現(xiàn)代分離分析方法2

1、 在電解質(zhì)溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作在電解質(zhì)溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象，稱之為象，稱之為電泳電泳。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。 19371937年，年， TiseliusTiselius，瑞典，瑞典) )將蛋白質(zhì)混合將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩沖溶液之間，兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電液放在兩段緩沖溶液之間，兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電泳，第一次將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋

2、白和泳，第一次將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和、球蛋白；球蛋白； 發(fā)現(xiàn)樣品的遷移速度和方向由其電荷和淌度決定；發(fā)現(xiàn)樣品的遷移速度和方向由其電荷和淌度決定； 第一次第一次的的自由溶液電泳；自由溶液電泳；第一臺電泳儀第一臺電泳儀； 1948年，年，獲諾貝爾化學(xué)獎。獲諾貝爾化學(xué)獎。 利用利用電泳電泳現(xiàn)象對某些化學(xué)或生物物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方現(xiàn)象對某些化學(xué)或生物物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方法和技術(shù)叫法和技術(shù)叫電泳法電泳法或或電泳技術(shù)電泳技術(shù)。 按按形狀分類形狀分類：U U型管電泳、柱狀電泳、板電泳；型管電泳、柱狀電泳、板電泳； 按按載體分類載體分類：濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、：濾紙電泳、瓊脂電

3、泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳；自由電泳； 傳統(tǒng)電泳分析：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無傳統(tǒng)電泳分析：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無法與其他分析相比。法與其他分析相比。 19811981年，年，JorgensonJorgenson和和LuckasLuckas，用，用7575m mm m內(nèi)徑石英毛細(xì)管內(nèi)徑石英毛細(xì)管進(jìn)行電泳分析，柱效高達(dá)進(jìn)行電泳分析，柱效高達(dá)4040萬萬/m/m，促進(jìn)電泳技術(shù)發(fā)生了根本，促進(jìn)電泳技術(shù)發(fā)生了根本變革，迅速發(fā)展成為可與變革，迅速發(fā)展成為可與GCGC、HPLCHPLC相媲美的嶄新的分離分析相媲美的嶄新的分離分析技術(shù)技術(shù)高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳。 毛細(xì)管的采用使

4、產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減毛細(xì)管的采用使產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應(yīng)，使電場電壓可以很高。小了溫度效應(yīng)，使電場電壓可以很高。 電壓升高，電場推動力大，又可進(jìn)一步使柱徑變小，電壓升高，電場推動力大，又可進(jìn)一步使柱徑變小，柱長增加，柱長增加， 高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬塊板數(shù)高達(dá)幾十萬塊/ /米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬。米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬。 電場作用下，毛細(xì)電場作用下，毛細(xì)管柱中出現(xiàn)管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。象和電滲流現(xiàn)象。 帶電粒子的帶電粒子的遷移速度遷移速度= =電泳電泳+

5、+電滲流；電滲流；兩種速度的矢量和兩種速度的矢量和。 正離子正離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動方向一致，在負(fù)極最先流出；：兩種效應(yīng)的運(yùn)動方向一致，在負(fù)極最先流出； 中性粒子無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出；中性粒子無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出； 陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動方向相反。陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動方向相反。1.1.儀器簡單、易自動化儀器簡單、易自動化 電源、毛細(xì)管、檢測器、溶液瓶電源、毛細(xì)管、檢測器、溶液瓶2.2.分析速度快、分離效率高分析速度快、分離效率高 在在3.13.1minmin內(nèi)分離內(nèi)分離3636種無機(jī)及有機(jī)陰離子，種無機(jī)及有機(jī)陰離子，4 4.1min.1min內(nèi)分內(nèi)分離了

6、離了2424種陽離子；分離柱效：種陽離子；分離柱效：105105107/m107/m理論塔板數(shù)；理論塔板數(shù)；3.3.操作方便、消耗少操作方便、消耗少 進(jìn)樣量極少，水介質(zhì)中進(jìn)行進(jìn)樣量極少，水介質(zhì)中進(jìn)行；4.4.應(yīng)用范圍極廣應(yīng)用范圍極廣 有機(jī)物、無機(jī)物、生物、中性分子；生物大分子等；有機(jī)物、無機(jī)物、生物、中性分子；生物大分子等； 分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)、環(huán)境保護(hù)、材料等；分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)、環(huán)境保護(hù)、材料等； 電泳是指帶電離子在電場中的定向移動，不同離子具有電泳是指帶電離子在電場中的定向移動，不同離子具有不同的遷移速度，不同的遷移速度，遷移速度與哪些因素有關(guān)？遷移速度與哪些因素有關(guān)

7、？ 當(dāng)帶電離子以速度當(dāng)帶電離子以速度 在電場中移動時，受到大小相等、在電場中移動時，受到大小相等、方向相反的電場推動力和平動摩擦阻力的作用。方向相反的電場推動力和平動摩擦阻力的作用。電場力：電場力：FE = qE 阻阻 力：力：F = f故：故： qE = fq離子所帶的有效電荷；離子所帶的有效電荷；E 電場強(qiáng)度；電場強(qiáng)度；離子在電場中的遷移速度；離子在電場中的遷移速度；f 平動摩擦系數(shù)平動摩擦系數(shù) ( 對于球形離子：對于球形離子： f =6； 離子的表觀液態(tài)動力學(xué)半徑；離子的表觀液態(tài)動力學(xué)半徑； 介質(zhì)的粘度；介質(zhì)的粘度； )所以，遷移速度：所以，遷移速度：EqfqE 6 （球形離子） 物質(zhì)離

