黃芪對腹膜透析效能及腹膜間皮細胞與腹腔免疫功能的影響江蘇申報

1、.登記序號： 計劃類別： 分類代碼： 項目編號： 科技項目計劃設(shè)計任務(wù)書 項目名稱：黃芪對腹膜透析效能及腹膜間皮細胞與腹腔免 疫功能的影響 承擔單位： 單位地址： 郵編： 項目負責人： 電話： 職務(wù)職稱： 主管部門： 南京市衛(wèi)生局 填報日期： 2002年04月26日 江蘇省科學技術(shù)廳二OO一年制一、立項依據(jù)：1、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢及理論實踐依據(jù)： 隨著腹膜透析（Peritoneal Dialysis，PD）技術(shù)的不斷提高和透析理論的日趨完善，尤其是1976年P(guān)opovich提出的連續(xù)非臥床腹膜透析（Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis，CAP

2、D）治療方法帶來了腹膜透析的空前繁榮。近年來的流行病學資料表明接受腹膜透析治療的終末期腎功能不全（End-Stage Renal Disease，ESRD）患者正以每年7.5%的比例迅速增長，目前全球已有超過120000的患者在接受腹膜透析治療。腹膜透析因其相對于血液透析更高的生活質(zhì)量、顯著的殘余腎功能保護、優(yōu)于或等于血液透析的生存率以及較少的資金花費，故有作者提出，腹膜透析應(yīng)該是腎臟替代療法的首選1,2。 然而，隨著腹膜透析患者壽命的延長，腹膜透析的遠期并發(fā)癥腹膜功能衰竭已成為ESRD患者透析技術(shù)性失敗的最重要的原因3，并成為制約腹膜透析發(fā)展的“瓶頸”。 資料顯示約1/3的腹膜透析患者6年后

3、因腹膜功能衰竭而退出透析治療。腹膜功能衰竭與長期腹膜透析后腹膜結(jié)構(gòu)和功能破壞進而導致腹膜超濾失敗以及溶質(zhì)轉(zhuǎn)運功能障礙密切相關(guān)4。腹膜透析液的生物不相容性是導致腹膜功能衰竭的首要原因，腹膜間皮細胞作為腹膜組成部分在這一過程中扮演著重要角色。近年來隨著人腹膜間皮細胞標準培養(yǎng)方法和腹膜透析動物模型的確立，腹膜功能衰竭的機理得以初步闡明。腹膜間皮細胞在長期非生理性透析液刺激下，轉(zhuǎn)移生長因子（TGF-）mRNA過度表達，TGF-作為細胞增殖與細胞外基質(zhì)合成的重要調(diào)節(jié)因子，導致細胞外基質(zhì)合成增加和腹膜纖維化5，最終導致腹膜超濾失敗和溶質(zhì)轉(zhuǎn)運功能障礙。同時TGF-也是調(diào)節(jié)細胞凋亡的重要細胞因子，組織病理學證

4、實腹膜功能衰竭的重要特征表現(xiàn)為腹膜間皮細胞的喪失，過多的TGF-表達將增加間皮細胞的凋亡，導致間皮細胞的完整性受到破壞，研究表明完整的間皮細胞層可以顯著延緩腹膜纖維化的進程。其次，腹膜透析的主要并發(fā)癥腹膜感染也是導致腹膜功能衰竭的重要原因,反復(fù)的炎癥刺激使腹膜局部高水平TGF-持續(xù)存在致使腹膜發(fā)生纖維化和硬化6。目前公認長期腹膜透析時腹腔細胞免疫功能抑制是導致腹膜反復(fù)感染的主要原因,尤其是被認為是腹腔細胞免疫功能最重要組成部分和腹膜抵抗細菌感染第一道屏障的巨噬細胞功能的明顯抑制。研究表明，腹膜在長期非生理性透析液的刺激下，巨噬細胞功能受到抑制，當腹膜發(fā)生感染時透析患者腹腔巨噬細胞功能指標包括吞

