歐州藥典中兩個植物來源藥品的質(zhì)量標準簡介.

1、發(fā)布日期20070704欄目化藥藥物評價>>綜合評價標題歐州藥典中兩個植物來源藥品的質(zhì)量標準簡介作者付文衛(wèi)張永文部門正文內(nèi)容審評二部付文衛(wèi)張永文    在世界各地使用的藥物中約有25%的來源于植物，目前仍有121個活性成分制成的藥物廣泛地應(yīng)用于臨床。世界衛(wèi)生組織(WHO)建議的252個基本藥物中有11%來源于植物，還有相當數(shù)量是以天然產(chǎn)物為前體經(jīng)合成獲得。來源于植物的藥物，早期的從洋地黃屬（Digitalis spp.）植物中得到的地高辛（digoxin）、從金雞納樹屬（Cinchona spp.）植物中得到的奎寧（quinine）和奎寧定（quini

2、dine），近期的有從長春花（Catharanthus roseus）中分離得到的長春堿（vinblastine）和vincristrine以及從紅豆杉中分離得到的紫杉醇等。據(jù)估計目前在市場上銷售的和處在臨床試驗的抗癌藥和抗感染藥物中，大約有60%的是天然來源的。12對于來源于天然產(chǎn)物，尤其是植物的藥物，研究其質(zhì)量控制現(xiàn)狀和規(guī)律對我國中藥及天然藥物質(zhì)量控制水平的提高有一定的參考價值。本文僅以歐州藥典（EP4）中的兩個藥物為例，介紹其質(zhì)量控制的要點，以期對中藥及天然藥物有效成分新藥的質(zhì)量研究及標準建立有所啟發(fā)。1、地高辛（Digoxin）(EP4, 01/2002:0079) 

3、0;  地高辛為目前臨床常用的中等強度強心藥，來源于洋地黃屬植物。是經(jīng)分離得到的強心苷類天然產(chǎn)物。歐州藥典EP4中其質(zhì)量標準內(nèi)容包括以下幾個內(nèi)容：定義（DEFINITION）、性質(zhì)（CHARACTERS）、鑒別（IDENTIFICATION）、檢查（TESTS）、分析（ASSAY）、貯藏（STORAGE）和雜質(zhì)（IMPURITIES）等幾項。定義（DEFINITION）項規(guī)定了地高辛的含量在95103%之間。    性質(zhì)（CHARACTERS）描述了地高辛的外觀、性狀和常見溶劑中的溶解性。地高辛是白色或類白色的粉未或無色的結(jié)晶；幾乎不溶于水，溶于甲醇和二

4、氯甲烷1:1(V/V)的混合溶劑中，微溶于乙醇。    鑒別（IDENTIFICATION）中分為首選鑒別和備選鑒別兩類。本品的首選鑒別項是應(yīng)用紅外光譜，通過與標準圖譜的對照而鑒別；備選鑒別包括一個TLC鑒別和兩個理化鑒別。    檢查（TESTS）項包括澄明度、旋光度、有關(guān)物質(zhì)的檢查、干燥失重和硫酸鹽灰分檢查等內(nèi)容。檢查項在質(zhì)量標準中所占篇幅最多，澄明度檢查中規(guī)定本品50mg在10ml甲醇和二氯甲烷混合溶劑中應(yīng)無色透明；旋光度規(guī)定本品0.2g在10ml無水吡啶溶劑中其旋光值應(yīng)在+10+13之間；干燥失重規(guī)定本品不超過1%；硫酸鹽灰分

5、規(guī)定本品不超過0.1%。    有關(guān)物質(zhì)檢查是檢查項占有篇幅最多的內(nèi)容。地高辛也稱異羥基洋地黃毒苷，其中的雜質(zhì)洋地黃毒苷和羥基洋地黃毒苷是與地高辛結(jié)構(gòu)相似的強心苷類天然產(chǎn)物，其中洋地黃毒苷也作為強心類藥物應(yīng)用于臨床，但其起效時間和作用強度與地高辛并不相同，因而控制其含量限度顯得非常重要。    本品采用TLC法，通過配制不同溶度的對照品溶液，規(guī)定其中的雜質(zhì)洋地黃毒苷（digitoxin）不超過1%，羥基洋地黃毒苷（gitoxin）不超過2%，其它雜質(zhì)總量不超過2%。其具體操作如下：供試品50mg溶于5ml甲醇和二氯甲烷1:1(V/V)

6、的混合溶劑中配制成10mg/ml濃度。在甲醇和二氯甲烷1:1(V/V)的混合溶劑中配制成五種對照品溶液：(a) 20mg對照品溶于2ml混合溶劑中配成10mg/ml濃度；(b) 1ml (a) 對照品溶液在混合溶劑中稀釋至50ml，制成0.2mg/ml濃度；(c) 2ml(b) 對照品溶液在混合溶劑中稀釋至4ml，配制成0.1mg/ml濃度；(d) 5mg洋地黃毒苷對照品溶于50ml混合溶劑中配制成0.1mg/ml濃度；(e) 5mg羥基洋地黃毒苷對照品溶于25ml混合溶劑中配制成0.2mg/ml濃度。供試品溶液和對照品溶液各取2l，通過薄層色譜分離后（色譜條件和操作方法略），對比斑點大小而判

