實驗室環(huán)境和人體表面微生物檢查

1、實驗室環(huán)境和人體表面微生物檢查實驗室壞境和人體表面微生物的檢杳實驗報告一 1 一實驗室環(huán)境和人體表而微生物的檢査李雪彤2009級生科3班摘要：生物界的微生物多達幾萬種，對以說是無處不在。本次試驗我們學習了培養(yǎng)基的 制備及基木的滅菌方法，并接種了實驗室環(huán)境（空氣、桌面）和人體表面的微生物。經(jīng)過 一周的培養(yǎng)，培養(yǎng)皿上形成了肉眼可見的菌落，我們可以觀察處在各種環(huán)境下的微生物菌 落的形態(tài)特征。讓我們對微生物的培養(yǎng)和菌落的特征有了初步的了解。同時，證明了實驗 室壞境和人體表面存在多種多樣的微生物，因此，我們應(yīng)該意識到在微生物實驗屮“無菌 操作”的重要性關(guān)鍵詞：實驗室壞境、人體表面、微生物壞境培養(yǎng)菌落1刖

2、吞：本次實驗的冃的，是要學習并掌握培養(yǎng)基的制備原理和制作步驟，以及滅菌原理和操作 過程，通過實驗證明實驗室和人體表而存在微生物，并觀察不同微生物類群的菌落其形態(tài) 顏色等特征。2材料與方法：2. 1材料：2.1.1菌種來自于實驗室環(huán)境和人體農(nóng)而的菌種。2. 1.2培養(yǎng)基牛肉膏蛋白豚瓊脂平板。2. 2培養(yǎng)基的配制2.2.1溶液及試劑牛肉膏、蛋白月東、nack瓊脂條、無菌水，naoh溶液及hc1溶液2.2.2儀器和其他用貝培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、燒杯、接種壞、酒精燈、記號筆、牛皮紙、滅菌棉簽、試管 架、廢物缸等。2. 2方法與步驟：1.2.1牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基制備（見表1）。步驟：稱量熔化調(diào)pi】表

3、1實驗空環(huán)境和人體表面微生物的檢查實驗報告-2 -1.2.2實驗步驟1.2.3注意事項:1）在培養(yǎng)基的配制過程中，不必等到瓊脂完全溶化再調(diào)節(jié)piitfl,因為滅菌過程中溫 度為121°c,且冇足夠長的時間可以使其溶解。另外，在加熱時有水分的蒸發(fā)散失，所以 要略微多加蒸憾水。2）瓊脂融化過程屮要控制好火力并不斷攪拌，以免培養(yǎng)基沸騰溢出或焦糊。3）高壓蒸汽滅菌時： 不能裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌-效果。 三角燒瓶與試管口端均不應(yīng)與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。 加熱同吋打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空厲。 切斷電源或關(guān)閉煤氣，當壓力表的壓力降至0時才可打開排氣

4、閥。如果壓力未降到0就打開排氣閥，會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶 口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基。4）制備平板和接種過程中，三角瓶口和培養(yǎng)川i開口要在酒精燈火焰20cm范圍內(nèi)，防 止雜菌進入。5）標簽寫在皿底，如果寫在皿蓋上，同時觀察多個培養(yǎng)皿，打開蓋時，易泯淆。字盡 量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當中，以免影響觀察結(jié)果。字盡量小，寫在皿底一 邊,以免影響觀察結(jié)果。表2：培養(yǎng)皿編號后接種情況實驗室環(huán)境和人體表面微牛:物的檢查實驗報告-3 -3結(jié)杲及分析接種日期：2010年9月22 h觀察日期：2010年9月29日3. 1. 1實驗結(jié)果 表3菌落 形態(tài)特征3

5、.1.2實驗結(jié)果分析1、通過觀察比較各個培養(yǎng)基上的菌落的形態(tài)及數(shù)目，置于空氣屮 的平板中菌落種類更多樣，原因：接觸面大，空氣流動性大，微生物種類數(shù)忖較多。實驗室環(huán)境和人體表而微工物的檢查實驗報告-4 -2、不同的壞境下接種的微生物大多形態(tài)各異，因此可以說明不同的壞境中微生物的種 類變化較大。3、從形態(tài)特征看町以知道菌落的特征,來分離菌落。根據(jù)相關(guān)組別的菌落數(shù)冃觀察，町以得到以下結(jié)論：1、通過比較1-1在空厲中放置5分鐘后28攝氏度培養(yǎng)和37攝氏度培養(yǎng)兩組的培養(yǎng)皿 上的菌落數(shù)量以及1-5、1-4在空氣屮放置10分鐘后28攝氏度培養(yǎng)和37攝氏度培養(yǎng)兩組 的培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)量，28攝氏度培養(yǎng)皿中的菌

6、落數(shù)多于37攝氏度的培養(yǎng)皿中的菌落 數(shù)，由此可推斷出，28攝氏度的環(huán)境對能更加適合菌落的生長2、2、通過比較3-3洗手前培養(yǎng)皿和3-6洗手后培養(yǎng)血上的菌落數(shù)量，洗手前的菌落數(shù) 量較少，但是菌落較人型，菌落面積大，菌落種類多，這說明洗手前我們的手上細菌較 多。洗手后的培養(yǎng)皿中，菌落數(shù)量多，但菌落面積很小，菌落種類減少，這說明通過洗 手，除去了一部分細菌，但手上仍存在一定量的細菌。3. 3. 1實驗結(jié)果見表5表5某菌種在兩種菌種來源基上的數(shù)冃3. 3. 2實驗結(jié)果分析1、從形態(tài)特征看可以知道菌落的特征，來初步判斷是否是同一種菌種。2、通過分析3-2-空-10-2-37和3-1-手前-2-37中存在