5、噬指數(shù)、白細胞介素1（IL-1）和腫瘤壞死因子（TNF-）水平顯著降低，如果改用更符合生理條件的透析液則可以使腹腔巨噬細胞功能得到明顯增強，從而增強腹膜對感染的抵抗能力，減少腹膜炎的發(fā)生7。最近，腹膜血管在腹膜功能衰竭中的作用也得到重視，充足的血流除了能有效增強腹膜的抵抗力減少腹膜炎的發(fā)生外8，也是維持長期腹膜透析患者腹膜轉(zhuǎn)運功能的重要因素。腹膜血管血流量減少時腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運和腹膜超濾率均顯著下降9，研究顯示長期腹膜透析患者腹膜血管內(nèi)皮細胞依賴的血管舒張因子顯著減少，從而影響腹膜透析的效能，而如在腹膜透析液中添加擴血管物質(zhì)硝普納則能有效提高腹膜透析患者的透析效果。 基于上述研究結(jié)果，近年來臨床醫(yī)

6、師一直致力于兩方面的研究。一是研究更符合生理條件以及不影響腹膜免疫功能的全新的腹膜透析液。雖然已有諸如含多聚糖、含氨基酸、含碳酸氫根等多種透析液的體外實驗的報道，但事實上所有這些透析液并不能完全替代葡萄糖作為滲透性物質(zhì)的作用，其臨床應(yīng)用前景尚不明確。另一方面，腎臟病醫(yī)師通過在現(xiàn)有的透析液中添加一些物質(zhì)來達到保護和改善腹膜功能的目的。有研究表明在透析液中加入雙嘧莫達能顯著降低小鼠腹透液中TGF-的含量，而加入透明質(zhì)酸可以在保護腹膜間皮細胞方面起到一定的效果。中藥黃芪是一種含有多糖、甙、黃酮和微量元素等多種成分的物質(zhì)，其具有多重藥理作用10。黃芪能顯著抑制炎癥因子TGF-的表達，從而延緩肝臟、腎臟

7、等多種臟器疾病時發(fā)生纖維化的進程；能明顯減緩人胚二倍體細胞自然衰老過程延長細胞壽命約1/3左右11；能有效地調(diào)節(jié)細胞免疫功能，通過向小鼠腹腔注射黃芪可以發(fā)現(xiàn)腹腔巨噬細胞吞噬功能得到增強，從而增強腹膜抗菌能力；黃芪還具有擴血管的作用，研究顯示其能顯著抑制血管收縮物質(zhì)內(nèi)皮素的釋放，從而可能起到擴張血管增加血流量的作用12。根據(jù)黃芪的上述作用，可以推測，在腹膜透析液中加入黃芪可以起到延長腹膜間皮細胞的壽命、抑制間皮細胞TGF-的分泌、提高腹腔巨噬細胞功能、改善局部微循環(huán)，從而阻止/延緩腹膜纖維化和防止腹膜感染的發(fā)生，達到阻止/延緩腹膜功能衰竭的目的。然而關(guān)于黃芪在腹膜透析中的應(yīng)用尚無相關(guān)報道。 主要

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13、ops.Blood Purif,1994;12:233-4210.耿長山。黃芪的免疫藥理研究進展。中西醫(yī)結(jié)合雜志，1986；6：62-6411孟慶云。中國中醫(yī)藥發(fā)展50年。P28012伍敦裕，林海玲。黃芪注射液治療慢性腎功能不全患者血漿內(nèi)皮素變化及其意義。實用醫(yī)學雜志，1998；14：6112、研究目的與意義： 研究目的： 通過體外人腹膜間皮細胞培養(yǎng)觀察中藥黃芪在抑制由高糖引起的TGF-過度表達中的作用，通過動物實驗從組織病理學角度觀察黃芪對腹膜間皮細胞完整性的維護和腹膜纖維化的抑制以及巨噬細胞功能調(diào)節(jié)等方面的作用，通過臨床觀察了解黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運功能和免疫功能的影響，從不同層面了解黃芪在阻止/

14、延緩腹膜功能衰竭中的作用及其機制，為臨床上改善長期腹膜透析患者透析療效提供一種新的治療方法。 研究意義： 隨著臨床腹膜透析的廣泛應(yīng)用以及腹膜透析患者壽命的延長，臨床上因長期腹膜透析導致腹膜功能衰竭進而透析失敗的患者越來越多。中藥黃芪在我國分布廣泛且有2000多年的應(yīng)用歷史。目前臨床上已有黃芪注射液制劑，并且由于黃芪可以直接注入腹腔，因此通過從不同層面了解黃芪在阻止/延緩腹膜功能衰竭中的作用及其機制的研究，在臨床上推廣使用黃芪來阻止/延緩腹膜功能衰竭從而延長ESRD患者腹膜透析時間、提高透析質(zhì)量、減少透析失敗率，提高腹膜透析遠期療效具有廣泛的應(yīng)用前景。3、技術(shù)查新： 參見附頁。二、研究內(nèi)容：研究

