存，可穩(wěn)定至所標(biāo)示的有效期。- 抗原包被的微孔：直接使用。在外包裝密封線咬合部的上端剪開保護(hù)袋，為防止板條受潮，只有當(dāng)微孔板平衡到室溫后才可打開包裝。剩余板孔應(yīng)立即放回保護(hù)袋并封好（保留干燥劑）。從第一次打開保護(hù)袋起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8°C的環(huán)境中保存4個(gè)月。- 標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照血清：直接使用，使用前應(yīng)充分混勻。- 酶結(jié)合物：直接使用，使用前應(yīng)充分混勻。- 樣本緩沖液：直接使用。- 清洗緩沖液：10倍濃縮。如果濃縮清洗緩沖液中出現(xiàn)結(jié)晶，稀釋前應(yīng)加熱到37°C并充分混 勻溶解。用干凈吸管從瓶中吸取需要量的濃縮清洗緩沖液用蒸餾水1:10稀釋（1份濃縮

10、清洗緩沖液加9份蒸餾水）。如：需清洗一條微孔板條，則可取5ml濃縮清洗緩沖液用45ml蒸餾水稀釋。稀釋后的緩沖液如處理得當(dāng)放置于2- 8°C可穩(wěn)定4周。- 色原/底物液：直接使用。因內(nèi)容物對(duì)光敏感，使用后應(yīng)立即蓋好瓶蓋。色原/底物液應(yīng)為無色 澄清，如果變藍(lán)則不要使用。- 終止液：直接使用。操作流程（部分）手工操作樣本溫育：（第一步）按加樣方案向相應(yīng)微孔分別加100l標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照或稀釋后的樣本，室溫（18-25°C）溫育30分鐘。清洗：手工：倒掉微孔板內(nèi)液體，用稀釋后的清洗緩沖液洗3次，每次300l。自動(dòng)：用稀釋后的清洗緩沖液清洗3次，每次450L程序設(shè)定：如T

11、ECAN洗板機(jī)可設(shè)為“Overflow Modus”） 。每次清洗時(shí)緩沖液在微孔中至少保留30-60秒，然后再倒掉。清洗后（包括手工或自動(dòng)）應(yīng)將微孔板倒置在吸水紙上拍打，以去除殘存的清洗液。注意：清洗后遺留在微孔中的殘液（10l）可干擾底物反應(yīng)而導(dǎo)致吸光度值偏低。 清洗不充分（如清洗少于3次、清洗液太少或清洗時(shí)間太短）可能導(dǎo)致吸光度值偏高。酶結(jié)合物溫育：（第二步）滴加100l酶結(jié)合物至每一微孔，室溫（18-25°C）溫育30分鐘。清洗：倒掉微孔板內(nèi)液體，如上述步驟清洗。底物溫育：（第三步）滴加100l色原/底物液至每一微孔，室溫（18-25°C）避光溫育15分鐘。終止反應(yīng)：

12、以與加色原/底物液相同的速度和順序滴加100l終止液至每一微孔。比色：450nm比色，參考波長(zhǎng)620-650nm，加完終止液后30分鐘之內(nèi)比色，比色前輕輕振動(dòng)微孔板以使液體擴(kuò)散均勻。 采用全自動(dòng)分析儀完成實(shí)驗(yàn)使用分析儀可實(shí)現(xiàn)樣本稀釋和實(shí)驗(yàn)操作的全自動(dòng)化。歐蒙公司授權(quán)的相關(guān)軟件中的溫育條件可能和ELISA 試劑盒說明書中的條件有輕微偏離。不過，歐蒙 Analyzer I，Analyzer I-2P 或Dynex 公司DSX 的實(shí)驗(yàn)條件與歐蒙ELISA 產(chǎn)品組合的有效性已經(jīng)得到驗(yàn)證，可索取驗(yàn)證文件。也可以使用其他品牌開放式的全自動(dòng)分析儀，但是組合的有效性需要用戶自行確認(rèn)。加樣方案123456789

13、101112AC1P3P11P19BC2P4P12P20CC3P5P13P21DC4P6P14P22EPos1P7P15P23FPos2P8P16P24GP1P9P17HP2P10P18標(biāo)準(zhǔn)品（C1到C4）、陽(yáng)性對(duì)照1和2（pos 1和pos2）和患者樣本各在一孔中溫育。每份樣本復(fù)孔檢測(cè)可提高實(shí)驗(yàn)的可靠性。每一微孔可從板條上取下，這樣可根據(jù)樣本的數(shù)量選擇試劑的用量，減少了試劑浪費(fèi)。陽(yáng)性和陰性對(duì)照為實(shí)驗(yàn)可靠性的內(nèi)部對(duì)照，每次實(shí)驗(yàn)都必須做。參考范圍 非過敏人群中IgE濃度正常范圍上限為100 IU/ml（Thomas，1992）。用本檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)250份獻(xiàn)血者血清，結(jié)果幾乎呈正態(tài)分布，與文獻(xiàn)報(bào)道一