8、子在電場中物質(zhì)離子在電場中差速遷移差速遷移是電泳分離的基礎(chǔ)。是電泳分離的基礎(chǔ)。淌度淌度 ：單位電場強(qiáng)度下的平均電泳速度。：單位電場強(qiáng)度下的平均電泳速度。 m m6qE 當(dāng)固體與液體接觸時，固體表面由于某種原因帶一種電當(dāng)固體與液體接觸時，固體表面由于某種原因帶一種電荷，則因靜電引力使其周圍液體帶有相反電荷，在液荷，則因靜電引力使其周圍液體帶有相反電荷，在液- -固界固界面形成雙電層，二者之間存在電位差。面形成雙電層，二者之間存在電位差。 當(dāng)液體兩端施加電壓時，就當(dāng)液體兩端施加電壓時，就會發(fā)生液體相對于固體表面的移會發(fā)生液體相對于固體表面的移動，這種液體相對于固體表面的動，這種液體相對于固體表面的

9、移動的現(xiàn)象叫移動的現(xiàn)象叫電滲現(xiàn)象電滲現(xiàn)象。 電滲現(xiàn)象中整體移動著的液電滲現(xiàn)象中整體移動著的液體叫體叫電滲流電滲流（electroosmotic flow ，簡稱簡稱EOF）。）。 在高電場的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰在高電場的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰極移動，由于這些陽離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中極移動，由于這些陽離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動，速度的溶液整體向負(fù)極移動，速度電滲流電滲流。 電滲流的大小用電滲流速度電滲流的大小用電滲流速度電滲流電滲流表示，取決于電滲淌表示，取決于電滲淌度度和電場強(qiáng)度和電場強(qiáng)度E E。即。即 電滲流電滲流 =

10、 = E E電滲淌度取決于電泳介質(zhì)及雙電層的電滲淌度取決于電泳介質(zhì)及雙電層的ZetaZeta電勢，即電勢，即 = = 0 00真空介電常數(shù)；介電常數(shù)；毛細(xì)管壁的Zeta電勢。 電滲流電滲流 = = 0 0 E E實(shí)際電泳分析，可在實(shí)驗(yàn)測定相應(yīng)參數(shù)后，按下式計算實(shí)際電泳分析，可在實(shí)驗(yàn)測定相應(yīng)參數(shù)后，按下式計算 電滲流電滲流 = = L Lefef/t/teoeoLef 毛細(xì)管有效長度； teo電滲流標(biāo)記物（中性物質(zhì)）的遷移時間。 電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)：電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)： 內(nèi)表面帶負(fù)電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向陰極；內(nèi)表面帶負(fù)電荷，溶液帶正電荷，電滲流

11、流向陰極； 內(nèi)表面帶正電荷，溶液帶負(fù)電荷，電滲流流向陽極；內(nèi)表面帶正電荷，溶液帶負(fù)電荷，電滲流流向陽極； 石英毛細(xì)管；帶負(fù)電荷，電滲流流向陰極；石英毛細(xì)管；帶負(fù)電荷，電滲流流向陰極；改變電滲流方向的方法：改變電滲流方向的方法： （1 1）毛細(xì)管改性）毛細(xì)管改性 表面鍵合陽離子基團(tuán)；表面鍵合陽離子基團(tuán)； （2 2）加電滲流反轉(zhuǎn)劑）加電滲流反轉(zhuǎn)劑 內(nèi)充液中加入大量的陽離子表面活性劑，將使石英毛細(xì)內(nèi)充液中加入大量的陽離子表面活性劑，將使石英毛細(xì)管壁帶正電荷，溶液表面帶負(fù)電荷。電滲流流向陽極。管壁帶正電荷，溶液表面帶負(fù)電荷。電滲流流向陽極。 電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的電滲流的速度約等于一般離

12、子電泳速度的5 57 7倍；倍； 各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為： + + = =電滲流電滲流 + + +ef +ef 陽離子運(yùn)動方向與電滲流一致；陽離子運(yùn)動方向與電滲流一致； - - = =電滲流電滲流 - - -ef -ef 陰離子運(yùn)動方向與電滲流相反；陰離子運(yùn)動方向與電滲流相反； 0 0 = =電滲流電滲流 中性粒子運(yùn)動方向與電滲流一致；中性粒子運(yùn)動方向與電滲流一致；（1 1）可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子的分離；）可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子的分離；（2 2）改變電滲流的大小和方向可改變分離效率和選擇性，如）改變電滲流的大小和方向可

13、改變分離效率和選擇性，如同改變同改變LCLC中的流速；中的流速；（3 3）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性；）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性； 在在HPCEHPCE中，控制電滲流非常重要中，控制電滲流非常重要。1.1.電場強(qiáng)度的影響電場強(qiáng)度的影響 電滲流速度和電場強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速度和電場強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓。電滲流速度正比于工作電壓。2.2.毛細(xì)管材料的影響毛細(xì)管材料的影響 不同材料毛細(xì)管的表面電不同材料毛細(xì)管的表面電荷特性不同，產(chǎn)生的電滲流大荷特性不同，產(chǎn)生的電滲流大小不同；小不同；（1 1）溶液）溶液pHpH的影響的影響 對于石