15、內(nèi)容： 本課題采用體外細胞培養(yǎng)、動物實驗、組織病理學與臨床相結(jié)合的系統(tǒng)研究方法，從多個方面研究中藥黃芪在防止/延緩腹膜功能衰竭中的作用，并從不同層面和角度解釋其作用機理。通過體外人腹膜間皮細胞培養(yǎng)了解黃芪在抑制間皮細胞TGF-表達方面的作用；通過動物實驗從組織病理學的角度直觀了解黃芪在間皮細胞保護以及在阻止/延緩腹膜纖維化中的作用；通過臨床應(yīng)用，了解黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運功能以及免疫功能方面的影響。關(guān)鍵技術(shù)和技術(shù)難點：（1）體外人腹膜間皮細胞培養(yǎng)及干預(yù)方法的建立；（2）動物腹膜透析模型及干預(yù)方法的建立； （3）TGF-、TNF-免疫組化檢測；（4）巨噬細胞吞噬功能的誘導及檢測；（5）標準腹膜透析腹膜轉(zhuǎn)

16、運功能改變的研究。課題的特色和創(chuàng)新之處：（1）腹膜功能衰竭是一多因素參與的病理過程，由于西藥作用較為單一，因此在如何有效阻止/延緩腹膜功能衰竭的研究中顯得較為局限，而中藥黃芪具有多重藥理作用，在阻止/延緩腹膜功能衰竭的研究中具有較大的優(yōu)勢。（2）由于部分藥物無法進行腹腔內(nèi)應(yīng)用，因此以往的研究大多停留在體外試驗的水平，而黃芪可以安全地應(yīng)用于腹腔內(nèi)注射，本課題的研究成果能夠直接應(yīng)用于臨床。（3）通過從體外細胞培養(yǎng)、動物實驗、組織病理學以及臨床全面地對黃芪在阻止/延緩腹膜功能衰竭中的作用及機制進行研究，至今尚未見類似的研究報道。主要技術(shù)指標：（1）黃芪抑制間皮細胞TGF-分泌的指標；（2）反映巨噬細

17、胞免疫功能的TNF-分泌水平以及吞噬功能的指標；（3）黃芪對腹膜間皮細胞的維護和抑制纖維化的指標；（3）黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運功能的影響。三、研究方法及技術(shù)路線：研究工作總體思路： 本研究首先通過人腹膜間皮細胞體外培養(yǎng)的方法在培養(yǎng)基中添加黃芪觀察其抑制由高糖引起的間皮細胞TGF-過度表達中的作用，了解黃芪與腹膜間皮細胞TGF-表達之間的關(guān)系。然后通過腹膜透析動物模型從組織病理學角度直觀了解黃芪對腹膜間皮細胞損傷的保護以及抑制腹膜纖維化方面的作用。最后通過在臨床上的應(yīng)用了解黃芪對腹膜轉(zhuǎn)運功能以及腹膜免疫功能的影響，并探討其作用機制。從而為臨床上阻止/延緩長期腹膜透析患者因腹膜纖維化、腹膜反復(fù)感染導致的腹

18、膜功能衰竭提供新的治療方法。技術(shù)路線：（1）體外細胞培養(yǎng)部分： 從擇期手術(shù)小網(wǎng)膜切除的標本獲得人網(wǎng)膜組織，按照文獻方法培養(yǎng)間皮細胞，通過調(diào)整原代（1-9代）人腹膜間皮細胞培養(yǎng)液中葡萄糖濃度，在1.5%、4.5%葡萄糖條件下觀察添加與不添加黃芪對腹膜間皮細胞TGF-表達的影響，TGF-用免疫組化方法檢測。（2）動物模型部分： 按照標準腹膜透析小鼠動物模型建立方法建立小鼠腹膜透析模型，分別采用添加和不添加黃芪的葡萄糖濃度為1.5%、4.5%的透析液進行腹膜透析，8周后取小鼠腹膜組織，10%甲醛溶液固定、脫水、 石蠟包埋后HE、PAS、PASM染色，在光學顯微鏡下進行病理組織學檢查。（3）臨床部分：

