第十二章喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析

1、喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的分析喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的分析瘧疾簡介以及抗瘧藥瘧疾簡介以及抗瘧藥瘧疾是經(jīng)按蚊叮咬或輸入帶瘧原蟲者的血液而感染瘧原蟲所引起的蟲媒傳染病。寄生于人體的瘧原蟲共有四種，即間日瘧原蟲，三日瘧原蟲，惡性瘧原蟲和卵形瘧原蟲。在我國主要是間日瘧原蟲和惡性瘧原蟲；其他二種少見，近年偶見國外輸入的一些病例。不同的瘧原蟲分別引起間日瘧、三日瘧、惡性瘧及卵圓瘧。本病主要表現(xiàn)為周期性規(guī)律發(fā)作，全身發(fā)冷、發(fā)熱、多汗，長期多次發(fā)作后，可引起貧血和脾腫大?？汞懰帲阂活愑糜诳刂瓢Y狀，一類用于控制復(fù)發(fā)和傳播，一類用于病因性預(yù)防。喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，環(huán)上雜原子的反應(yīng)

2、性能基本與吡啶相同?，F(xiàn)以常見的硫酸奎寧、二鹽酸奎寧、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸氨伯喹為例，就鑒別和檢查的有關(guān)問題進(jìn)行討論。（一）典型的藥物結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì)（一）典型的藥物結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì) P315（二）主要化學(xué)性質(zhì)二）主要化學(xué)性質(zhì)1.堿性 奎寧為二元生物堿，其中奎寧環(huán)上的氮原子 的堿性較強（pKa8.8）與強酸形成穩(wěn)定的鹽：而喹啉環(huán)上的氮原子的堿性較弱（pKa4.2）不能與硫酸成鹽2.旋光性 喹啉類抗瘧疾藥基本都具有手性，硫酸奎寧為左旋體，其比旋度為-237-224。；二鹽酸奎寧也為左旋體。而磷酸哌奎和磷酸咯萘啶不具有手性。3.熒光特性 硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸中均顯藍(lán)色熒光。4.紫

3、外吸收光譜特征 由于喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系，可以用紫外吸收光譜的特征鑒別該類藥物。產(chǎn)生熒光的條件剛性平面結(jié)構(gòu)共軛體系取代基和溶劑熒光強度的影響一、喹啉類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)一、喹啉類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)二、鑒別實驗二、鑒別實驗（一）綠奎寧反應(yīng)（一）綠奎寧反應(yīng)NHONHOClCl2Cl2NOClClNH3NNNONH4O取其水溶液加溴試液0.2ml和氨試液1ml，即顯翠綠色； 加酸至中性顯藍(lán)色； 酸性則呈紫紅色； 翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。（二）光譜特征（二）光譜特征1.紫外吸收光譜特征 由于喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉

4、雜環(huán)，具有共軛體系，可以用紫外吸收光譜的特征鑒別該類藥物。ChP采用本法鑒定磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯胺喹。示例12-2 ChP磷酸氯喹的UV鑒別：取本品，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含有10ug的 溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在222nm、257nm、329nm、與343nm的波長處有最大吸收。2.熒光光譜特征 利用硫酸奎寧和二鹽奎寧在稀硫酸溶液中均顯藍(lán)色熒光的性質(zhì)進(jìn)行鑒別。示例12-5 ChP硫酸奎寧的熒光鑒別：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。3.紅外吸收光譜特征 硫酸奎寧、二鹽奎寧、磷酸哌喹、磷酸咯萘

5、啶和磷酸伯胺喹在ChP中均采用紅外光譜的方法進(jìn)行鑒別。示例12-6（三）無機酸鹽（三）無機酸鹽1.硫酸鹽的鑒別實驗硫酸鹽的鑒別實驗加BaCl2生成白色沉淀，不溶于鹽酸和稀硝酸加HCl不產(chǎn)生沉淀，與硫代硫酸鹽區(qū)別加醋酸鉛生成白色沉淀，溶于醋酸銨或NaOH加二氧化錳，加硫酸潤濕，緩慢加熱，產(chǎn)生氯氣使KI試紙遇淀粉變藍(lán)加稀硝酸和硝酸銀生成白色凝乳狀沉淀加銨試液溶解,加硝酸再沉淀2.氯化物的鑒別反應(yīng)氯化物的鑒別反應(yīng)3.磷酸鹽反應(yīng)磷酸鹽反應(yīng)加硝酸銀生成淺黃色沉淀在銨試液或稀硝酸中均易溶解加氯化銨鎂生成白色結(jié)晶性沉淀加鉬酸銨試液與硝酸后,加熱生成黃色沉淀，分離，沉淀在氨試液中溶解三、純度檢查三、純度檢查（

6、一）硫酸奎寧（一）硫酸奎寧1.酸度酸性雜質(zhì) 取本品0.2g，加水20ml溶解后，測定pH值應(yīng)為5.76.6 。 2.氯仿乙醇不溶物 取本品2g，加氯仿無水乙醇 (2:1) 的混合液15ml，在50加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合液分5 次洗滌，每次10ml ，在105 干燥至恒重，遺留殘渣不得過2mg。 3.其他金雞納堿 (TLC、HPLC)1.酸度 取本品1.0g，加水25ml溶解，測定pH值應(yīng)大于2.4。 2.水中不溶物 取本品加水溶解后，稍放置即有黃色不溶物產(chǎn)生,影響品質(zhì).3.氯化物 系生產(chǎn)工藝帶入.檢查時為了避免溶液顏色干擾堿使咯萘啶沉淀析出,過濾后進(jìn)行檢查.