14、英毛細(xì)管，溶液對于石英毛細(xì)管，溶液pHpH增高時，表面電離多，電荷密增高時，表面電離多，電荷密度增加，管壁度增加，管壁zetazeta電勢增大，電滲流增大電勢增大，電滲流增大，pH=7pH=7，達(dá)到最大，達(dá)到最大； pH3pH電泳電泳時時, ,陰離子在陰離子在負(fù)極最后流出負(fù)極最后流出, ,在這種情況下在這種情況下, ,不但不但可以按類分離可以按類分離, ,同種類離子由于同種類離子由于差差速遷移速遷移被相互分離。被相互分離。 最基本、應(yīng)用廣的分離模式；最基本、應(yīng)用廣的分離模式；毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離中的有關(guān)因素：毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離中的有關(guān)因素：工作電壓：分離柱效隨電壓的增工作電壓：分離柱效隨電壓的增

15、大而提高。大而提高。 緩沖液：磷酸、醋酸、硼酸。緩沖液：磷酸、醋酸、硼酸。 注意注意pH和濃度的控制。和濃度的控制。pH選擇三原則：選擇三原則：1、緩沖液的、緩沖液的pH必須比被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)必須比被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)高或低高或低1個個pH單位，以便得到合適的電泳單位，以便得到合適的電泳淌度。淌度。2、在條件許可的情況下盡可能采用酸性緩、在條件許可的情況下盡可能采用酸性緩沖液，使得毛細(xì)管壁上的吸附和電滲流降沖液，使得毛細(xì)管壁上的吸附和電滲流降低，提高毛細(xì)管涂層的壽命。低，提高毛細(xì)管涂層的壽命。3、在分離蛋白質(zhì)中，蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)低于、在分離蛋白質(zhì)中，蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)低于緩沖液緩沖液pH時，極性放置

16、是：時，極性放置是：+ -，反之應(yīng)，反之應(yīng)是：是：- +。緩沖液的濃度選擇：緩沖液的濃度選擇：在一般情況下，濃度增加被分離在一般情況下，濃度增加被分離物質(zhì)的遷移速度下降，有利于分物質(zhì)的遷移速度下降，有利于分離效果的提高，但隨著緩沖液濃離效果的提高，但隨著緩沖液濃度的增大，粘度增加，電滲流和度的增大，粘度增加，電滲流和焦耳熱增大，給分離造成反作用焦耳熱增大，給分離造成反作用緩沖液中不同添加劑的選擇：緩沖液中不同添加劑的選擇：添加劑添加劑 功功 能能 無機(jī)鹽無機(jī)鹽 改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 增加溶解度，減少電滲流增加溶解度，減少電滲流 尿素尿素 增加蛋白質(zhì)溶解度，增加蛋白質(zhì)溶

17、解度， 使低聚核苷酸變性使低聚核苷酸變性 磺酸磺酸 離子對作用，疏水作用離子對作用，疏水作用 陰離子表面活性劑陰離子表面活性劑 改變毛細(xì)管壁的特性改變毛細(xì)管壁的特性 纖維素衍生物纖維素衍生物 減少電滲流，提供一個減少電滲流，提供一個 篩濾介質(zhì)篩濾介質(zhì) 胺類胺類 覆蓋硅烷基團(tuán)覆蓋硅烷基團(tuán) 將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。 蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNADNA

18、等的電荷等的電荷/ /質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，CZECZE模式很模式很難分離，采用難分離，采用CGECGE能獲得良好分離，能獲得良好分離，DANDAN排序的重要手段。排序的重要手段。 毛細(xì)管凝膠電泳綜合了電泳技術(shù)和平板凝膠電泳毛細(xì)管凝膠電泳綜合了電泳技術(shù)和平板凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn) : :1.1.電泳峰尖銳，柱效極高電泳峰尖銳，柱效極高2.2.短柱上實(shí)現(xiàn)極好的分離短柱上實(shí)現(xiàn)極好的分離3.3.試樣容量為試樣容量為10101212g g主要缺點(diǎn)主要缺點(diǎn):制備柱較困難，壽命較短制備柱較困難，壽命較短 已成為分離分析生物大分子如蛋白質(zhì)、多肽、已成為分離分析生物大分子如蛋白質(zhì)、多肽、核

19、核 酸、酸、DNADNA等強(qiáng)有力的工具。例應(yīng)用等強(qiáng)有力的工具。例應(yīng)用CGECGE分離分離與激光誘導(dǎo)熒光檢測相結(jié)合，用于與激光誘導(dǎo)熒光檢測相結(jié)合，用于DNADNA序列快速序列快速分析。分析。凝膠分為無機(jī)凝膠和有機(jī)凝膠或分為凝膠分為無機(jī)凝膠和有機(jī)凝膠或分為物理和化學(xué)凝膠。無機(jī)凝膠有多孔硅物理和化學(xué)凝膠。無機(jī)凝膠有多孔硅膠、多孔玻璃，有機(jī)凝膠有葡聚糖、膠、多孔玻璃，有機(jī)凝膠有葡聚糖、交聯(lián)聚丙酰胺和環(huán)脂糖等。交聯(lián)聚丙酰胺和環(huán)脂糖等。1.1.緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電

20、的膠束。2.2.在電泳緩沖溶液中加入在電泳緩沖溶液中加入表面活性劑，當(dāng)溶液中表表面活性劑，當(dāng)溶液中表面活性劑濃度超過臨界膠面活性劑濃度超過臨界膠束濃度時，表面活性劑中束濃度時，表面活性劑中的疏水基團(tuán)可形成膠束，的疏水基團(tuán)可形成膠束，溶質(zhì)因淌度和分配系數(shù)的溶質(zhì)因淌度和分配系數(shù)的不同而分離。不同而分離。 以膠束為假固定相的一種電動電泳以膠束為假固定相的一種電動電泳 3. 3. 電泳流和電滲流的方向相反，且電泳流和電滲流的方向相反，且電滲流電滲流 電泳電泳 ，負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動；負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動； 6.6.色譜與電泳分離模式色譜與電泳分離模式的結(jié)合。的結(jié)合。 4.4.中性分