7、別。結(jié)果判斷：經(jīng)薄層分離后與對照品溶液(d)比較，供試品色譜相應(yīng)位置上顯示出的斑點小于對照品(d)色譜所顯示的斑點（洋地黃毒苷限量不超過1%）；經(jīng)薄層分離后與對照品溶液(e)比較，供試品色譜相應(yīng)位置上顯示出的斑點小于對照品(e)色譜所顯示的斑點（羥基洋地黃毒苷限量不超過2%）；經(jīng)薄層分離后與對照品溶液(b)和對照品溶液(c)比較，供試品色譜中除主斑點、洋地黃毒苷和羥基洋地黃毒苷斑點外的其它斑點小于對照品(b)色譜所顯示的斑點（其它苷類雜質(zhì)限量不超過2%），同時供試品色譜中除主斑點、洋地黃毒苷和羥基洋地黃毒苷斑點外的其它斑點最多只能有一個大于對照品(b)色譜所顯示的斑點（其它苷類單體雜質(zhì)限量不超

8、過1%）。    分析（ASSAY）采用比色法在495nm處測定，并通過參比溶液來計算本品的含量。    貯藏（STORAGE）規(guī)定本品避光保存。    雜質(zhì)（IMPURITIES）規(guī)定了本品的雜質(zhì)為洋地黃毒苷（digitoxin）和羥基洋地黃毒苷（gitoxin），明確了其化學結(jié)構(gòu)。2、地奧司明（Diosmin）(EP4, 01/2002:1611)    地奧司明最早在1925 年從玄參屬植物Scrophularia nodosa中被分離，1969年首次作為一個治療藥物使

9、用。在歐州，地奧司明作為血管保護藥劑和慢性靜脈疾病治療劑的使用超過已經(jīng)30年。地奧司明可以是天然來源或從天然產(chǎn)物橙皮苷經(jīng)半合成方法得到。歐州藥典EP4中其質(zhì)量標準內(nèi)容包括以下幾個內(nèi)容：定義（DEFINITION）、性質(zhì)（CHARACTERS）、鑒別（IDENTIFICATION）、檢查（TESTS）、分析（ASSAY）、貯藏（STORAGE）和雜質(zhì)（IMPURITIES）等幾項。    定義（DEFINITION）規(guī)定了地奧司明的含量在90102%之間。    性質(zhì)（CHARACTERS）描述了地奧司明的外觀、性狀和常見溶劑中的溶解性

10、質(zhì)。地奧司明是灰黃色或淺黃色的吸濕性粉未；幾乎不溶于水，溶于DMSO，幾乎不溶于乙醇，溶于稀的堿性溶液中。    鑒別（IDENTIFICATION）：本品的鑒別有兩項，第一項為應(yīng)用紅外光譜，通過與標準圖譜的對照而鑒別；第二項鑒別為HPLC鑒別，要求供試品溶液色譜保留時間和峰的大小與對照品溶液(a)色譜基本一致。    檢查（TESTS）：根據(jù)本品的特點，檢查項為碘的限量、相關(guān)物質(zhì)的檢查、重金屬、水分和硫酸鹽灰分等檢查項目，是質(zhì)量標準中所占篇幅最多的內(nèi)容。本品目前多為橙皮苷經(jīng)碘脫氫得到，故需要控制碘的限量。本品碘的限量采用電極法，以對

11、照品溶液作對照，要求本品含碘量不超過0.1%。地奧司明是典型的黃酮類化合物，目前多為橙皮苷經(jīng)碘脫氫一步而制到。其中的雜質(zhì)A乙?；愊悴萃╝cetoiso- vanillone）是其反應(yīng)過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物；雜質(zhì)B橙皮苷（hesperidin）是未反應(yīng)完全的起始原料；雜質(zhì)C（isorhoifin）、雜質(zhì)E 6-碘地奧司明（6- iododiosmin）和F香葉木素（diosmetin）為合成反應(yīng)的副產(chǎn)物。液相色譜中雜質(zhì)B和C的保留時間非常接近。本品相關(guān)物質(zhì)的檢查是HPLC法，HPLC法規(guī)定了液相色譜的柱的規(guī)格、固定相粒徑、柱溫、流動相組成、流速、檢測波長、檢測時間，提供了樣品及雜質(zhì)的保留時間。