19、 在臨床上選擇長期腹膜透析患者，采用自身對照的方法觀察添加黃芪前后患者腹膜轉(zhuǎn)運功能和患者透析液中TNF-濃度以及巨噬細胞吞噬功能的變化。（4）總結(jié)資料，分析結(jié)果。研究方法：（1）組織細胞培養(yǎng)方法。（2）動物實驗學研究方法。（3）組織病理學方法。（4）生化分析方法。四、現(xiàn)有研究條件和工作基礎(chǔ)：1、現(xiàn)有工作基礎(chǔ)： -臨床上有大量的長期腹膜透析的隨訪病人。研究者已成功掌握了人腹膜間皮細胞培養(yǎng)方法和腹膜透析小鼠動物模型建立方法，具備了TGF-、TNF-的檢測能力，以及本研究所需的組織病理學檢查條件。同時在預(yù)實驗中已經(jīng)得出黃芪能有效抑制體外培養(yǎng)人腹膜間皮細胞TGF-的表達。因此，本研究具有很強的可行性和

20、較高的成功率。2、項目負責人近年來研究成績簡介 近年發(fā)表相關(guān)論文： 近年研究成果：3、研究隊伍： 4、支撐條件： 五、計劃進度：1、總進度和年度進度： 2003.012003.03課題準備，訂購動物與試劑。 2003.042003.06細胞培養(yǎng)研究部分。 2003.062003.12動物實驗部分。 2003.062004.09臨床部分。 2004.092004.12總結(jié)資料，分析結(jié)果，科研鑒定。2、項目完成形式：（1）項目完成可通過論文形式考察，預(yù)計可在核心期刊發(fā)表論文4-6篇。（2）細胞培養(yǎng)研究部分通過對TGF-表達的檢測可以了解高糖在腹膜間皮細胞TGF-表達中作用，了解黃芪在拮抗TGF-過

21、度表達中的作用。（3）動物實驗部分通過腹膜組織病理學檢查了解黃芪對腹膜間皮細胞損傷的保護以及抑制腹膜纖維化方面的作用，可通過病理切片形式表達。（4）臨床研究部分可通過治療前后患者TGF-、TNF-水平以及巨噬細胞吞噬功能了解腹膜功能的改變，用差異性來表示。（5）通過成果考核。（6）成果可達到國際先進水平。六、項目研究預(yù)期成果及效益：預(yù)期達到的主要技術(shù)指標：（1）黃芪有效抑制體外培養(yǎng)人腹膜間皮細胞的TGF-的分泌。（2）應(yīng)用黃芪后在腹膜透析動物模型腹膜組織病理檢查中發(fā)現(xiàn)黃芪能維護腹膜間皮細胞的完整性和抑制腹膜纖維化的發(fā)生。（3）黃芪能改善腹膜透析病人的腹膜轉(zhuǎn)運功能和增強巨噬細胞的免疫功能。（4）

22、該研究成果預(yù)期達到國際領(lǐng)先水平，為臨床上阻止/延緩腹膜功能衰竭提供新的治療方法。 經(jīng)濟效益和社會效益：通過本課題的系列研究，預(yù)期可以明確黃芪有效阻止/延緩長期腹膜透析病人腹膜功能衰竭的進程，從而延長腹膜透析時間、提高腹膜透析質(zhì)量。從經(jīng)濟效益來講，腹膜透析是一種價格低廉的腎臟替代療法，長期的腹膜透析必將大大減輕社會及其個人的經(jīng)濟負擔。從社會效益來講，腹膜透析具有較高的生活質(zhì)量，可以使ESRD病人重返社會并參加力所能及的工作，產(chǎn)生積極的社會效應(yīng)。并且，通過此療法的成功也可以提升中藥治療在國際上的影響。七、承擔項目單位及分工 八、經(jīng)費概算及來源：經(jīng)費預(yù)算總額及分類科 目名 稱單價（萬元）數(shù) 量主要依

