滅菌工藝及設(shè)備驗(yàn)證電子版本

1、滅 菌工藝(gngy)及滅菌設(shè)備驗(yàn)證黑龍江省(hi ln jin shn)所姜連閣 2013年1月第一頁，共101頁。n一般指沒有活體微生物存在的藥品。在藥品制劑類別中，無菌藥品也可稱為(chn wi)無菌制劑n無菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料n-藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）附錄1.無菌藥品 無菌藥品(yopn)基 本 概 念第二頁，共101頁。106 100（1） 10-6（10-3）n無菌保證(bozhng)水平（Sterility Assurance Level）-SAL基 本 概 念p采用濕熱滅菌法的采用濕熱滅菌法的SAL不得大于不得大于10-6，即滅菌

2、后微生，即滅菌后微生物存活的概率不得大于百萬分之一物存活的概率不得大于百萬分之一p采用無菌生產(chǎn)采用無菌生產(chǎn)(shngchn)的的SAL不得大于不得大于10-3p無菌生產(chǎn)無菌生產(chǎn)(shngchn)工藝僅限于臨床必需注射給藥工藝僅限于臨床必需注射給藥而確實(shí)無法耐受終端滅菌的產(chǎn)品而確實(shí)無法耐受終端滅菌的產(chǎn)品,適用于粉針劑或部適用于粉針劑或部分小容量注射劑分小容量注射劑pSAL定義定義-產(chǎn)品經(jīng)滅菌產(chǎn)品經(jīng)滅菌/除菌后微生物殘存的概除菌后微生物殘存的概率率(gil)。p評(píng)價(jià)滅菌（無菌）工藝的效果，該值越小，表評(píng)價(jià)滅菌（無菌）工藝的效果，該值越小，表明產(chǎn)品中微生物存在的概率明產(chǎn)品中微生物存在的概率(gil)

3、越小。越小。第三頁，共101頁。n無菌制劑主要(zhyo)有：n注射劑n植入劑、沖洗劑、眼內(nèi)注射溶液、眼內(nèi)插入劑n供手術(shù)、傷口、角膜穿通傷用的眼用制劑，n用于手術(shù)、創(chuàng)傷、燒傷或潰癢等的軟膏劑、乳膏劑、氣霧劑、噴霧劑n局部用散劑、耳用制劑、鼻用制劑、凝膠劑基 本 概 念第四頁，共101頁。n注射劑n藥途徑(tjng)n特 點(diǎn) 基 本 概 念p直接進(jìn)入(jnr)組織或血液p吸收快p作用迅速可靠p注射液p注射用無菌粉末(fnm)p注射用濃溶液p肌肉注射p靜脈注射p注射劑與其他劑型相比 p無菌制劑,p質(zhì)量要求高p生產(chǎn)過程控制嚴(yán)格p注射劑p-將藥物制成無菌溶液、混懸液或臨用前制成液體的無菌粉末供注入人體

4、的制劑.p 是臨床上使用廣泛的制劑。第五頁，共101頁。n無菌n無熱原n無不(w b)溶性微粒n高純度 無菌藥品(yopn)特點(diǎn)基 本 概 念第六頁，共101頁。微生物微粒(wil)藥物降解（氧化、水解）基 本 概 念過濾、消毒(xio d)、滅菌工藝控制（PH、溫度(wnd)、時(shí)間、空氣）第七頁，共101頁。注射劑生產(chǎn)注射劑生產(chǎn)(shngchn)的基本要求的基本要求p 合理的廠房、設(shè)備、措施設(shè)計(jì)合理的廠房、設(shè)備、措施設(shè)計(jì)p 合格的人員合格的人員p 合理的生產(chǎn)方法、步驟和控制方法合理的生產(chǎn)方法、步驟和控制方法p 工藝驗(yàn)證和方法工藝驗(yàn)證和方法p 滅菌工藝驗(yàn)證滅菌工藝驗(yàn)證 生產(chǎn)場(chǎng)所生產(chǎn)場(chǎng)所 設(shè)施設(shè)