21、子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長；的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長； 5.5.可用來分離中性物質(zhì)，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用可用來分離中性物質(zhì)，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍范圍；表面活性劑表面活性劑通常是十二烷基磺酸鈉（通常是十二烷基磺酸鈉（SDS）SDS膠束的結(jié)構(gòu)示意里面有一個疏水內(nèi)核，外面布滿了S03離子。在在MECC的系統(tǒng)中存在兩個相：的系統(tǒng)中存在兩個相：流動的水相和起到固定相作用的流動的水相和起到固定相作用的膠束相，被分離物在這兩個相之膠束相，被分離物在這兩個相之間分配，由于它們在膠束中具有間分

22、配，由于它們在膠束中具有保留能力而產(chǎn)生不同的保留時間。保留能力而產(chǎn)生不同的保留時間。 MECC的優(yōu)點(diǎn)：的優(yōu)點(diǎn)：1、極高的分離效率。、極高的分離效率。5萬萬50萬萬 理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)/m。2、分離速度快。一般、分離速度快。一般20分鐘左右。分鐘左右。3、可分離中性化合物。、可分離中性化合物?；驹恚夯趦尚噪娊橘|(zhì)基本原理：基于兩性電介質(zhì)在分離介質(zhì)中的遷移造成的在分離介質(zhì)中的遷移造成的pH梯度，使物質(zhì)根據(jù)它們梯度，使物質(zhì)根據(jù)它們不不同的等電點(diǎn)同的等電點(diǎn)達(dá)到分離的目的。達(dá)到分離的目的。具有一定等電點(diǎn)的物質(zhì)順著具有一定等電點(diǎn)的物質(zhì)順著這一梯度遷移到相當(dāng)于其等這一梯度遷移到相當(dāng)于其等電點(diǎn)的那個位置

23、，并在此停電點(diǎn)的那個位置，并在此停下，產(chǎn)生非常窄的聚焦帶，下，產(chǎn)生非常窄的聚焦帶，并使不同等電點(diǎn)的蛋白聚焦并使不同等電點(diǎn)的蛋白聚焦在不同位置上。在不同位置上。優(yōu)點(diǎn)：極高的分辨率，可以分離等電點(diǎn)差異優(yōu)點(diǎn)：極高的分辨率，可以分離等電點(diǎn)差異0.01pH單位的單位的兩種蛋白質(zhì)。兩種蛋白質(zhì)。 1. 1. 根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)；根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)； 2. 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點(diǎn)范圍毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（6 6

24、8 8V V）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升高的pHpH梯度；梯度； 3. 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pHpH有關(guān)，在有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。在其等電點(diǎn)時，呈電中酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。在其等電點(diǎn)時，呈電中性，淌度為零；性，淌度為零； 4. 4. 聚焦：具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場力的作用下聚焦：具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn)遷移，分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn)pHpH的位置時，呈電中性，停止的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相

25、互分離；移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離； 5. 5. 陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀NaOHNaOH溶液；溶液； 6. 6. 加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測；加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測； 7. 7. 電滲流在電滲流在CIEFCIEF中不利，應(yīng)消除或減小。中不利，應(yīng)消除或減小。毛細(xì)管等電聚焦的運(yùn)行過程可分毛細(xì)管等電聚焦的運(yùn)行過程可分為三個步驟：為三個步驟：1、進(jìn)樣。把樣品與兩性電解質(zhì)混合、進(jìn)樣。把樣品與兩性電解質(zhì)混合并進(jìn)樣。并進(jìn)樣。2、聚焦。加高電壓、聚焦。加高電壓3-4分鐘。分鐘。3、遷移。陰極的緩沖液換成鹽類、遷移。陰極的緩沖液換成

26、鹽類 后，再加上電壓，使末端引起梯度降后，再加上電壓，使末端引起梯度降低，讓級分一個一個通過檢測器。低，讓級分一個一個通過檢測器。 1. 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子( (充滿充滿毛細(xì)管毛細(xì)管) )和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動。并以同一速度移動。 2. 2. 負(fù)離子分析時，前導(dǎo)電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負(fù)負(fù)離子分析時，前導(dǎo)電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負(fù)離子的。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn)，逐離子的。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn)，逐漸形成

27、各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。陰極進(jìn)樣，陽極檢測。漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。陰極進(jìn)樣，陽極檢測。常用于分離離子型物質(zhì)。常用于分離離子型物質(zhì)。 3. 3. 不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同( (= =EE) )，淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度??；，淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度??； 沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序1 1、2 2、3 3、4 4 電場強(qiáng)度依次增大。假設(shè)電場強(qiáng)度依次增大。假設(shè)“2”2”號中離子擴(kuò)散到號中離子擴(kuò)散到“3”3”號，該號，該區(qū)電場強(qiáng)度大，離子被加速，返回到區(qū)電場強(qiáng)度大，離子被加速，返回到“2”2”區(qū)；當(dāng)

28、區(qū)；當(dāng)“2”2”號中號中離子跑到離子跑到“1”1”號區(qū)，離子被減速使之歸隊(duì)；號區(qū)，離子被減速使之歸隊(duì)； 4. 4. 特點(diǎn)：界面明顯，富集、濃縮作用；特點(diǎn)：界面明顯，富集、濃縮作用；假定有區(qū)帶假定有區(qū)帶 L， A， B， C， T， 則各區(qū)帶的移動速度為：則各區(qū)帶的移動速度為： v T = v A = v B = v C = v L 或：或：m m T E T = m m A E A = m mB E B = m m C E C = m m L E L 式中，式中，m m，有效淌度，有效淌度， E，電場強(qiáng)度，電場強(qiáng)度由于由于 m m T m m A m m B m m C m m L ，所以有所