23、據(jù)金額（萬元）業(yè) 務(wù) 費文獻檢索論文發(fā)表科研鑒定30實驗材料胰蛋白水解酶01092/100l200l細胞培養(yǎng)022小牛血清003/100ml1000ml細胞培養(yǎng)030RMPI1640培養(yǎng)基0009/500ml2000ml細胞培養(yǎng)004HAM-12培養(yǎng)基0014/500ml5000 ml細胞培養(yǎng)014抗細胞角蛋白抗體0242/100l200l細胞培養(yǎng)050抗波形蛋白抗體0242/100l200l細胞培養(yǎng)050抗因子抗原抗體0166/100l200l細胞培養(yǎng)040抗CD45抗體035/100l200l細胞培養(yǎng)070TGF-單克隆抗體025/96次2生化檢測050TNF-單克隆抗體0185/96次2

24、生化檢測040細菌脂多糖0126/100g200g免疫誘導025黃芪注射液150腹膜透析液300其他試劑100病理檢查150動物實驗小鼠動物實驗100其 他臨床標本收集200總 計： 17 萬元，其中自籌： 萬元，申請撥款 17 萬元九、研究人員：姓 名單 位性別出生年月專 業(yè)專業(yè)技術(shù)職務(wù)承擔工作簽章項目主要負責人參加項目研究人員十、承擔單位審查及承諾意見、蓋章 第一承擔單位 第二承擔單位 （法人簽字） （法人簽字） 蓋章 蓋章 年 月 日 年 月 日十一、協(xié)作單位及審查承諾意見、蓋章 （法人簽字） 蓋章 年 月 日 十二、項目主管部門審查承諾意見、蓋章 蓋章 年 月 日 課題類別衛(wèi)生廳編號湖

25、南省醫(yī)藥衛(wèi)生科學技術(shù)研究課題計劃（合同）申 請 書課題名稱：腦脊液中-淀粉樣蛋白和tau蛋白的正常值及臨床意義的研究 湖南省衛(wèi)生廳一九九三年十月制簡 表研究課題名稱(25字內(nèi))腦脊液中-淀粉樣蛋白和tau蛋白的正常值 及臨床意義的研究 類別A.重點 B.一般 C.青年基金申請金額 2萬元起止年月起2002年10月止 2003年9月申請者姓名性別男出生年月 1966年7月專業(yè)技術(shù)職務(wù)主治醫(yī)師學位博士所在部門工作單位名稱所在地性質(zhì)A.高等院校 B.醫(yī)療衛(wèi)生單位 C.科研單位 D.其它課題組總?cè)藬?shù)高級中級初級輔助人員博士碩士學士參加單位數(shù)52212211 課題組主要成員含負責人姓名年齡專業(yè)技術(shù)職務(wù)年

26、參加月數(shù)工作單位項目中的分工簽章35主治醫(yī)師全程負責44副主任醫(yī)師全程協(xié)作40主任醫(yī)師全程負責31主管技師全程協(xié)作28醫(yī)師全程協(xié)作-1-研究內(nèi)容和意義摘要200字內(nèi)腦脊液中-淀粉樣蛋白（-Amyloid Protein, -AP，A）是淀粉樣前體蛋白（APP）在分泌酶的作用下裂解出來的含有40-43個氨基酸的蛋白質(zhì)，腦脊液中A有A40和A42兩種形式；兩者在正常老年人和Alzheimer?。ˋD）腦脊液中均存在，A42與AD老年斑形成密切相關(guān)。Tau蛋白是腦細胞內(nèi)的一種功能蛋白，有形成細胞骨架、組裝和穩(wěn)定微管的作用。正常腦細胞內(nèi)Tau蛋白磷酸化位點很少，因而不易被磷酸化，腦脊液中Tau蛋白的含

27、量較少。AD患者腦細胞內(nèi)Tau蛋白磷酸化位點增多，Tau蛋白呈異常磷酸化，腦脊液中Tau蛋白的含量增多。本研究擬采用放射免疫法檢測不同年齡段人群（包括癡呆和非癡呆）腦脊液40、A42和Tau蛋白含量，通過大樣本的分析，界定其參考正常值范圍，為Alzheimer病的診斷提供可靠的實驗室依據(jù)。腦脊液中-淀粉樣蛋白（-Amyloid Protein, -AP，A）是淀粉樣前體蛋白（APP）在分泌酶的作用下裂解出來的含有40-43個氨基酸的蛋白質(zhì)，腦脊液中A有A40和A42兩種形式；兩者在正常老年人和Alzheimer?。ˋD）腦脊液中均存在，A42與AD老年斑形成密切相關(guān)。腦脊液中-淀粉樣蛋白（-A