7、4. 甲醛 合成過程中引入5.四氫吡啶 合成過程中引入（二）磷酸咯萘啶的純度檢查（二）磷酸咯萘啶的純度檢查（一）硫酸喹啉含量測定（一）硫酸喹啉含量測定非水溶液滴定法非水溶液滴定法溶劑種類 使用范圍常用溶劑酸性有機弱堿冰醋酸堿性有機弱酸二甲基甲酰胺兩性酸/堿甲醇惰性酸/堿甲苯、氯仿、丙酮（BHBH+ +）2 2SOSO4 42-2-+HClO+HClO4 4 BHBH+ +ClOClO4-4-+BH+BH+ +HSOHSO4-4-游離堿類鹽游離堿類鹽被置換出的弱酸被置換出的弱酸當(dāng)當(dāng)HAHA酸性較強時，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低酸性較強時，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HAHA的酸性，使反

8、的酸性，使反應(yīng)順利地完成。應(yīng)順利地完成。四、含量測定四、含量測定NNH3COHHHCH=CH2HONNH3COHHHCH=CH2HOSO42-+ HClO43H+H+NNH3COHHHCH=CH2HONNH3COHHHCH=CH2HO+H+H+HSO4-ClO4-ClO4-ClO4-（二）磷酸氯喹制劑含量測定（二）磷酸氯喹制劑含量測定磷酸氯喹用磷酸氯喹用非水溶液滴定法非水溶液滴定法測定含量，但制劑中由于含有測定含量，但制劑中由于含有輔料輔料，所采用的含量測定方法不同。所采用的含量測定方法不同。示例示例12-1012-10：ChP中磷酸氯喹片含量的紫外可見分光光度測定法：取本品10片，精密稱定，

9、研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于磷酸氯喹0. 13g),置200ml量瓶中，加0. lmol/L 鹽酸溶液適量，充分振搖使磷酸氯喹溶解并稀釋至刻度，搖勻,濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置100ml量瓶中，用0. lmol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法（附 錄IVA)，在343nm的波長處測定吸光度；另取磷酸氯喹對照 品適量，精密稱定，加O.lmol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制 成每lml中約含13ug的溶液，同法測定，計算，即得。五、高效液相法測定人體血液中的氯喹五、高效液相法測定人體血液中的氯喹P323P323青蒿素類藥物的分析青蒿素類藥物的分析青蒿素又名黃蒿素,是我國從菊

10、花科植物黃花蒿中提取分離得到的一個含過氧基團(tuán)的新型倍半萜內(nèi)酯青蒿素抗瘧作用有迅速、高效、安全、低毒且與大多數(shù)抗瘧藥無交叉抗性,是一類全新結(jié)構(gòu)的抗瘧藥，為抗瘧藥的研發(fā)提供了新的先導(dǎo)化合物。易產(chǎn)生耐藥性，推薦使用復(fù)方青蒿素合成難度較大，藥物的生產(chǎn)仍依賴于天然藥材的提取。OCH3HHHOOCH3H3COO青蒿素一、青蒿素類藥物基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)一、青蒿素類藥物基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)與物理性質(zhì)見P325（二）主要化學(xué)性質(zhì)（二）主要化學(xué)性質(zhì)氧化氧化性性過氧橋鍵具有氧化性過氧橋鍵具有氧化性旋光性旋光性手性原子手性原子,具有旋光性具有旋光性水解反應(yīng)水解反應(yīng)內(nèi)酯結(jié)

11、構(gòu)，堿性條件下易水解內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，堿性條件下易水解紫外吸收特性紫外吸收特性環(huán)狀結(jié)構(gòu)雖然不具有共軛特性環(huán)狀結(jié)構(gòu)雖然不具有共軛特性,但取但取代基具有一定吸收特性代基具有一定吸收特性青蒿素類藥物的鑒別試驗青蒿素類藥物的鑒別試驗1.呈色反應(yīng)過氧橋鍵具有氧化性酸性條件下能將碘離子氧化成碘與淀粉指示液顯藍(lán)紫色2.羥肟酸鐵反應(yīng)含內(nèi)酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件下與羥胺反應(yīng)生成羥肟酸。在稀酸溶液中與高鐵離子呈色顯紫色2.羥肟酸鐵反應(yīng)含內(nèi)酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件下與羥胺反應(yīng)生成羥肟酸。在稀酸溶液中與高鐵離子呈色顯紫色3.吸收光譜特征紅外，與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照紫外，取代基末端吸收以

12、鑒別，ChP2010未采用使分子中的羧基脫水，增加雙鍵位移，分子縮合反應(yīng)生成其軛系統(tǒng)，在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色4.香草醛-硫酸反應(yīng) 5.色譜法HPLC法保留時間定性青蒿素類藥物的含量測定青蒿素類藥物的含量測定含量測定含量測定 青蒿素原料采用高效液相色譜法測定，雙氫青蒿素片采用水解后UV法測定。 示例示例12-2412-24：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（42:58 )為流動相；檢測波長為 210nm 。取本品和雙氫青蒿素對照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每lml中各約含lmg的混合溶液，量取注入液相色譜儀，雙氫青蒿素呈現(xiàn)兩個色譜峰，青蒿素峰與相鄰雙氫青蒿素峰的分離度應(yīng)大于2.0 ; 理論板按