病毒雞胚培養(yǎng)法實(shí)用教案

1、（一）實(shí)驗(yàn)（一）實(shí)驗(yàn)(shyn)目目的的 1.1.了解雞胚培養(yǎng)有哪幾種常用的接種方法。了解雞胚培養(yǎng)有哪幾種常用的接種方法。 2.2.掌握掌握(zhngw)(zhngw)雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)雞新城疫病毒的操作技術(shù)。雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)雞新城疫病毒的操作技術(shù)。第1頁/共17頁第一頁，共18頁。（二）實(shí)驗(yàn)（二）實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)原理原理 實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)病毒常使用實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)病毒常使用(shyng)(shyng)動(dòng)物接種和雞胚培養(yǎng)兩種方法，而雞胚培動(dòng)物接種和雞胚培養(yǎng)兩種方法，而雞胚培養(yǎng)更為常見。一般而言，禽病毒病大部分可經(jīng)雞胚分離病毒，其他動(dòng)物病如養(yǎng)更為常見。一般而言，禽病毒病大部分可經(jīng)雞胚分離病毒，

2、其他動(dòng)物病如犬瘟熱也可經(jīng)雞胚分離病毒。犬瘟熱也可經(jīng)雞胚分離病毒。 第2頁/共17頁第二頁，共18頁。 雞胚接種技術(shù)是養(yǎng)禽業(yè)中一種相對(duì)新的疫苗接種方法。這種方法就是對(duì)孵化后期的雞胚接種某些活的病毒雞胚接種技術(shù)是養(yǎng)禽業(yè)中一種相對(duì)新的疫苗接種方法。這種方法就是對(duì)孵化后期的雞胚接種某些活的病毒疫苗。這些疫苗。這些(zhxi)(zhxi)病毒疫苗不會(huì)對(duì)孵化率產(chǎn)生不利的影響，通過這種方式接種疫苗后孵出的雛雞具有免病毒疫苗不會(huì)對(duì)孵化率產(chǎn)生不利的影響，通過這種方式接種疫苗后孵出的雛雞具有免疫保護(hù)力。疫保護(hù)力。 第3頁/共17頁第三頁，共18頁。（三）實(shí)驗(yàn)（三）實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)器材器材 1. 1.雞

3、胚：要選擇雞胚：要選擇SPFSPF雞胚或低母源抗體的雞胚。從實(shí)踐看，法氏囊炎病毒對(duì)抗體相當(dāng)敏感，所以要用無母源雞胚或低母源抗體的雞胚。從實(shí)踐看，法氏囊炎病毒對(duì)抗體相當(dāng)敏感，所以要用無母源抗體的雞胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵御母源抗體的作用而得以繁殖致死抗體的雞胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵御母源抗體的作用而得以繁殖致死(zh s)(zh s)雞胚。雞胚。 孵化前的雞胚應(yīng)注意消毒，置孵化前的雞胚應(yīng)注意消毒，置37-3837-38、相對(duì)濕度、相對(duì)濕度45-60%45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋數(shù)次，孵蛋第的孵卵器中孵育，每日翻蛋數(shù)次，孵蛋第4 4天開天開始照蛋，棄去無精蛋和死胚。多采

4、用始照蛋，棄去無精蛋和死胚。多采用9-119-11日齡的活胚接種。日齡的活胚接種。第4頁/共17頁第四頁，共18頁。（四）實(shí)驗(yàn)（四）實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)方法方法1. 1.接種前的準(zhǔn)備：接種前的準(zhǔn)備：a.a.雞胚的準(zhǔn)備：選擇雞胚的準(zhǔn)備：選擇9-119-11日齡的雞胚，在照蛋時(shí)以記號(hào)日齡的雞胚，在照蛋時(shí)以記號(hào)筆勾出氣室，于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區(qū)筆勾出氣室，于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區(qū)域中，在血管之間的間隙域中，在血管之間的間隙(jin x)(jin x)劃上記號(hào)，作為劃上記號(hào)，作為接種部位。用接種部位。用3%3%碘酊對(duì)接種部位進(jìn)行消毒，再用碘酊對(duì)接種部位進(jìn)行消毒，再用75%

