小葉臭黃皮中單萜與倍半萜類成分探究

1、小葉臭黃皮中單菇與倍半菇類成分探究摘要研究小葉臭黃皮clausena excavata莖和葉 甲醇提取物的單菇和倍半菇類成分。小葉臭黃皮莖和葉提取 物的乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠、rp-18和hplc等色譜技術(shù)分離純 化，通過(guò)理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。從小葉臭 黃皮莖和葉中分離得到10個(gè)化合物，分別鑒定為：1個(gè)單菇, 命名為 excamonoterpene (1 )； 9 個(gè)倍半菇，即(6r, 9s) -9, 10-dihydroxy-4-megastigmen-3-one (2), (3r, 6r, 7e) -3-hydroxy-4, 7-megastigmadien-9-one (3),

2、 (3s ) -3-hydroxy-7, 8-dihydro- -ionone (4), (3s, 5r, 6s) -3-hydroxy-5 , 6epoxy-3-ionone ( 5 ) , ( 6r , 9r ) -9-hydroxy-4-megastigmen-3-one ( 6 ) , ( 3s , 5r ) -dihydroxy-6, 7-megstigmadien-9-one(7), (-)-loliolide (8), caryolane-1, 9 a -diol (9), 2, 6-dihydroxyhumula-3 (12), 7 (13), 9 (e) -triene (1

3、0)o 化合物 1 為 1 個(gè)新 的單菇，210為首次從該種植物中分離得到。關(guān)鍵詞蕓香科；小葉臭黃皮；單菇；倍半菇小葉臭黃皮clausena excavata burm. f是蕓香科 rutaceae黃皮屬植物，主要分布在越南、老撾、柬埔寨、緬 甸、印度和我國(guó)南方地區(qū)1-2 o其根、葉入藥，用于治療 感冒發(fā)燒、痢疾、腸炎、尿道炎等3。據(jù)報(bào)道黃皮屬植物 含有香豆素4-5.生物堿6-8.苯丙素9、四降三菇10、 黃酮11等。之前已報(bào)道了小葉臭黃皮的香豆素和生物堿成 分12-13 o本文對(duì)小葉臭黃皮莖和葉的化學(xué)成分進(jìn)行繼續(xù) 研究，從中分離鑒定了 10個(gè)單菇和倍半菇化合物，1為1個(gè) 新的單菇，210為

4、首次從該種植物中分離得到。1材料bruker am-400 型核磁共振波譜儀；vg autospec-3000 質(zhì)譜儀；horiba sepa-300 數(shù)字式旋光儀；bio-rad fts-135 紅外光譜儀；shimadzu uv-2401a紫外光譜儀；agilent 1100 高效液相色譜儀，zorbax eclipse xdb-c18 （agilent, 9. 4 mmx250 mm, 2 ml min-1）色譜柱；柱色譜硅膠（100200, 200300目）、薄層色譜硅膠板均為青島裕民源硅膠試劑廠 產(chǎn)品；反向材料 lichroprep rp-18 （4063 um）為 merk 公司產(chǎn)

5、品；所用試劑均為化學(xué)純或分析純。小葉臭黃皮風(fēng)干的莖和葉（32 kg）于2010年采自云南 省西雙版納，植物標(biāo)本由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所稅玉民 研究員鑒定為蕓香科黃皮屬植物小葉臭黃皮c. excavata。2提取與分離小葉臭黃皮風(fēng)干的莖和葉（32 kg）,粉碎后用95%工業(yè) 甲醇回流提取3次，每次35 lx3 h,減壓濃縮得到甲醇提 取物。加水懸浮后，依次用石油瞇、乙酸乙酯和正丁醇等體 積各萃取3次（15lx3次），回收溶劑得到石油瞇部分、乙 酸乙酯部分和正丁醇部分。將乙酸乙酯部分(1.1 kg)用石 油瞇-丙酮混合溶劑溶解吸附于等量硅膠上，在室溫下?lián)]干 溶劑經(jīng)硅膠(100200目)色譜柱分離

6、，以石油瞇-丙酮(10 : 1, 5 : 1, 4 : 1, 3 : 1, 2 : 1, 1 : 1, 0 : 1)梯度洗 脫，再換為氯仿-甲醇(8 : 21 ： 1)。經(jīng)tlc 5%濃硫酸-無(wú) 水乙醇顯色后合并為7個(gè)部分：ft. 17。fr. 4 (34 g)經(jīng) 硅膠(200300目)柱色譜，以石油瞇-丙酮(5 : 11 ： 2) 梯度洗脫得到6個(gè)部分fr. 4-1fr4-6。fr. 4-2 (98 mg) 經(jīng)反相rp-18色譜柱，以甲醇-水(30%100%)梯度洗脫得 到 3 個(gè)部分 fr. 4-2-1 fr. 4-2-3 fr. 4-2-1 經(jīng) hplc 分離和 純化，以甲醇-水(52%