29、以有: E T E A E B E C E L 各區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同。前導(dǎo)電解質(zhì)區(qū)帶的電場強(qiáng)度最小。各區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同。前導(dǎo)電解質(zhì)區(qū)帶的電場強(qiáng)度最小。在毛細(xì)管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以電滲流在毛細(xì)管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以電滲流為流動相，試樣組分在兩相間的分配為分離機(jī)理的電動色譜為流動相，試樣組分在兩相間的分配為分離機(jī)理的電動色譜過程；過程；是將是將HPLC中眾多的固定相微粒填充到毛細(xì)管中，以樣品與中眾多的固定相微粒填充到毛細(xì)管中，以樣品與固定相之間的相互作用為分離機(jī)制，以電滲流為流動相驅(qū)動固定相之間的相互作用為分離機(jī)制，以電滲流為流動相驅(qū)動力的色譜過程，雖柱效有所

30、下降，但增加了選擇性。力的色譜過程，雖柱效有所下降，但增加了選擇性。有發(fā)展前景的方法。有發(fā)展前景的方法。親和毛細(xì)管電泳是指親和毛細(xì)管電泳是指在電泳過程中具有生在電泳過程中具有生物專一性親和力的兩物專一性親和力的兩種分子（受體和其配種分子（受體和其配體）間，發(fā)生了特異體）間，發(fā)生了特異性相互作用，形成了性相互作用，形成了受體受體配體復(fù)合物，配體復(fù)合物，從而與其它物質(zhì)分離，從而與其它物質(zhì)分離，該方法特別適用于生該方法特別適用于生物活性分子如蛋白質(zhì)、物活性分子如蛋白質(zhì)、抗生素、核酸等的分抗生素、核酸等的分析以及藥物中的手性析以及藥物中的手性選擇。選擇。指介質(zhì)中以有機(jī)溶劑占主要部分，即表現(xiàn)為非水體系的

31、性質(zhì)。指介質(zhì)中以有機(jī)溶劑占主要部分，即表現(xiàn)為非水體系的性質(zhì)。能承受更高的操作電壓產(chǎn)生的高電場，有更高的分享效率，能承受更高的操作電壓產(chǎn)生的高電場，有更高的分享效率，也可在不增大焦耳熱的條件下提高溶液中的離子濃度或增大也可在不增大焦耳熱的條件下提高溶液中的離子濃度或增大毛細(xì)管的內(nèi)徑，從而增大進(jìn)樣量。毛細(xì)管的內(nèi)徑，從而增大進(jìn)樣量。優(yōu)點(diǎn)：使用超大內(nèi)徑毛細(xì)管柱、快速分析、降低吸附、提高優(yōu)點(diǎn)：使用超大內(nèi)徑毛細(xì)管柱、快速分析、降低吸附、提高分離選擇性、有利于難溶于水及在水中不穩(wěn)定的化合物的分分離選擇性、有利于難溶于水及在水中不穩(wěn)定的化合物的分離、對中性物質(zhì)的分離、對手性物質(zhì)的分離離、對中性物質(zhì)的分離、對手

32、性物質(zhì)的分離 CECE有很多不同的分離模式，但所用儀器構(gòu)造卻可以一樣，有很多不同的分離模式，但所用儀器構(gòu)造卻可以一樣，這是其它分離技術(shù)難以企及的。這是其它分離技術(shù)難以企及的。主要構(gòu)造：電泳電源、毛細(xì)管柱、流體驅(qū)動單元、位移控主要構(gòu)造：電泳電源、毛細(xì)管柱、流體驅(qū)動單元、位移控制單元、檢測單元，溫度控制單元、數(shù)據(jù)管理單元、自動控制單元、檢測單元，溫度控制單元、數(shù)據(jù)管理單元、自動控制單元。制單元。（1 1）0 03030 kV kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流高壓電源的直流高壓電源；輸出；輸出電流電流0 0 250250 m mA A（2 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出；）具有恒壓、恒流、恒

33、功率輸出；（3 3）電場強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)；三種輸出模式：梯度電）電場強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)；三種輸出模式：梯度電壓、梯度電流、梯度功率壓、梯度電流、梯度功率（4 4）電壓穩(wěn)定性：）電壓穩(wěn)定性：1%1%；（5 5）電源極性易轉(zhuǎn)換）電源極性易轉(zhuǎn)換； 毛細(xì)管是毛細(xì)管是CE分離的心分離的心臟。理想的毛細(xì)管必須是電臟。理想的毛細(xì)管必須是電絕緣、紫外絕緣、紫外/可見光透明且富可見光透明且富有彈性的，目前可以使用的有彈性的，目前可以使用的有玻璃、熔融石英或聚四氟有玻璃、熔融石英或聚四氟乙烯塑料等。毛細(xì)管內(nèi)徑一乙烯塑料等。毛細(xì)管內(nèi)徑一般為般為10100m，其截面，其截面結(jié)構(gòu)圖標(biāo)意圖如圖結(jié)構(gòu)圖標(biāo)意圖如圖17.23所示

