細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果準(zhǔn)確性的影響因素ppt課件

1、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果準(zhǔn)確性的影響要素一、實(shí)驗(yàn)誤差分析及改良措施鱟試劑質(zhì)量及靈敏度標(biāo)示值得的影響 細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品效價(jià)及運(yùn)用的影響實(shí)驗(yàn)器皿的的影響樣品成份及理化性質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn)員的影響 環(huán)境的影響 1 鱟試劑質(zhì)量及靈敏度標(biāo)示值得的影響鱟試劑的質(zhì)量：抗干擾才干，穩(wěn)定性；鱟試劑靈敏度標(biāo)示值的準(zhǔn)確性 。 鱟試劑靈敏度的誤差 能否用細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家規(guī)范品標(biāo)定？ 標(biāo)示值能否準(zhǔn)確？2 細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品引起的誤差細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品種類細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品效價(jià)誤差細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品操作誤差細(xì)菌內(nèi)毒素單位表示誤差 細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品的錯(cuò)誤運(yùn)用 1 細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品種類細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)際規(guī)范品細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家規(guī)范品細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范

2、品 2 細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品效價(jià)誤差 細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家規(guī)范品與細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品之間或細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品與細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品之間的生物效價(jià)存在一定的誤差，用不同細(xì)菌內(nèi)毒素規(guī)范品復(fù)核同一批鱟試劑靈敏度時(shí)能夠存在一定的誤差。中國(guó)藥典要求“當(dāng)c在0.5-2(包括0.5和2)時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以標(biāo)示靈敏度為該批鱟試劑的靈敏度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果只需在這合格范圍內(nèi)表示鱟試劑標(biāo)示靈敏度準(zhǔn)確。3 內(nèi)毒素規(guī)范品操作誤差 取細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂輪在瓶頸上部悄然劃痕，用75%酒精棉球擦拭后啟開，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。正確正確易折點(diǎn)錯(cuò)誤易折點(diǎn)錯(cuò)誤留意：只能在安瓿的易折點(diǎn)上部開啟內(nèi)

3、毒素，不能沿易折點(diǎn)開啟，防止振蕩過程中內(nèi)毒素粘在封口膜上。 只能取1ml的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水復(fù)溶細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品。 假設(shè)運(yùn)用的為細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家規(guī)范品，可按其運(yùn)用闡明書中的方法將其稀釋至規(guī)定濃度后分裝保管。假設(shè)為細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品，為一次性運(yùn)用。 4 錯(cuò)誤運(yùn)用 有部分客戶運(yùn)用廠家消費(fèi)的細(xì)菌內(nèi)毒素來復(fù)核鱟試劑的靈敏度，這是一種錯(cuò)誤行為，更有甚者運(yùn)用廠家消費(fèi)的細(xì)菌內(nèi)毒素來交叉復(fù)核鱟試劑的靈敏度，這是一種嚴(yán)重錯(cuò)誤行為。 3 實(shí)驗(yàn)器皿的影響器皿的計(jì)量管理校正器皿的選擇規(guī)范器皿的正確處置1 器皿的選擇規(guī)范 鱟實(shí)驗(yàn)對(duì)器皿的要求：刻度準(zhǔn)確；內(nèi)外表光滑；易于清理。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查實(shí)驗(yàn)不宜選用注射器，最好運(yùn)用

4、經(jīng)過校正的刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不準(zhǔn)確，內(nèi)壁磨沙面吸附內(nèi)毒素，而且要特別留意注射器針頭引入的鐵離子對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，故不宜選用注射器。 假設(shè)用量不大，運(yùn)用頻率不高，建議大家選用本公司提供的一次性耗材。無熱原耗材是一種在此行業(yè)中被鑒定為無內(nèi)毒素和-葡聚糖污染的產(chǎn)品，其中包括, 無熱原試管、無熱原移液器吸頭。這些產(chǎn)品可以給您的任務(wù)帶來很大方便,另外，當(dāng)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差時(shí)可首先排除器皿方面的要素,很快分析判別出誤差緣由。 2 器皿的正確處置2005年版278頁細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法“實(shí)驗(yàn)預(yù)備規(guī)定：“將被洗滌的玻璃器皿用洗滌劑和自來水洗凈并烘干水分后，置洗液中浸泡4小時(shí)，取出將洗液瀝干，用自來水將剩余的

5、洗液洗凈，再用蒸餾水沖洗枯燥后置適宜的密閉金屬容器中，迅速置烤箱中，除去玻璃器皿外表能夠存在的外源性內(nèi)毒素。應(yīng)該特別留意，該規(guī)程明確規(guī)定最后沖洗玻璃器皿必需“用蒸餾水沖洗，禁用純化水沖洗。有的客戶運(yùn)用反浸透制備的純化水沖洗實(shí)驗(yàn)用玻璃器皿，結(jié)果實(shí)驗(yàn)中一切的陽性對(duì)照都為陰性，復(fù)核鱟試劑靈敏度時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差較大，這主要是由于純化水和蒸餾水的質(zhì)量不同所呵斥的。因純化水中存在的陰陽離子經(jīng)250高溫干烤不能完全被破壞，這時(shí)不同的離子就產(chǎn)生對(duì)鱟試劑酶反響抑制或加強(qiáng)的反響，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢驗(yàn)報(bào)告的權(quán)威性，我們應(yīng)該嚴(yán)厲遵守操作規(guī)程，用多效蒸餾水沖洗鱟實(shí)驗(yàn)用玻璃器皿。4 樣品成份及理化性質(zhì)的影響 -葡