7、)梯度洗脫得到化合物9 (7 mg, tr=26 min)和 3 (13 mg, tr =32 min)o fr. 4-2-2 經(jīng) hplc 分離和 純化，以48%甲醇梯度洗脫得到化合物4 (9 mg, tr =28 min) 和 8 (12 mg, tr =35 min)o fr. 4-2-3 經(jīng) hplc 分離和純化， 以46%甲醇梯度洗脫得到化合物5 (11 mg, tr =23 min), 6(10 mg, tr =31 min)和 10 (8 mg, tr =37 min)o fr. 6(52 g)經(jīng)硅膠(200300目)柱色譜，以石油瞇-丙酮(5 : 1, 4 : 1, 3 : 1

8、, 2 : 1, 1 : 1, 0 ： 1)梯度洗脫得到5個(gè)部分 fr. 6-1 fr6-5, fr. 6-2 (1. 1 g)經(jīng)反相 rp-18 色譜柱， 以甲醇-水(30%100%)梯度洗脫得到3個(gè)部分fr. 6-2-1 fr. 6-2-3o fr. 6-2-1 (230 mg)經(jīng) hplc 分離和純化,以 45% 甲醇梯度洗脫得到化合物7 (180 mg, tr二25 min), 1 (5 mg, tr =30 min)和 2 (11 mg, tr =38 min)o3結(jié)構(gòu)鑒定化合物1為淡黃色油狀物；a 247d -16. 7 (c 0. 23, meoh)； uv (meoh)入max

9、 (lg e )： 208 (3.97), 284 (2. 79)； ir (kbr)： 3 427, 2 955, 2 929, 2 888, 1 755, 1 659, 1 631, 1 451, 1 438, 1 386, 1 348, 1 252, 1 209, 1 191,1 101, 1 088, 1 046, 866 cm-1,顯示有釋基、炭基的存 在；esi-ms顯示其準(zhǔn)分子離子峰為m/z 221m+na + ,結(jié)合 hr-ei-ms m/z 198. 089 2 (m+ ),計(jì)算值 198. 089 2,推 出分子式為c10h1404,不飽和度q二4?；衔锏?h-nmr譜

10、顯示有1個(gè)不飽和質(zhì)子信號(hào)峰(6h7. 30, 1h, d, j二l2hz),2 個(gè)甲基單峰(5h 1.87, 3h, s； 1. 39, 3h, s)。13c-nmr 和dept顯示10個(gè)碳原子信號(hào)：1個(gè)炭基碳(5 c 176. 2, s), 2 個(gè)不飽和碳(6c 151. 6, d； 130. 3, s), 2 個(gè)甲基(5c17. 0, q； 10. 5, q), 2個(gè)亞甲基(§c616, t,與氧相連；43.6, t), 2個(gè)次甲基(5c 80.4, d； 65.2, d；分別與氧相連) 和1個(gè)季碳(8c59. 5, s,與氧相連)。結(jié)合不飽和度q二4 推斷該化合物中還存在2個(gè)環(huán)

11、。1h-1hc0sy譜給出h-8 ( 5h2. 94) /h-9 ( 6h 3. 75, 3. 59)； h-5 ( 6h 5. 16) /h-4 ( 6 h 7. 30), h-6 ( 5h 1.97, 1. 72)相關(guān)。hmbc 給出(h-9, 8, 6) /c-7； h-6/ (c-4, 8, 11)； h-11/ (07, 8)相關(guān)，并 結(jié)合1h-1h cosy譜中h-8/h-9相關(guān)和不飽和度，表明化合物中存在1個(gè)結(jié)構(gòu)片段。hmbc譜還給出h-4/ (c-3, 10)； h-10/ (c-24)相關(guān)，以及 1h-1hcosy 譜中 h-5/h-4 相關(guān), 結(jié)合q=4表明化合物中還存在1

12、個(gè)結(jié)構(gòu)片段。綜合以上分 析，并結(jié)合分子量和不飽和度，化合物1的結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1,命 名為excamonoterpeneo化合物1的2d nmr主要相關(guān)圖見(jiàn)圖 lo化合物 11h-nmr (cd3od, 400 mhz) 6 : 7. 30 (1h,d, j二1.2 hz, h-4), 5. 16 (1h, m, h-5), 3. 75 (1h, dd, j=12. 2, 4. 5 hz, h-9a), 3. 59 (1h, dd, j=12. 2, 6.4 hz, h-9b), 2.94 (1h, m, h8), 1.97 (1h, dd, j二 14. 3, 4. 7 hz, h-6a), 1.8