28、myloid Protein, -AP，A）是淀粉樣前體蛋白（APP）在分泌酶的作用下裂解出來的含有40-43個氨基酸的蛋白質(zhì)，腦脊液中A有A40和A42兩種形式；兩者在正常老年人和Alzheimer?。ˋD）腦脊液中均存在，A42與AD老年斑形成密切相關(guān)。-2-一 本研究的立項依據(jù)和目標本課題研究的意義及同類研究工作國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與存在問題，列出主要參考文獻隨著社會人口逐步進入老齡化階段，Alzheimer病（AD）已成為人類的第四大死因。AD的研究具有重要的經(jīng)濟意義和社會意義。目前AD的診斷主要靠臨床表現(xiàn)、神經(jīng)心理學測試和影像學檢查，缺乏客觀的實驗室診斷依據(jù)。AD的基本病理變化是老年斑和神

29、經(jīng)元纖維纏結(jié)，前者的主要成分是淀粉樣蛋白（A），后者的主要成分是Tau蛋白。AD患者腦脊液中A水平是增高還是降低，各家報道不一致1-4。其原因主要與沒有分別測定A40、A42和總A有關(guān)；且因均采用ELASA法，測出的結(jié)果受主客觀影響較大，致使A測定的應(yīng)用價值降低。AD患者腦脊液Tau蛋白水平是增高的，國內(nèi)外報道是一致的5-6。由此推斷：腦脊液Tau蛋白和A聯(lián)合測定可能會提高實驗室診斷AD的應(yīng)用價值。雖然，國外新近有腦脊液Tau蛋白和A正常值的報道7 ，但目前尚無國人腦脊液Tau蛋白和A的參考正常值。界定國人的腦脊液Tau蛋白和A的參考正常值可為Alzheimer病的診斷提供可靠的實驗室依據(jù)。參

30、考文獻1 丁新生，程虹，張雪玲，等。腦脊液中淀粉樣蛋白檢測對老年期癡呆的診斷意義。臨床神經(jīng)病學雜志，2001，1：3-5。2 吳愷，胡剛，國泓，等。Alzheimer病患者腦脊液淀粉樣蛋白的檢測。中華老年醫(yī)學雜志，1999，1：13-15。3 王磊，袁錦楣，郝洪軍，等。Alzheimer病血清和腦脊液-淀粉樣蛋白的測定。中國神經(jīng)精神疾病雜志，1999，2：102-103。4 Kanai M,Matsubara E,Isoe K,et al.Longitudinal study of cerebraospinal fluid levels of tau, A1-40,A1-42(43) in A

31、lzheimers disease:A stady in Japan,Ann Neurology,1998,44:17-26.5 王琨，丁新生，程虹。阿爾茨海默病患者腦脊液Tau、A1-40、A1-42（43）蛋白測及其臨床意義。徐州醫(yī)學院學報，2000，2：109-112。6 Shoji M,Matsubara E,Kanai M,et al.Combination assay of CSF tau , A1-40 and A1-42 as a biochemical marker of Alzheimers disease.J Neurol Sci ,1998,2:134-140.7 Sj

32、ogren M,et al .Tau and Abeta42 in cerebrospinal fluid from healthy adults 21-93 years of age:establishment of reference values .Clin Chem 2001;47(10):1776-81.-3-2研究內(nèi)容、研究目標和擬解決的關(guān)鍵問題研究內(nèi)容、研究目標： 本研究擬通過對不同年齡段非AD和AD病人腦脊液中 A40、A42和Tau蛋白的檢測，確定腦脊液中A40、A42和Tau蛋白的參考正常值。為AD的診斷提供實驗室依據(jù)。擬解決的問題：理論上說，只有癡呆患者（包括AD性和非A

33、D性）的腦脊液A和Tau蛋白異常，正常人、非神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者和非癡呆神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者腦脊液中A40、A42和Tau蛋白含量是一致的。但為證實這一理論，先將非癡呆組分為正常人、非神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者和非癡呆神經(jīng)系統(tǒng)疾病三個亞組的腦脊液分別檢測，如這一理論得到證實，則將這三個亞組的腦脊液A和Tau蛋白的含量視為正常人的含量來分析，以增加樣本量，克服真正的正常人腦脊液來源不足的弊端。 -4-3本課題的特色和創(chuàng)新之處及立論根據(jù)（與國內(nèi)外類似研究比較） 腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)的一種無色透明液體，腦細胞的代謝產(chǎn)物可釋放到腦脊液中，腦脊液中成分的變化一定程度反應(yīng)了腦細胞的活動情況。腦脊液取材操作簡單，

