抗原抗體反應(yīng)課件VIP

1、抗原抗體反應(yīng)PPT課件第十章 抗原抗體反應(yīng) 免疫測定 Immunoassay, IA MD 副教授 食品質(zhì)量與安全教學(xué)系抗原抗體反應(yīng)PPT課件一、抗原抗體反應(yīng)的特點 （體外反應(yīng)） p176 特異性 交叉性 兩種抗原含有共同部分（同抗原決定基） 比例相關(guān)性/ 按比性 可逆性 如提取純化，親和層析 階段性 第一階段 AgAb特異結(jié)合，幾分鐘 第二階段 出現(xiàn)肉眼可見變化：凝集、沉淀、溶解、標(biāo)記放大 。幾分鐘、幾小時抗原抗體反應(yīng)PPT課件二、影響AgAb 反應(yīng)的因素 電解質(zhì) 0.85NaCl 或其他 Buffer 酸堿度 pH68 溫度 最適 37， 低溫緩慢，室溫也可，不高于56抗原抗體反應(yīng)PPT課

2、件三、AgAb反應(yīng)（試驗）種類 凝集反應(yīng) agglutination test 概念： 顆粒Ag 與相應(yīng)Ab 結(jié)合，在電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時間（幾分幾小時）出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng) 凝集原 凝集素抗原抗體反應(yīng)PPT課件 凝集試驗的類型 直接凝集反應(yīng) 試管凝集試驗 玻片凝集試驗 如血型檢驗、O抗原檢驗 間接凝集試驗 將可溶性Ag，或者把Ab 吸附于不直接參與和干擾AgAb反應(yīng)的顆粒載體上，然后使二者混合發(fā)生凝集反應(yīng)。 協(xié)同凝集反應(yīng) 屬于間接凝集反應(yīng) 抗原抗體反應(yīng)PPT課件間接凝集反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)PPT課件 沉淀反應(yīng) 概念 指可溶性Ag 與相應(yīng)Ab 特異結(jié)合，形成免疫復(fù)合物在電解質(zhì)影

3、響下形成沉淀現(xiàn)象。 沉淀原 precipitinogen 可溶Ag 如 細(xì)菌浸出液 沉淀素 precipitin 抗原抗體反應(yīng)PPT課件 沉淀試驗類型 環(huán)狀沉淀試驗 液體中直接沉淀 凝膠沉淀試驗 /免疫擴散 雙向免疫擴散 免疫單擴散 免疫電泳 抗原抗體反應(yīng)PPT課件抗原抗體反應(yīng)PPT課件抗原抗體反應(yīng)PPT課件 補體結(jié)合反應(yīng)/試驗 AgAb 特異結(jié)合后，補體參與下，發(fā)生溶菌、溶細(xì)胞、溶血現(xiàn)象。 溶血素抗原抗體反應(yīng)PPT課件 標(biāo)記抗原抗體反應(yīng)/技術(shù) 免疫標(biāo)記技術(shù) 概念 指用熒光素、放射性同位素、酶、鐵蛋白、膠體金、生物素親和素等標(biāo)記Ab 或 Ab，后進行的AbAg 反應(yīng)。 一抗、二抗（抗抗體）、酶

4、標(biāo)二抗 熒光素、放射性同位素、酶標(biāo)記最為成熟，稱為免疫學(xué)三大標(biāo)記技術(shù) 抗原抗體反應(yīng)PPT課件 免疫標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)點 a 特異性強 b 敏感性高 c 快速 d 能定性、定量和定位抗原抗體反應(yīng)PPT課件ELISA 測定原理ELISA，enzyme-linked immunoadsorbent assay 酶聯(lián)免疫吸附試驗 一種標(biāo)記 抗體 / 抗原 的 分析技術(shù)抗原抗體反應(yīng)PPT課件ELISA 種類 夾心法 間接法 競爭法 抗原抗體反應(yīng)PPT課件雙抗體夾心法（HBsAg、HBeAg等）示意圖固相載體抗體抗原酶抗體酶標(biāo)記抗體1.將抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗原，則結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再

5、加入酶標(biāo)記抗體，則結(jié)合為抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色?？乖贵w反應(yīng)PPT課件雙抗原夾心法（抗-HBs等）示意圖1.將抗原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再加入酶標(biāo)記抗原，則結(jié)合為抗原-抗體-酶標(biāo)記抗原復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色。酶抗原酶標(biāo)記 抗原抗體抗原固相載體抗原抗體反應(yīng)PPT課件酶抗抗體酶標(biāo)記抗抗體抗體抗原固相載體1.將抗原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再加入酶標(biāo)記抗抗體，則結(jié)合為抗原-抗體-酶標(biāo)記抗抗體復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色。間接法（抗-HCV等）示意圖抗原抗體反應(yīng)PPT課件捕捉法（抗

6、-HAV IgM、抗-HDV IgM等）示意圖酶抗體酶標(biāo)記 抗體抗原抗抗體固相載體抗體1.將抗抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結(jié)合為抗抗體-抗體復(fù)合物。3. 加入抗原及酶標(biāo)記抗體，則結(jié)合為抗抗體-抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色?？乖贵w反應(yīng)PPT課件免疫膠體金技術(shù)抗原抗體反應(yīng)PPT課件簡介 膠體金作為示蹤標(biāo)志物標(biāo)記抗原（半抗原）或抗體 目前發(fā)展為一種常用的標(biāo)記技術(shù) 各種生物學(xué)研究中廣泛使用。 各種食品衛(wèi)生、安全指標(biāo)的最快速檢測幾乎都用免疫膠體金技術(shù)。 醫(yī)學(xué)診斷使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能用到。 抗原

7、抗體反應(yīng)PPT課件免疫膠體金技術(shù)的基本原理： 還原劑 弱堿性 蛋白質(zhì)陽離子基團 氯金酸 金顆粒 陰離子膠體 膠體金蛋白質(zhì)HAuCl4 膠體金標(biāo)記物： 抗原、半抗原、抗體均可標(biāo)記 多種生物大分子，如SPA、PHA、ConA等。抗原抗體反應(yīng)PPT課件抗原抗體反應(yīng)PPT課件 免疫金標(biāo)記技術(shù) Immunogold labelling technique 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。 抗原

8、抗體反應(yīng)PPT課件常用的免疫膠體金檢測技術(shù)： 免疫膠體金光鏡染色法 細(xì)胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標(biāo)記的抗體進行染色。 免疫膠體金電鏡染色法 斑點免疫金滲濾法 應(yīng)用微孔濾膜（硝酸纖維膜）作載體，先將抗原或抗體點于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體檢測相應(yīng)的抗原或抗體。 膠體金免疫層析法 immunochromatography 抗原抗體反應(yīng)PPT課件免疫層析膠體金測試片 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與