5、75%酒精棉球擦一遍，在接種定位處打孔，氣室向上酒精棉球擦一遍，在接種定位處打孔，氣室向上豎放于蛋托上。豎放于蛋托上。第5頁/共17頁第五頁，共18頁。雞胚的模式雞胚的模式(msh)(msh)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)1.1.卵殼卵殼 2. 2.絨毛尿囊膜絨毛尿囊膜 3. 3.尿囊腔尿囊腔4.4.羊水腔羊水腔 5. 5.卵黃囊卵黃囊 6. 6.雞胚胎雞胚胎 7. 7.卵白卵白第6頁/共17頁第六頁，共18頁。 b.b.病毒材料的準(zhǔn)備：要分離培養(yǎng)的病毒材料應(yīng)是無菌的，因此在處理材料的過程中，應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作病毒材料的準(zhǔn)備：要分離培養(yǎng)的病毒材料應(yīng)是無菌的，因此在處理材料的過程中，應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行，將新城疫弱

6、毒活疫苗按照每進(jìn)行，將新城疫弱毒活疫苗按照每10001000羽份配成羽份配成250ml,250ml,為達(dá)到無菌的目的，可在每毫升接種物中加入為達(dá)到無菌的目的，可在每毫升接種物中加入(jir)(jir)青霉素和鏈霉素各青霉素和鏈霉素各100-5000IU100-5000IU，置室溫中，置室溫中1h1h處理。處理。第7頁/共17頁第七頁，共18頁。法氏囊病毒(bngd)的分離 取疑似感染病毒的法氏囊，稱重，按1:5（w/v）加入生理鹽水，研磨，-20，反復(fù)凍融2次；每次冷凍時(shí)間以研磨物結(jié)冰為準(zhǔn)； 將凍融物轉(zhuǎn)入(zhun r)離心管中，3000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將上清取出，使用無菌濾器過濾第8頁/

7、共17頁第八頁，共18頁。2.2.接種接種(jizhng)(jizhng) 雞胚接種的方法雞胚接種的方法(fngf)有幾種：有幾種：絨毛(rngmo)尿囊腔內(nèi)接種 絨毛尿囊膜接種羊膜腔接種卵黃囊內(nèi)接種第9頁/共17頁第九頁，共18頁。 取取10-1210-12日齡的雞胚，照日齡的雞胚，照蛋選擇血管較少的部位做蛋選擇血管較少的部位做一記號(hào)，用磨蛋器磨一于一記號(hào)，用磨蛋器磨一于縱軸平行的裂痕，小心挑縱軸平行的裂痕，小心挑開蛋殼，將白色的殼膜用開蛋殼，將白色的殼膜用針尖小心挑破，不要傷及針尖小心挑破，不要傷及血管豐富而透明的絨毛血管豐富而透明的絨毛(rngmo)(rngmo)尿囊膜，在氣尿囊膜，在氣

8、室頂端鉆一小孔，用滴管室頂端鉆一小孔，用滴管貼近小孔，輕輕一吸，絨貼近小孔，輕輕一吸，絨毛毛(rngmo)(rngmo)尿囊膜便下尿囊膜便下陷成一小凹。陷成一小凹。絨毛(rngmo)尿囊膜接種絨毛絨毛(rngmo)(rngmo)尿囊膜接種尿囊膜接種1.1.雞胚胎雞胚胎2.2.羊膜腔羊膜腔3.3.絨毛絨毛(rngmo)(rngmo)尿囊膜尿囊膜第10頁/共17頁第十頁，共18頁。 取取10-1210-12日齡的雞胚，消毒日齡的雞胚，消毒氣室頂上的蛋殼，并將氣室氣室頂上的蛋殼，并將氣室頂端的蛋殼銼一三角形的裂頂端的蛋殼銼一三角形的裂痕，用滅菌鑷子揭去裂痕部痕，用滅菌鑷子揭去裂痕部位的蛋殼和殼膜，用