5、施(shsh) 設(shè)備設(shè)備 重要的支持系統(tǒng)重要的支持系統(tǒng) 原材料原材料 包裝材料包裝材料 產(chǎn)品設(shè)計(jì)產(chǎn)品設(shè)計(jì) 分析化驗(yàn)規(guī)程分析化驗(yàn)規(guī)程 儀器校準(zhǔn)儀器校準(zhǔn) 操作人員操作人員 驗(yàn)證過的工藝驗(yàn)證過的工藝 p硬 件p軟 件p人 員第八頁，共101頁。真核微生物真核微生物原核原核(yun h)微生物微生物病毒病毒(bngd)有細(xì)胞有細(xì)胞(xbo)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)微生物微生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)無細(xì)胞結(jié)構(gòu)n微生物-是指一類體積微小、結(jié)構(gòu)簡單，大多是單細(xì) 胞的，必須用光學(xué)顯微鏡觀察形態(tài)的微小生物的通稱。第九頁，共101頁。三型三型 八大類八大類 特點(diǎn)特點(diǎn) 無細(xì)胞結(jié)構(gòu) 病毒（亞病毒和朊粒） 無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)最簡單，體積最微小，能通

6、過細(xì)菌濾器；由單一核酸（DNA或RNA）和蛋白質(zhì)外殼組成；必須寄生在活的易感細(xì)胞內(nèi)生長繁 殖。 原核細(xì)胞細(xì)菌放線菌螺旋體支原體衣原體立克次體 僅有原始核，無核膜、無核仁，染色體僅為單個(gè)缺乏完整的細(xì)胞器。 真核細(xì)胞 真菌 細(xì)胞核分化程度較高，有典型的核結(jié)構(gòu)（有核膜、核仁、多個(gè)染色體，由DNA和組蛋白組成）；通過有絲分裂進(jìn)行繁殖；胞漿內(nèi)有多種完整的細(xì)胞器。 第十頁，共101頁。p個(gè)體小，作用大。個(gè)體小，作用大。p分布廣，種類多。分布廣，種類多。p生長繁殖快，代謝生長繁殖快，代謝(dixi)強(qiáng)。強(qiáng)。p易變異。易變異。微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物生物學(xué)特征微生物生物學(xué)特征20min第十一頁，共1

7、01頁。n植物葉子表面附生微生物-n 皮膚上含細(xì)菌-n洗過后幾小時(shí)之內(nèi)-n人的腸道內(nèi)微生物-n糞便中細(xì)菌-n一般人每個(gè)噴嚏(pnt)的飛沫-n感冒患者一個(gè)噴嚏(pnt)-微生物基礎(chǔ)知識(shí)簡介微生物基礎(chǔ)知識(shí)簡介(jin ji)約100萬個(gè)/克。約10萬個(gè)/cm2恢復(fù)到原來的數(shù)量約100萬億大約(dyu)占糞便干重的1/3含4500-150000個(gè)含8500萬個(gè)（有傳染性）微生物無處不在第十二頁，共101頁。常見(chn jin)微生物微生物基礎(chǔ)知識(shí)簡介(jin ji)種類種類基本特點(diǎn)基本特點(diǎn)生長條件細(xì)菌0.5 5 m，生長態(tài)時(shí)不耐熱，部分能形成耐熱芽孢.30-35 oC, 1-2天天真菌5 m 5

8、0 m，形成芽孢隨空氣擴(kuò)散，不耐熱,但難用消毒劑消毒但難用消毒劑消毒20-25oC, 3-5天天病毒小于0.1 m，一般不耐熱，0.22m過濾不了第十三頁，共101頁。微 生 物 分 布 特 點(diǎn)G+G-p氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多p可形成芽孢，難以殺滅可形成芽孢，難以殺滅p藥品生產(chǎn)需要藥品生產(chǎn)需要HVACp水源性則革蘭氏陽性菌居多p不會(huì)生成孢子，會(huì)形成細(xì)菌內(nèi)毒素p耐熱性差p微生物的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠體。p生物指示劑均為革蘭氏陽性菌，滅菌用BI為非致病菌。第十四頁，共101頁。細(xì)菌芽胞的形成(xngchng)及其特性成熟芽孢孢子壁母細(xì)胞孢子壁的形成生長

9、態(tài)細(xì)胞摘自摘自 /microbes/spores.asp內(nèi)生孢子內(nèi)生孢子產(chǎn)生產(chǎn)生(chnshng)于于 Gram+ 細(xì)細(xì)菌菌: 芽孢桿菌屬芽孢桿菌屬Bacillus 梭菌屬梭菌屬Clostridium 僅含核酸及少量萌發(fā)必需物，皮層含僅含核酸及少量萌發(fā)必需物，皮層含DPA和和Ca2+復(fù)合物，能抵御復(fù)合物，能抵御各種惡劣環(huán)境各種惡劣環(huán)境(hunjng)，可休眠上百萬年。真菌孢子因不具上述特，可休眠上百萬年。真菌孢子因不具上述特性，而不耐熱。（性，而不耐熱。（DPA：吡啶二羧酸）：吡啶二羧酸）第十五頁，共101頁。n常用的滅菌方法二種：物理滅菌法和化學(xué)滅菌