14、致（Klink 等，1990）。檢測(cè)結(jié)果的解釋定量檢測(cè)：分別以4份標(biāo)準(zhǔn)血清的濃度和吸光度為橫、縱坐標(biāo)點(diǎn)對(duì)點(diǎn)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(線性/線性)，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣本中IgE的濃度。下圖僅為一典型標(biāo)準(zhǔn)曲線的示例，請(qǐng)不要用它來計(jì)算樣本中抗體的濃度。如果采用自動(dòng)方法判斷結(jié)果，我們推薦使用三次函數(shù)插入法（cubic spline interpolation）以獲得與實(shí)際曲線最接近的結(jié)果（判斷軟件：TECAN：EASYBase®，MICROTEK: Microwin®）。如果使用其他軟件，三次函數(shù)插入法可能會(huì)產(chǎn)生問題。在這種情況下，可使用Akima插入法（TECAN：easyWIN fitti

15、ng® ）或二次多項(xiàng)式。如果采用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)線性推斷法，則必須考慮到：當(dāng)IgE濃度大于100IU/ml時(shí)，測(cè)量值可能會(huì)產(chǎn)生微小的偏差。 下圖僅為一典型標(biāo)準(zhǔn)曲線的示例，請(qǐng)不要用它來計(jì)算患者樣本中抗體的濃度。如果患者樣本的吸光度超出了標(biāo)準(zhǔn)品1（500 IU/ml），可報(bào)告為“500 IU/ml”。建議將樣本1:40稀釋后重新測(cè)定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的數(shù)據(jù)再乘以4即為樣本中抗體的濃度。IgE在妊娠第11周開始形成，其濃度隨著年齡的增加而持續(xù)升高，在6-14周歲時(shí)達(dá)到最高值，隨后開始隨著年齡的增加而下降。IgE濃度因個(gè)體、是否患過敏性疾病而變化很大，且受多種因素（年齡、性別、遺傳背景、種族、吸煙）的

16、影響。下表是文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的IgE正常值范圍，僅作為參考。每個(gè)國(guó)家、每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的不同年齡組的IgE正常范圍。年齡正常值上限新生兒1.2 IU/ml1-6月7.2 IU/ml7-12月12.7IU/ml1-5歲60 IU/ml6-9歲155 IU/ml10-15歲199 IU/ml16歲以上100 IU/ml產(chǎn)品性能指標(biāo)定標(biāo)：采用國(guó)際參考品NIBSC 75/502 (National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, England) 定標(biāo)，采用國(guó)際單位(IU)。NIBSC 75/502血清中抗體濃度

17、為5000 IU/ml。每一組實(shí)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)血清的吸光度以及陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照血清的國(guó)際單位必須處在相應(yīng)批號(hào)試劑的參考范圍內(nèi)，試劑盒內(nèi)質(zhì)控表中標(biāo)示參考值。如果對(duì)照血清的實(shí)驗(yàn)結(jié)果超出了靶值范圍，則結(jié)果不準(zhǔn)確，必須重做。所用酶的活性與溫度有關(guān)，如果不用恒溫器，吸光度值會(huì)不同。底物溫育時(shí)室內(nèi)溫度(+18°C 至+25°C)越高，吸光度值越高。溫育時(shí)間不同會(huì)引起同樣的差異。但因標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)受到同樣的影響，這種差異在計(jì)算結(jié)果時(shí)會(huì)在很大程度上得到補(bǔ)償。線性范圍：通過檢測(cè)系列稀釋的高抗體濃度血清來研究該試劑的線性范圍。本檢測(cè)系統(tǒng)的線性范圍為34-449IU/ml。檢出限：最低檢出限的定義為所能檢

18、出的IgE 抗體的最小滴度。本檢測(cè)系統(tǒng)的最低檢出限為1.2 IU/ml。重復(fù)性：通過檢測(cè)3份不同抗體濃度的血清計(jì)算批內(nèi)和批間的變異系數(shù)（CV）以確定該試劑的重復(fù)性。批內(nèi)檢測(cè)的CV基于20次檢測(cè)的結(jié)果，而批間檢測(cè)的CV則基于不同6天、每天4次檢測(cè)的結(jié)果。批內(nèi)重復(fù)性，n=20批間重復(fù)性，n=4×6血清均值（IU/ml）CV（%）血清均值（IU/ml）CV（%）15010.41477.921504.121565.334696.333495.5交叉反應(yīng)：檢測(cè)系統(tǒng)（夾心法）的設(shè)計(jì)和所用抗體的高特異性確保了整個(gè)反應(yīng)體系的高特異性。干擾：血紅蛋白濃度為10 mg/ml的溶血、甘油三脂濃度為20 m

19、g/ml的脂血、膽紅素濃度為0.4 mg/ml的黃疸對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒有干擾。特異性和靈敏度：分別用歐蒙IgE-ELISA檢測(cè)系統(tǒng)和Pharmacia CAP系統(tǒng)檢測(cè)63份血清樣本。歐蒙檢測(cè)系統(tǒng)的特異性和靈敏度為100%。 注意事項(xiàng)警示：(1) 本檢測(cè)試劑僅用于體外診斷。(2) 標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的HBsAg、抗HCV、HIV-1和HIV-2抗體均為陰性。但是，試劑盒中所有組分都應(yīng)被視作潛在傳染源小心處理。其中部分試劑含有毒性的疊氮鈉，應(yīng)避免接觸皮膚。廢物處理：患者標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和溫育過的微孔板條必須作為潛在傳染源處理，試劑盒中所有試劑的處理必須遵循官方規(guī)定。參考文獻(xiàn)1. Barbee RA, H

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