9、滅菌平位的蛋殼和殼膜，用滅菌平頭鑷子刺破尿囊膜，并輕輕頭鑷子刺破尿囊膜，并輕輕夾去羊膜，用小號(hào)針頭刺進(jìn)夾去羊膜，用小號(hào)針頭刺進(jìn)羊膜腔內(nèi)，注入羊膜腔內(nèi)，注入(zh r)(zh r)的的病毒接種液，以氧化鋅膠布病毒接種液，以氧化鋅膠布封口，滴上溶化的固體石蠟。封口，滴上溶化的固體石蠟。放回孵化器，使蛋直立孵化。放回孵化器，使蛋直立孵化。羊膜(yngm)腔接種羊膜羊膜(yngm)(yngm)腔接種腔接種1.1.雞胚胎雞胚胎2.2.羊膜羊膜(yngm)(yngm)腔腔3.3.絨毛尿囊膜絨毛尿囊膜4.4.羊膜羊膜(yngm)(yngm)第11頁/共17頁第十一頁，共18頁。 選擇選擇6-8日齡的雞胚，日

10、齡的雞胚，照蛋檢查，劃出氣室照蛋檢查，劃出氣室和胎位，并以氣室向和胎位，并以氣室向上豎立在蛋托上，氣上豎立在蛋托上，氣室端的蛋殼經(jīng)消毒后室端的蛋殼經(jīng)消毒后以打孔器鉆一小孔，以打孔器鉆一小孔，將注射針頭刺過小孔，將注射針頭刺過小孔，沿著卵的縱軸刺入約沿著卵的縱軸刺入約3cm，然后注入的病，然后注入的病毒接種液，用氧化鋅毒接種液，用氧化鋅膠布膠布(jiob)及石蠟及石蠟封口后放回孵化器中封口后放回孵化器中培養(yǎng)。培養(yǎng)。卵黃(lunhung)囊內(nèi)接種卵黃卵黃(lunhung)囊接種囊接種第12頁/共17頁第十二頁，共18頁。雞胚的各種接種途徑1.絨毛尿囊膜接種 2.尿囊腔接種3.羊水(yngshu)腔

11、接種 4.卵黃囊接種第13頁/共17頁第十三頁，共18頁。絨毛(rngmo)尿囊腔內(nèi)接種 絨毛(rngmo)尿囊膜接種羊膜(yngm)腔接種卵黃囊內(nèi)接種3.3.收毒：收毒：病毒的收毒根據(jù)接種的途徑而定。病毒的收毒根據(jù)接種的途徑而定。尿 囊 液絨毛尿囊膜羊 水卵黃液和卵黃膜第14頁/共17頁第十四頁，共18頁。4.4.廢料廢料(filio)(filio)處理處理 操作完畢，將所有操作完畢，將所有(suyu)(suyu)的用具煮沸消毒，擦凈后再以消毒水浸洗，卵殼、殼膜和胚胎等殘物煮沸消毒的用具煮沸消毒，擦凈后再以消毒水浸洗，卵殼、殼膜和胚胎等殘物煮沸消毒后棄去。后棄去。第15頁/共17頁第十五頁，共18頁。（五）實(shí)驗(yàn)（五）實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)作業(yè)作業(yè) 1. 1.用雞胚培養(yǎng)病毒用雞胚培養(yǎng)病毒(bngd)(bngd)，在選用雞胚時(shí)應(yīng)注意什么問題？，在選用雞胚時(shí)應(yīng)注意什么問題？ 2.2.絨毛尿囊腔內(nèi)接種在培養(yǎng)和收毒過程中應(yīng)注意哪些問題？絨毛尿囊腔內(nèi)接種在培養(yǎng)和收毒過程中應(yīng)注意哪些問題？第16頁/共17頁第十六頁，共18頁。感謝您的觀看(gunkn)！第17頁/共17頁第十七頁，共18頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.掌握(zh