34、放射免疫法檢測受主觀干擾因素少，結(jié)果可靠。 目前，國內(nèi)外關(guān)于腦脊液A和Tau蛋白檢測的報道主要是對已確診為癡呆的研究，對非癡呆患者腦脊液Tau蛋白和A的檢測的報道甚少。本課題擬通過對非癡呆患者的不同人群腦脊液A和Tau蛋白含量的研究，界定其參考正常值，為確診AD提供實驗室依據(jù)。 4研究工作的預(yù)期結(jié)果或成果 預(yù)期通過對不同年齡段的非癡呆人群腦脊液Tau蛋白和 A的檢測，界定其人群的參考正常值。 -5-5本課題的情報查新情況及結(jié)論 檢索關(guān)鍵詞（個）： 檢索年限（前3年以上）： 檢索刊物名稱（至少有種系國外刊物）： 檢索手段（光盤、手工、其它）： 檢索結(jié)論： 檢索機構(gòu)及檢索人蓋章-6-二、研究方法和

35、路線、 擬采取的研究實驗方法、步驟、技術(shù)路線及可行性、可靠性論證方法、步驟、技術(shù)路線：1） 腦脊液的收集：包括所有行腰穿（神經(jīng)內(nèi)科和非神經(jīng)內(nèi)科住院患者）時的腦脊液，除外有明顯出血的腦脊液，經(jīng)離心沉淀后分管于-20冰箱中保存待測。根據(jù)癡呆的臨床診斷標準分為癡呆組和非癡呆組，然后再分亞組。詳見表。 AD 癡呆組- 非AD 正常人 非癡呆組-非神經(jīng)系統(tǒng)疾病 非癡呆神經(jīng)系統(tǒng)疾病 2） 選用相應(yīng)的試劑合，用放射免疫法測定。3） 實驗數(shù)據(jù)的分析、處理。4） 書寫論文?？尚行?、可靠性論證： 1） 腰穿留取腦脊液化驗檢查是神經(jīng)內(nèi)科診斷疾病常用的方法，因而收集足夠的腦脊液是可行的。2） 本院核醫(yī)學科有一流技術(shù)的

36、醫(yī)技人員和成套設(shè)備，能夠完成該科題的實驗檢測。3） 試劑合可在國內(nèi)外生物技術(shù)公司購買。 -7-2、研究工作的總體安排及進度： （1）2002年10月-2003年3月 規(guī)范實驗程序，收集標本。（2）2003年4月-2003年6月 購買試劑，實驗階段。（3）2003年7月-2003年9月 實驗數(shù)據(jù)處理，結(jié)果分析，撰寫論文。-8-三、實現(xiàn)本課題預(yù)期目標已具備的條件1與本課題有關(guān)的研究工作基礎(chǔ) 本研究負責人在讀碩士研究生期間（1997.92000.7）曾參加國家“九五”攻關(guān)課題Alzheimer病的流行病學調(diào)查，與該課題密切相關(guān)。2實現(xiàn)本項研究已有的主要儀器設(shè)備，尚缺的儀器設(shè)備及解決途徑本院核醫(yī)學科有成套的儀器設(shè)備，已開展放射免疫檢測多年，不缺任何儀器設(shè)備，只需購買相應(yīng)的試劑合。3課題負責人及主要成員的學歷和研究工作簡歷，已取得的主要科研成就 4不需動物實驗-9-四、申請課題經(jīng)費預(yù)算預(yù)算支出科目金額（萬元）計算根據(jù)及理由合計21、科研業(yè)務(wù)費2、實驗材料費3、小型土建安裝費4、協(xié)作費0.510 0.5調(diào)研費 萬元；業(yè)務(wù)交流費 萬元；培訓費 萬元。編程軟件材料費 萬元；資料、書籍購買費 萬元直接主管部門開戶銀行及帳號：主要研究單位開戶銀行及帳號-11-五、合作單位意見（一）同意申請書的內(nèi)容并做到：1、保證參加合作研究的人員、物力