13、7 (3h, s, h-10), 1. 72 (1h, dd, j=14. 3, 8.9 hz, h-6b), 1. 39 (3h, s, h-ll)； 13c-nmr (cd30d, 100 mhz)6 : 176.2 (s, c-2), 151.6 (d, c4), 130. 3 (s, c3),80.4 (d, c-5), 65.2 (d, 08), 61.6 (t, 09), 59. 5 (s, c-7), 43.6 (t, c-6), 17.0 (q, c-11), 10. 5 (q, c10)?；衔?淡黃色油狀物；a 25. 9 d+75. 4 (c 0. 23,meoh), e

14、si-ms m/z 249m+na +。1h-nmr (cd30d, 400 mhz) 6 : 5. 71 (1h, s, h-4), 3. 56 (1h, br s, h9), 3. 47 (1h, dd, j=10. 5, 4. 3 hz, h-10b), 3.41 (1h, m, h10a), 2. 36(1h, d, j二 17.0 hz, h-2b), 2. 00 (3h, s, h-13), 1.97 (1h, br s, h-7b), 1.95 (1h, br s, h-6), 1.89 (1h, d,j=17.0 hz, h-2a), 1.63 (1h, m, h-8b), 1

15、.48 (1h, m, h-7a), 1.45 (1h, m, h-8a), 1.06 (3h, s, h-11), 0. 98(3h, s, h-12)； 13c-nmr (cd30d, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表 1。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)14的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為(6r, 9s) -9, 10-dihydroxy-4-megastigmen-3-oneo化合物3淡黃色油狀物；a21.1d+153 (c 0. 24, meoh), el-ms m/z 208 (m+ )。 1h-nmr (cdc13, 400 mhz)6 : 6. 54 (1h, dd, j=15. 8, 9.9 hz, h

16、-7), 6. 10 (1h, d, j 二 15.8 hz, h-8), 5. 63 (1h, br t, j=l. 3 hz, h-4), 4. 26 (1h, br s, h-3), 2. 50 (1h, d, j=9. 9 hz, h-6), 2. 26 (3h, s, h-10), 1.84 (1h, dd, j二 13. 5, 5. 9 hz, h-2b), 1.62 (3h, s, h-13), 1. 39 (1h, dd, j=13. 5, 6.9 hz, h-2a), 1.03 (3h, s, it-11), 0. 89 (3h, s, h-12)； 13c-nmr(cdc1

17、3, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表lo以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)15-16 的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為(3r, 6r, 7e)-3-hydroxy-4, 7-megastigmadien-9-one?；衔?淡黃色油狀物；a 21. 7d -27. 1 (c 0. 27, meoh), esi-ms m/z 233m+na + o 1h-nmr (cdc13, 400 mhz) 6 : 3.91 (1h, m, h-3), 2.45 (2h, br s, h-8)，2. 25 (2h, br s, h-7), 2. 13 (3h, s, h-10), 1.91 (2h, m, h-4), 1.67 (1h,

18、 m, h-2b)，1.58 (3h, s, h-13), 1.37 (1h, m, h-2a), 1.02 (3h, s, h-ll), 1.00 (3h, s, h-12)； 13c-nmr (cdc13, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表lo以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)17-18 的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為3s-3-hydroxy-7 ,8-dihydro-b ionone?；衔?淡黃色油狀物；a 121. id -69. 8 (c 0. 20, meoh), esi-ms m/z 247m+na + o 1h-nmr (cdc13, 400 mhz)5 : 7. 06 (1h, d, j二 15.8 h

19、z, h-7), 6.27 (1h, d, j二 15. 8 hz, h-8), 3.89 (1h, m, h-3), 2. 37 (1h, dd, j=14. 1, 1.7 hz, h-4a), 2. 36 (3h, s, it10), 1.65 (1h, dd, j=14. 1, 9.0 hz, h-4b), 1.61 (1h, dd, j二 12. 7, 1. 7 hz, h-2a), 1.25 (1h, dd, j二 12.7, 10. 7 hz, h-2b), 1. 18 (3h, s, h-13), 1. 17 (3h, s, h-12), 0. 97 (3h, s, h-ll)；

20、 13c-nmr(cdc13, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表lo以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)19-21 的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為(3s, 5r, 6s)-3-hydroxy-5, 6-epoxy-b -ionone?；衔?淡黃色油狀物；a21. 1d+98(co 2o,meoh),esi-ms m/z 233m+na+o 1h-nmr (cdc13, 400 mhz) 8 :5. 80 (1h, s, h-4), 3.82 (1h, m, h-9), 2. 48 (1h, d, j =16. 9 hz, h-2b), 1.98 (1h, d, j=16. 9 hz, h-2a), 1.97(1h, m,