7、同樣的菌種，可以初步推斷手上 的某些菌種川能來源于空氣。4課后習題1 思考一：列舉2-3類微牛:物，說明它們在本實驗條件下（肉膏蛋白腺瓊脂平板， 37°c）不能生長。因為牛肉音蛋白豚培養(yǎng)基是用來培養(yǎng)細菌的，故不能培養(yǎng)真菌，例如:霉菌，酵母菌.其次 實驗是在37攝氏度進行，對能有些微生物不適合在此溫度下培養(yǎng)。2. 思考二：比較各種來源的樣品，哪一種菌落數(shù)和菌落類型最多？為什么？洗手后的 菌落數(shù)最多。因為在取樣時，手指在培養(yǎng)基上按了很多下，而且菌種類型只為兩種，相互 間的抑制作用較小，而其他取樣的培養(yǎng)基雖然菌種數(shù)h多，但是各種菌間的抑制作用較 強，限制了菌株的生長。菌落類型為洗手前最多。

8、因為手接觸了很多細菌或霉菌，包括空氣小的，都町通過手的 接觸進入培養(yǎng)基。3. 思考三：比較洗手前后菌落數(shù)的變化，談?wù)勀愕捏w會。洗手后仍有少量細實驗室環(huán) 境和人體表面微生物的檢查實驗報告-5 -菌生長，你認為是什么原因？洗手前菌落數(shù)比洗手后菌落數(shù)少，但是菌種數(shù)冃多。洗手前，多數(shù)菌落為霉菌洗手 后，人多數(shù)為小型細菌菌落，而且數(shù)量較多。猜測原因為，洗手前的平板，後菌生長叮能 抑制了細菌牛長，因而菌落數(shù)較少；洗手后，霧菌被除公，細菌生長不受影響，故細菌菌 落較多。4. 思考四：完成本實驗后，你是否已體會到我們生活在微生物的包圍?。磕闳绾误w會“微生物既是我們的朋友又是我們的敵人” ？生產(chǎn)方面：它們在土壤

9、物質(zhì)轉(zhuǎn)化和促進植物生長有著極為重要的作用，例如根瘤菌， 圓褐固氮菌都是將氮元素活化，讓植物來利用的微41物。在牛物工程方面，用酵母菌釀 酒，用乳酸菌制酸奶，用毛霉制腐乳。述對以制造生物殺蟲劑，如蘇方金桿菌，日本金龜子芽胞桿菌，對人畜無害，是一種比較綠色的殺蟲劑。然而，有一些微生物屬于動植物細 菌和病毒，給農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)帶來危害，如煙草花葉病毒，禽流感病毒。生活方而：當雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌在腸道內(nèi)生長、繁殖，將陽止外而的病原 體入侵腸道，構(gòu)筑成一個生物屏障，対人的健康有益。也有一些我們經(jīng)常'聽說的微生物対 人的健康冇害，如結(jié)核桿菌會引發(fā)結(jié)核病，流行感冒病毒會引發(fā)感冒等等。5. 思考五：

10、培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否為無 菌的？因為在配制培養(yǎng)基的過程屮沾染很多微生物，如果不立即滅菌，那么培養(yǎng)基冷凝后接種 了微半物，會影響微乞物的4:長，并且是培養(yǎng)的微牛物不純。將滅菌后的培養(yǎng)基冷凝后放入37攝氏度恒溫箱中培養(yǎng)，如果若干天后培養(yǎng)基上沒有菌 落出現(xiàn)，則斷定培養(yǎng)基為無菌的。6. 思考六：在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題，為什么？pii值應(yīng)調(diào)節(jié)為7. 0-7. 2之間，并且在加入naoii溶液時要注意不要加入過量，因為即使 后期用hc1溶液中和調(diào)節(jié)，牛成的鹽類物質(zhì)仍然會影響培養(yǎng)液的配制。培養(yǎng)基配方的選定：同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別

11、。因此，除所用 的是標準方法，應(yīng)嚴格按其規(guī)定進行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核 對，再依據(jù)自己的使丿tju的，加以選用，記錄其來源。培養(yǎng)基的配制記錄：每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來源，和 各種成份的牌號，最終pll值、消毒的溫度和時間制備的口期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一 份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。培養(yǎng)基成分的稱収：培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂，最好一次完 成，不要中斷。對將配方置于傍側(cè)，每稱完一種成分即在配方而軍做出記號，并將所需稱 取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后

12、，還應(yīng) 進行一次檢査。培養(yǎng)基各成分的混合和溶化：培養(yǎng)棊所川化學藥品均應(yīng)是化學純的。使用的蒸煮鍋不得 為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵泯入培養(yǎng)基屮，使細菌不易生長。最好使用不銹鋼萬加 熱溶化，可放入人燒杯或大燒瓶屮置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消壽器屮蒸煮溶化。在鍋 中溶化實驗室環(huán)境和人體表而微生物的檢查實驗報告時、可先用溫水加熱并隨時擾動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)冇焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使 用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮 沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過 程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補足。培養(yǎng)基的滅菌：

13、一般培養(yǎng)基對采用121。c高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基 制備方法中，如無特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。某些畏熱成分，如糖類，應(yīng)另行配成20% 或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消壽，以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明 膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)以無菌操作技術(shù)抽取和加入于 經(jīng)冷卻約50° c左右的培養(yǎng)基中。瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55°c-60°c 時，擺置成適當斜而，待其自然凝固。培養(yǎng)基的質(zhì)量測試：每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng) 仔細檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄 去。并測定其最終ph。將全部培養(yǎng)基放入36±1° c恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長， 即棄去。用有關(guān)的標準菌株接種廣2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)2448小時，如無菌生長或生長 不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。培養(yǎng)基的保存：培養(yǎng)基應(yīng)存放丁冷暗處，最好