34、。所示。 2. 2. 毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱 （1 1）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差；）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差； （2 2）規(guī)格：內(nèi)徑）規(guī)格：內(nèi)徑20207575m m，外徑，外徑350350400400m m；長度；長度=1m=1m關(guān)鍵功能：進(jìn)樣、毛細(xì)管清洗、淋洗劑流速控制關(guān)鍵功能：進(jìn)樣、毛細(xì)管清洗、淋洗劑流速控制驅(qū)動力：正壓、負(fù)壓（獲真空）、電場（包括電滲）、驅(qū)動力：正壓、負(fù)壓（獲真空）、電場（包括電滲）、濃差擴(kuò)散濃差擴(kuò)散正壓：鋼瓶壓縮氣、空壓機(jī)、色譜泵等產(chǎn)生，空管進(jìn)樣正壓：鋼瓶壓縮氣、空壓機(jī)、色譜泵等產(chǎn)生，空管進(jìn)樣：3-7kPa3-7kPa；清洗：；清

35、洗：5bar5bar（=0.5MPa=0.5MPa）；配二元梯度泵，可）；配二元梯度泵，可實(shí)現(xiàn)梯度淋洗實(shí)現(xiàn)梯度淋洗負(fù)壓：小型真空泵，用于：脫氣空管負(fù)壓：小型真空泵，用于：脫氣空管CECE清洗和進(jìn)樣清洗和進(jìn)樣電場：進(jìn)樣和毛細(xì)管平衡，可和電泳電源共用電場：進(jìn)樣和毛細(xì)管平衡，可和電泳電源共用濃差擴(kuò)散：濃度梯度（天然動力）濃差擴(kuò)散：濃度梯度（天然動力）關(guān)鍵功能：毛細(xì)管升降、電極槽換位、流出組分轉(zhuǎn)移關(guān)鍵功能：毛細(xì)管升降、電極槽換位、流出組分轉(zhuǎn)移方式：轉(zhuǎn)動、直線平移、升降方式：轉(zhuǎn)動、直線平移、升降模式：手動和自動模式：手動和自動 化學(xué)惰性，機(jī)械穩(wěn)定性好；化學(xué)惰性，機(jī)械穩(wěn)定性好；CECE分離和效率受溫度影響

36、很大分離和效率受溫度影響很大理想控溫方法：冷卻、加溫和恒溫理想控溫方法：冷卻、加溫和恒溫控溫范圍：控溫范圍：0-70 0-70 C C（至少（至少15-5015-50 C C）控溫方式：氣冷（空氣強(qiáng)制對流）和液冷（注入液體）控溫方式：氣冷（空氣強(qiáng)制對流）和液冷（注入液體），液冷控溫效果比較好，但是裝置復(fù)雜，液冷介質(zhì)一般為，液冷控溫效果比較好，但是裝置復(fù)雜，液冷介質(zhì)一般為氟代烷烴、氟代烷烴、7、檢測單元、檢測單元檢測方檢測方式式質(zhì)量檢測限質(zhì)量檢測限(mol)濃度檢測限濃度檢測限(M)*優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)缺點(diǎn)紫外紫外-可見可見光吸收光吸收10-1310-1610-510-8接近通用型接近通用型DAD可給出光

37、譜信息可給出光譜信息熒光熒光10-1510-1710-710-9靈敏度高靈敏度高樣品常需衍生化樣品常需衍生化激光誘導(dǎo)熒激光誘導(dǎo)熒光光10-1810-2010-1410-16極端靈敏極端靈敏樣品常需衍生化樣品常需衍生化安培安培10-1810-1910-1010-11選擇性好選擇性好用專門裝置測電活性組分用專門裝置測電活性組分電導(dǎo)電導(dǎo)10-1510-1610-710-8通用型通用型用專門裝置和毛細(xì)管處理用專門裝置和毛細(xì)管處理質(zhì)譜質(zhì)譜10-1610-1710-810-9靈敏，可給出結(jié)構(gòu)信息靈敏，可給出結(jié)構(gòu)信息接口復(fù)雜接口復(fù)雜其它：化學(xué)發(fā)光、激光拉曼、紅外、激光折射指數(shù)、激光熱透鏡其它：化學(xué)發(fā)光、激光

38、拉曼、紅外、激光折射指數(shù)、激光熱透鏡1) 紫外檢測器紫外檢測器(UV) 在合適位置除去涂層，將透明部分對準(zhǔn)光路。在合適位置除去涂層，將透明部分對準(zhǔn)光路。 UV檢測器集中在提高靈敏度，可采用毛細(xì)管彎檢測器集中在提高靈敏度，可采用毛細(xì)管彎折、吹泡技術(shù)擴(kuò)大光路?；虿捎闷矫娣e分檢測池，折、吹泡技術(shù)擴(kuò)大光路?；虿捎闷矫娣e分檢測池，這種設(shè)計可使檢測光路增加到這種設(shè)計可使檢測光路增加到1cm。也有用光散射二。也有用光散射二極管極管(LEDS)作光源，其線性范圍和信噪比優(yōu)于汞燈作光源，其線性范圍和信噪比優(yōu)于汞燈?？傮w來說進(jìn)展不大?？傮w來說進(jìn)展不大。2) 激光誘導(dǎo)熒光檢測激光誘導(dǎo)熒光檢測LIF LIF是是CE最