21、h-6), 1.81 (1h, m, h-7b), 1.68 (1h, m, h-8b), 1.67 (1h, m, h-7a), 1.61 (1h, m, it-8a), 1.25 (3h, d, j=6. 3 hz, h-10), 1. 07 (3h, s, h-13), 1. 02 (3h, s, h-12), 1.09 (3h, s, h-ll)； 13c-nmr (cdc13, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn) 表lo以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)22的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為(6r, 9r) -9hydroxy-4-megastigmen-3-one化 合物 7 黃色油狀物；a 21 2d -49. 9(

22、c 0. 62, meoh), esi-ms m/z 247m+na+o 1h-nmr (cd30d, 400 mhz) 6 : 5. 83 (1h, s, h-8), 4.21 (1h, m, h3), 2. 17 (1h, m, h-4a), 1.93(1h, m, h-2a), 1. 39 (1h, m, h-2b), 1.38 (1h, m, h-4b),2. 19, 1.40, 1.40, 1. 15 (各 3h, -ch3x4)； 13c-nmr (cd30d, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)23-24的報(bào)道一致, 故鑒定該化合物為(3s，5r ) -dihydroxy

23、-6 , 7-megstigmadien-9-one。化合物8淡黃色油狀物;a 213d -66. 8 (c 0. 18, meoh), el-ms m/z 196 (m+ )。1h-nmr (cdc13, 400 mhz) 6 : 5. 70 (1h, s, h-7), 4. 34 (1h, d, j=3. 7 hz, h3), 2.48 (1h, dt, j=13. 9, 2.6 hz, h-4b), 2.00 (1h, dt, j=14. 6, 2. 6 hz, h-2b), 1.80 (1h, dd, j= 13.9, 4. 0 hz, h-4a), 1. 79 (3h, s, h-1

24、1), 1.54 (1h, dd, j二 14. 6, 3. 7 hz, h-2a), 1.48c3h, s, h-10), 1.28(3h, s, h-9)； 13c-nmr (cdc13, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表lo以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)25的報(bào) 道一致，故鑒定該化合物為(-)-loliolideo化合物9淡黃色油狀物；a 2l id -4. 2(c 0. 22,me0h), esi-ms m/z 261m+na+o 1h-nmr (cd3od, 400 mhz) 8 :3. 37 (1h, m, h-9), 2.42 (1h, ddd, j=11.4, 7. 5, 4. 2 hz, h-2),

25、 1.94 (1h, m, h-lla), 1.80 (1h, m, h-10b), 1. 79(1h, m, h-3b), 1. 78 (1h, m, h12a)，1.77 (1h, m, h-5),1.63 (1h, m, h-10a), 1. 57 (1h, m, h-3a), 1.45 (1h, m,h-7b), 1. 38 (2h, m, h-6), 1. 37 (1h, br d, j=13.6 hz, h-12b), 1.29 (1h, m, h-llb), 1. 12 (3h, s, h-14), 1.03(1h, dd, j二 13.9, 12.6 hz, h-7a), 0.

26、 94 (3h, s, h-15), 0. 87 (3h, s, h-13)； 13c-nmr (cd30d, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn) 表lo以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)26的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為caryolane-1, 9 a -diol。化合物10淡黃色油狀物；a 211d -27 (c 0. 20,meoh), esi-ms m/z 259m+na + o 1h-nmr (cdc13, 400 mhz)6 : 5.59 (1h,d, j=15. 9 hz, h-10), 5. 55 (1h,s,5. 45 (1h, m,h-9), 5. 30 (1h, s, h-13a), 5. 04s,(1h

27、,s,(1h, s, h-13a), 4. 38 (1h, dd,j二8.9,4. 7 hz, h-6),4. 35 (1h, s, h-2), 3.23 (1h, dd,j=13. 8,h-8b),7.8 hz, h-8a), 2.81 (1h, dd, j二 13. 8, 8.4 hz, 2. 27 (2h, m, h-4), 2. 16 (1h, m, h-5a), 2. 00 (1h, dd,j=14. 0, 5.4 hz, h-la), 1.93 (1h, m, h-5b), 1.88 (1h,dd, j二 14.0, 2. 1 hz, h-lb), 1.09 (3h, s, h-1

28、4)，1.01 (3h, s, h-15)； 13c-nmr (cdc13, 100 mhz)數(shù)據(jù)見(jiàn)表 1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)27的報(bào)道一致，故鑒定該化合物為2, 6-dihydroxyhumula-3 (12), 7 (13), 9 (e) -triene。參考文獻(xiàn)1吳征鎰，陳書坤，朱維明，等.云南植物志m.北京：科技出版社，1997： 76&2 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志. 第43卷.第2冊(cè)m.北京：科學(xué)出版社，1999： 128.3 institutum botanicum kunmingense academiae sinicae edita flora yunna

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