6、聚糖樣物質(zhì)的影響PH值的影響金屬離子和弱酸陰離子的影響藥物濃度的影響 1 1 - -葡聚糖樣物質(zhì)的影響葡聚糖樣物質(zhì)的影響常見景象：假陽性。常見景象：假陽性。鱟試劑的特異性系指在藥品、生物制品和血液制鱟試劑的特異性系指在藥品、生物制品和血液制品中鱟試劑能準(zhǔn)確測(cè)出被測(cè)物質(zhì)內(nèi)毒素的才干，品中鱟試劑能準(zhǔn)確測(cè)出被測(cè)物質(zhì)內(nèi)毒素的才干，既不能呵斥樣品內(nèi)毒素的漏檢，也不能將其它物既不能呵斥樣品內(nèi)毒素的漏檢，也不能將其它物質(zhì)錯(cuò)判為內(nèi)毒素。質(zhì)錯(cuò)判為內(nèi)毒素。目前我公司研討證明，知能與鱟試劑發(fā)生反響的物質(zhì)有細(xì)菌內(nèi)毒素和-葡聚糖，而內(nèi)毒素反響曲線為S型特征曲線，-葡聚糖反響曲線為經(jīng)過0點(diǎn)的斜線。鱟試劑的特異性差的另一種

7、表現(xiàn)，是將其它物質(zhì)如-葡聚糖斷定為內(nèi)毒素，錯(cuò)誤將合格藥品判為不合格，呵斥制藥廠直接經(jīng)濟(jì)損失。鱟試劑反響機(jī)理圖判別假陽性的方法：1、特異性鱟試劑法；2、定量反響曲線分析法；3、家兔模擬實(shí)驗(yàn)法。2 PH值對(duì)反響速度的影響常見景象：樣品陽性不成立。鱟試劑與內(nèi)毒素反響的最適宜pH在6.5-8.0；pH 3 或10時(shí)，酶活性遭到抑制。相對(duì)活力PH7.0PH對(duì)反響速度的影響:影響酶原的激活；影響酶分子的構(gòu)象，過高過低的PH會(huì)改動(dòng)酶的活性中心的構(gòu)象，或甚至改動(dòng)整個(gè)酶分子的機(jī)構(gòu)使其變性失活。 故鱟實(shí)驗(yàn)時(shí)，供試品 pH 最好應(yīng)預(yù)調(diào)和6.5-8.0 為好，必要時(shí)可用無內(nèi)毒素的 HCl 或NaOH 稀溶液調(diào)理 pH

8、 值。美國(guó)、日本藥局方以及中國(guó)藥典故2005版規(guī)定檢品必需調(diào)理PH值6.0-8.0。3 金屬離子和弱酸陰離子 離子對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定結(jié)果影響較大，一方面陽離子如Fe3+、Al3+強(qiáng)度較大會(huì)引起內(nèi)毒素的聚集呵斥內(nèi)毒素部分濃度過高，同時(shí)還必需留意高價(jià)陽離子如Fe3+的氧化性對(duì)鱟試劑酶反響具有強(qiáng)抑制造用；重金屬離子如Ag+、Cu2+、Pb2+可以使蛋白量變性而使酶失活；另一方面鱟試劑必需在二價(jià)陽離子Ca2+、Mg2+的參與下才干被激活構(gòu)成凝膠反響。許多藥物因PH值10時(shí)，其中的陰離子會(huì)吸收鱟試劑中的Ca2+、Mg2+離子，使實(shí)驗(yàn)呈假陰性。4 藥物濃度1、10%葡萄糖注射液2、白蛋白、小牛血清3、醫(yī)用透

9、明質(zhì)酸鈉4、中藥類注射液 5 實(shí)驗(yàn)員的影響操作時(shí)嚴(yán)厲按操作規(guī)程進(jìn)展，安瓿開啟前應(yīng)先用酒精棉球擦拭曲頸部，用將頸部折斷，防止碎玻屑掉入安瓿內(nèi)。在鱟試劑的溶解、樣品的稀釋及加樣時(shí)，取樣均應(yīng)準(zhǔn)確。假設(shè)一人獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)，可先稀釋配制好內(nèi)毒素規(guī)范溶液和樣品溶液，然后開啟復(fù)溶鱟試劑，最后加樣，盡能夠縮短鱟試劑溶液暴露在空氣中的時(shí)間最好控制在15分鐘內(nèi)。6、環(huán)境的影響保溫時(shí)間保溫溫度1保溫溫度 將細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成2，進(jìn)展鱟實(shí)驗(yàn)，然后分別放置于25、28、31、34、37、41、43、46、49水浴保溫。實(shí)驗(yàn)中察看到凝膠構(gòu)成的速度隨著溫度的升高而加快，但到達(dá)49保溫90min也未出現(xiàn)凝膠。 從實(shí)驗(yàn)可以看出，溫度對(duì)鱟試劑的靈敏度影響很大，保溫溫度在2541之間，隨著溫度的升高，反響速度也升高，41尚未到達(dá)反響速度峰值，25 時(shí)反響速度已相當(dāng)快；在4146之間，溫度對(duì)鱟試劑的靈敏度無明顯影響；到達(dá)49或更高溫度時(shí)，隨溫度升高而使酶蛋白逐漸變性，那么鱟試劑被破壞，反響速度反而降低。 2保溫時(shí)間 將細(xì)菌內(nèi)毒素任務(wù)規(guī)范品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成2，進(jìn)展鱟實(shí)驗(yàn)，37保溫，分別在10、20、30、40、50、70min時(shí)察看