39、靈敏的檢測器之一，極大地拓展了最靈敏的檢測器之一，極大地拓展了CE的應(yīng)用，的應(yīng)用，DNA測序就須用測序就須用LIF，單細(xì)胞和單分子，單細(xì)胞和單分子檢測也離不開檢測也離不開LIF。利用。利用CE-LIF技術(shù)可檢出染色技術(shù)可檢出染色的單個的單個DNA分子，有望用于癌癥的早期診斷及臨分子，有望用于癌癥的早期診斷及臨床酶和免疫學(xué)檢測等。床酶和免疫學(xué)檢測等。CELIF和微透析結(jié)合可和微透析結(jié)合可測定腦中神經(jīng)肽。采用波長分辨熒光檢測器可提測定腦中神經(jīng)肽。采用波長分辨熒光檢測器可提供有關(guān)蛋白和供有關(guān)蛋白和DNA序列的一些結(jié)構(gòu)和動態(tài)信息。序列的一些結(jié)構(gòu)和動態(tài)信息。一些適用于二極管激光器的熒光標(biāo)記試劑如一些適用

40、于二極管激光器的熒光標(biāo)記試劑如CY5等，正在不斷開發(fā)和應(yīng)用。等，正在不斷開發(fā)和應(yīng)用。 CE/LIF向三個方向發(fā)展：在原有氦向三個方向發(fā)展：在原有氦鎘激鎘激光器光器(325nm)和氬離子激光器和氬離子激光器(488nm)之外，之外，發(fā)展價廉、長波長的二極管激光器發(fā)展價廉、長波長的二極管激光器；發(fā)展更發(fā)展更多的熒光標(biāo)記試劑來擴(kuò)展應(yīng)用面多的熒光標(biāo)記試劑來擴(kuò)展應(yīng)用面；開展更多開展更多的應(yīng)用研究的應(yīng)用研究。 LIF不但提高了靈敏度，也可增加選擇不但提高了靈敏度，也可增加選擇性，缺點(diǎn)在于被測物須用熒光試劑標(biāo)記成染性，缺點(diǎn)在于被測物須用熒光試劑標(biāo)記成染色。色。3). CE/MS聯(lián)用聯(lián)用 CE/MS聯(lián)用聯(lián)用,

41、彌補(bǔ)了彌補(bǔ)了CE定性鑒定的不足，故發(fā)定性鑒定的不足，故發(fā)展特別快。展特別快。 CE/MS聯(lián)用主要在兩方面發(fā)展：聯(lián)用主要在兩方面發(fā)展：一是各一是各種種CE模式和模式和MS聯(lián)用聯(lián)用，二是二是CE和各種和各種MS聯(lián)用聯(lián)用。關(guān)鍵。關(guān)鍵是解決接口裝置。最早報道是解決接口裝置。最早報道CE/MS聯(lián)用是采用單級聯(lián)用是采用單級四極桿質(zhì)譜，現(xiàn)已發(fā)展到三級四極質(zhì)譜、離子阱質(zhì)四極桿質(zhì)譜，現(xiàn)已發(fā)展到三級四極質(zhì)譜、離子阱質(zhì)譜等。譜等。CE/MS聯(lián)用特別適合于復(fù)雜生物體系的分離聯(lián)用特別適合于復(fù)雜生物體系的分離鑒定。因所需樣品少，目前大部分工作集中在基因鑒定。因所需樣品少，目前大部分工作集中在基因工程產(chǎn)品和蛋白樣品，工程產(chǎn)

42、品和蛋白樣品，CE/MS聯(lián)用現(xiàn)在已成為聯(lián)用現(xiàn)在已成為CE研研究中的熱點(diǎn)。究中的熱點(diǎn)。4) 電化學(xué)檢測器（電化學(xué)檢測器（EC） EC可避免光學(xué)類檢測器遇到的光程太短的問可避免光學(xué)類檢測器遇到的光程太短的問題，故和題，故和LIF同為同為CE中靈敏度最高的檢測器。報道中靈敏度最高的檢測器。報道最多的是最多的是電化學(xué)伏安檢測器電化學(xué)伏安檢測器，常用碳纖維微電極進(jìn)，常用碳纖維微電極進(jìn)行單細(xì)胞極微量神經(jīng)遞質(zhì)行單細(xì)胞極微量神經(jīng)遞質(zhì)(如多巴胺等如多巴胺等)的測定?？捎玫臏y定?？捎妹}沖伏安法測定糖、糖肽及金屬離子，也可用循環(huán)脈沖伏安法測定糖、糖肽及金屬離子，也可用循環(huán)伏安法，另一類常用的伏安法，另一類常用的EC

43、為為電導(dǎo)檢測器電導(dǎo)檢測器，Li的檢測的檢測限達(dá)限達(dá)10-7mol/L(10-15mol)。5) 化學(xué)發(fā)光檢測器化學(xué)發(fā)光檢測器(CL) CL具有結(jié)構(gòu)簡單、靈敏度高的特點(diǎn)，近年具有結(jié)構(gòu)簡單、靈敏度高的特點(diǎn)，近年來引起重視。用來引起重視。用CECL檢測血紅蛋白，檢測血紅蛋白，其檢測限比其檢測限比CEUV低約低約4個數(shù)量級。應(yīng)用個數(shù)量級。應(yīng)用最多的仍是最多的仍是魯米那魯米那(luminol)體系體系，因?yàn)樵摚驗(yàn)樵擉w系對多數(shù)待測物如一些金屬離子、氨基體系對多數(shù)待測物如一些金屬離子、氨基酸及其衍生物的檢測靈敏度很高，且反應(yīng)酸及其衍生物的檢測靈敏度很高，且反應(yīng)在水相進(jìn)行。電致化學(xué)發(fā)光在水相進(jìn)行。電致化學(xué)發(fā)

44、光(ECL)也已成也已成功地用作功地用作CE檢測。檢測。 6) 其它檢測器其它檢測器 采用激光作激勵源的除采用激光作激勵源的除LIF外，還有激光熱透外，還有激光熱透鏡檢測、激光光熱檢測和激光拉曼檢測等。普通熒鏡檢測、激光光熱檢測和激光拉曼檢測等。普通熒光檢測器研究集中在開發(fā)新的熒光染料，以提高靈光檢測器研究集中在開發(fā)新的熒光染料，以提高靈敏度。同位素檢測器具有高選擇性和高靈敏度敏度。同位素檢測器具有高選擇性和高靈敏度可可達(dá)達(dá)10-9加加mol/L，但測定時需經(jīng)同位素標(biāo)記步驟，但測定時需經(jīng)同位素標(biāo)記步驟，故應(yīng)用受到限制。故應(yīng)用受到限制。 進(jìn)樣量：毛細(xì)管長度的1%-2%；納升級、非常??；1. 1.