12、在系統(tǒng)的適用性方面，通過對照品溶液，規(guī)定了分離度、雜質(zhì)限度和檢測限。本品規(guī)定的色譜條件是：色譜柱大小0.10m×4.6mm(Ø)，固定相為十八烷基硅膠（粒徑3m），柱溫40°C；流動相為乙腈:冰醋酸:甲醇:水(2:6:28:66, V/V/V/V)；流速為1.5ml/min；檢測波長275nm；進樣用10l的定量閥；測試時間為地奧司明保留時間的6倍；地奧司明的保留時間約為4.6分鐘，相對于地奧司明的保留時間，雜質(zhì)A為0.5，雜質(zhì)B為0.6，雜質(zhì)C為0.8，雜質(zhì)C為2.2，雜質(zhì)E為2.6，雜質(zhì)F為4.5倍的地奧司明保留時間。本品25mg的供試品以二甲基亞砜25ml配

13、成1mg/ml濃度供試品溶液；在二甲基亞砜中配制成三種對照品溶液：(a) 25mg對照品溶于25ml溶劑中配成1mg/ml濃度對照品溶液；(b) 5ml (a) 對照品溶液稀釋至100ml，制成0.2mg/ml濃度對照品溶液；(c) 25mg對照品溶于25ml溶劑中配成1mg/ml濃度對照品溶液，對照品溶液(c)僅用于系統(tǒng)適用性實驗。    采用對照品溶液(c)時，雜質(zhì)B和C的分離度至少要達到2.5。在雜質(zhì)含量限度的計算方面，除雜質(zhì)A和F的結(jié)構(gòu)差異較大外，地奧司明與其它雜質(zhì)結(jié)構(gòu)比較近似。為了計算雜質(zhì)A和F的含量限度，明確了雜質(zhì)A的校正因子為0.38，F(xiàn)的校正因子為

14、0.61。本品含量限度規(guī)定：供試品溶液的色譜中，雜質(zhì)A的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積的0.2倍（雜質(zhì)A限量不超過1%）；雜質(zhì)B的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積（雜質(zhì)B限量不超過5%）；雜質(zhì)C的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積的0.6倍（雜質(zhì)C限量不超過3%）；雜質(zhì)E的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積的0.6倍（雜質(zhì)E限量不超過3%）；雜質(zhì)F的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積的0.6倍（雜質(zhì)F限量不超過3%）；其它任一雜質(zhì)的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積的0.2倍（其它雜質(zhì)限量不超過1%）；包括雜質(zhì)A在內(nèi)的其它雜質(zhì)的總峰面積小于對照品溶液(

15、b)色譜中主峰面積的0.2倍（包括A在內(nèi)的其它雜質(zhì)限量不超過1%）；同時雜質(zhì)總的峰面積小于對照品溶液(b)色譜中主峰面積的2倍（總雜質(zhì)限量不超過10%）。    本品的檢測限為采用參比溶液(b)時，能檢測到0.1%的含量。    本品規(guī)定重金屬含量不超過20ppm（檢測2.0克樣品）；水分含量不過過6%（檢測0.3克樣品）；硫酸鹽灰分規(guī)定本品不超過0.2%（檢測1.0克樣品）。分析（ASSAY）采用HPLC法，并通過參比溶液(a)來計算本品的含量。    貯藏（STORAGE）規(guī)定本品密封保存。 

16、;   雜質(zhì)（IMPURITIES）規(guī)定了本品的雜質(zhì)A為乙?；愊悴萃╝cetoiso- vanillone）、B為橙皮素（hesperidin）、C為（isorhoifin）、E為6-碘地奧司明（6- iododiosmin）和F為香葉木素（diosmetin）。    從EP4中兩個來源于植物的藥品標準的情況可見，歐州藥典中來源于植物的藥品的質(zhì)量標準有以下幾個特點：1、含量范圍比較嚴格，以上兩個標準的含量上限最高僅103%；2、雜質(zhì)要求比格嚴格，不僅規(guī)定了雜質(zhì)的總量，每個雜質(zhì)的限量都進行了規(guī)定；3、檢測結(jié)果比較直觀，不用作過多的計算，標準

17、中一般需配制一定數(shù)量的參比溶液，通過與參比溶液的比較來獲得檢測結(jié)果；4、標準中方法敘述詳盡，如地奧司明相關(guān)物質(zhì)檢查中對HPLC條件的規(guī)定就非常詳盡。我們知道源于植物的藥品常常會出現(xiàn)結(jié)構(gòu)非常相似的現(xiàn)象，不同的HPLC條件，雜質(zhì)峰的情況會不完全一樣，如果對雜質(zhì)進行了深入的研究，固定了雜質(zhì)的檢測條件，會更有利于我們對雜質(zhì)的控制。這些對我們新藥的標準制定和審評有一定的參考和借鑒作用。    本文僅對歐洲藥典（EP4）中源于植物的兩個藥品質(zhì)量標準進行了簡要介紹，希望為我國有效成分新藥的質(zhì)量研究與標準建立提供有益的參考。參考文獻：1、S.M.K. Rates. Plants as source of drugs. Toxicon. 39 (2001): 603613.2、Yu