45、 流體力學(xué)進(jìn)樣方式流體力學(xué)進(jìn)樣方式 （1 1）進(jìn)樣端加壓）進(jìn)樣端加壓 （2 2）出口端抽真空）出口端抽真空 （3 3）虹吸進(jìn)樣）虹吸進(jìn)樣tLPd 1284 進(jìn)樣體積進(jìn)樣體積 毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓；毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓；tLctrVefeo2)m mm m （進(jìn)樣量進(jìn)樣量 進(jìn)樣不均進(jìn)樣不均：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度大的進(jìn)樣：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度大的進(jìn)樣量大；量大； 離子丟失離子丟失：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去；去； 特別適合黏度大的試樣特別適合黏度大的試樣；3. 3. 擴(kuò)散進(jìn)樣擴(kuò)散進(jìn)樣 試樣通過擴(kuò)散作用進(jìn)入分離

46、柱端口處。試樣通過擴(kuò)散作用進(jìn)入分離柱端口處。陽離子分析陽離子分析 遷移方向和電滲流遷移方向和電滲流方向一致；方向一致； 4.5min4.5min內(nèi)分離了內(nèi)分離了2424種金屬離子；種金屬離子； 陽極進(jìn)樣，陰極檢測；陽極進(jìn)樣，陰極檢測； 具有很高的靈敏度；具有很高的靈敏度； 陰離子電泳方向和電滲流陰離子電泳方向和電滲流方向相反、速度接近，分析時方向相反、速度接近，分析時間長、效率低；間長、效率低； 質(zhì)量小、電荷密度大的離質(zhì)量小、電荷密度大的離子如：子如：SOSO4 4-2-2、ClCl- -、F F- -等，電等，電泳速率大于電滲流，陽極端流泳速率大于電滲流，陽極端流出，在陰極端無法檢測；出，在

47、陰極端無法檢測； 加入電滲流改性劑，十六加入電滲流改性劑，十六烷基三甲基溴化胺等，使電泳烷基三甲基溴化胺等，使電泳方向和電滲流方向一致，可在方向和電滲流方向一致，可在3.1min3.1min內(nèi)分離內(nèi)分離3636種陰離子；種陰離子；陰極進(jìn)樣，陽極檢測；陰極進(jìn)樣，陽極檢測；離子價態(tài)及存在形態(tài)分析；離子價態(tài)及存在形態(tài)分析； 檢測體液或細(xì)胞中檢測體液或細(xì)胞中某些代謝產(chǎn)物的分析；某些代謝產(chǎn)物的分析； 尿液中的氨基酸含尿液中的氨基酸含量作為臨床診斷糖尿病量作為臨床診斷糖尿病的輔助手段；的輔助手段； 采用毛細(xì)管區(qū)帶電采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳方式，在泳方式，在11min11min內(nèi)分離內(nèi)分離1717種藥物；種藥物；

48、采用采用MEKCMEKC模式，模式，鑒定違禁藥物；鑒定違禁藥物；效果優(yōu)于效果優(yōu)于HPLGHPLG法法 合成獲得單一手性化合物相當(dāng)困難；合成獲得單一手性化合物相當(dāng)困難；528528種手性合成藥物，種手性合成藥物，6161中以單一對映體形式銷售，其他為外消旋體；檢測分析也中以單一對映體形式銷售，其他為外消旋體；檢測分析也相當(dāng)困難；研究熱點(diǎn)；相當(dāng)困難；研究熱點(diǎn)；R-R-反應(yīng)停是安眠藥，反應(yīng)停是安眠藥，S-S-式致胎兒畸形；式致胎兒畸形； HPCEHPCE分離分析手性化合物的方法：加入手性選擇劑；分離分析手性化合物的方法：加入手性選擇劑；形成配合物的穩(wěn)定常數(shù)有差異，結(jié)合形成配合物的穩(wěn)定常數(shù)有差異，結(jié)合HPCEHPCE的高效率；的高效率； 常用手性選擇劑：環(huán)糊精及其衍生物；手性冠醚；手性常用手性選擇劑：環(huán)糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性劑（氨基酸衍生物、膽酸鈉、?；敲撗跄懰峒捌溻c表面活性劑（氨基酸衍生物、膽酸鈉、?；敲撗跄懰峒捌溻c鹽、低聚糖等天然手性表面活性劑）鹽、低聚糖等天然手性表面活性劑）采用采用MEKCMEKC模式，在模式，在2525分鐘內(nèi)分離了分鐘內(nèi)分離了2323種丹酰化氨基酸；種丹?；被?；HPCEHPCE可取代傳統(tǒng)的氨基酸分析儀；可取代傳統(tǒng)的氨基酸分析儀；問題：吸附和檢測；問題：吸附和檢測；重要分析手段；圖，酶解的雙螺旋DNA限制性片段的分