10、法常用的滅菌方法二種：物理滅菌法和化學(xué)滅菌法n物理滅菌技術(shù)是利用蛋白質(zhì)與核酸具有遇熱、射線物理滅菌技術(shù)是利用蛋白質(zhì)與核酸具有遇熱、射線(shxin)不穩(wěn)定的特性，采用加熱、射線不穩(wěn)定的特性，采用加熱、射線(shxin)和過和過濾方法，殺滅或除去微生物的技術(shù)稱為物理滅菌法，亦稱濾方法，殺滅或除去微生物的技術(shù)稱為物理滅菌法，亦稱物理滅菌技術(shù)。該技術(shù)包括干熱滅菌、濕熱滅菌、除菌過物理滅菌技術(shù)。該技術(shù)包括干熱滅菌、濕熱滅菌、除菌過濾法和輻射滅菌等。濾法和輻射滅菌等。n化學(xué)滅菌法系指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅化學(xué)滅菌法系指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法，可分為氣體滅菌劑和液體滅菌劑

11、，如環(huán)氧乙烷屬的方法，可分為氣體滅菌劑和液體滅菌劑，如環(huán)氧乙烷屬于氣體滅菌劑的一類。于氣體滅菌劑的一類。n一旦溫度超過上限，微生物細(xì)胞中主要的蛋白質(zhì)、酶及核一旦溫度超過上限，微生物細(xì)胞中主要的蛋白質(zhì)、酶及核酸便會(huì)被永久性破壞，細(xì)胞膜被融解，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生酸便會(huì)被永久性破壞，細(xì)胞膜被融解，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。不可逆轉(zhuǎn)的死亡。n熱力學(xué)滅菌是使用最普遍并且研究最為徹底的滅菌方式。熱力學(xué)滅菌是使用最普遍并且研究最為徹底的滅菌方式。 滅 菌 基 本 原 理第十六頁，共101頁。滅 菌 基 本 原 理n微生物的耐熱性可按下列順序排列微生物的耐熱性可按下列順序排列(耐熱性從高到低耐熱性從高到低

12、):n絕大多數(shù)細(xì)菌絕大多數(shù)細(xì)菌45不能生長不能生長(shngzhng)，80100可被迅速殺滅?？杀谎杆贇纭需氧菌中的芽胞桿菌屬需氧菌中的芽胞桿菌屬n 厭氧菌中的梭狀芽胞桿菌屬厭氧菌中的梭狀芽胞桿菌屬具有具有(jyu)較強(qiáng)的較強(qiáng)的耐熱性耐熱性第十七頁，共101頁。n物理物理/化學(xué)條件化學(xué)條件 n在較高溫度下生長在較高溫度下生長n有二價(jià)陽離子有二價(jià)陽離子n溫度和相對(duì)濕度溫度和相對(duì)濕度n在在90 125之間，相對(duì)濕度在之間，相對(duì)濕度在20% 50%時(shí)，時(shí)，細(xì)菌芽胞表現(xiàn)細(xì)菌芽胞表現(xiàn)(bioxin)出最大的耐熱性出最大的耐熱性n當(dāng)相對(duì)濕度超出這一范圍時(shí)，芽胞的耐熱性將會(huì)迅當(dāng)相對(duì)濕度超出這一范圍時(shí)，

13、芽胞的耐熱性將會(huì)迅速下降。速下降。n濕度對(duì)芽胞破壞性過程起促進(jìn)作用，所以濕熱滅菌濕度對(duì)芽胞破壞性過程起促進(jìn)作用，所以濕熱滅菌較干熱滅菌較低溫度。較干熱滅菌較低溫度。n 影響熱力(rl)滅菌的因素第十八頁，共101頁。n濕熱滅菌法系指物質(zhì)在滅菌器內(nèi)利用高壓蒸汽或其他熱力學(xué)滅菌手段濕熱滅菌法系指物質(zhì)在滅菌器內(nèi)利用高壓蒸汽或其他熱力學(xué)滅菌手段殺滅細(xì)菌。（一定壓力下的蒸氣進(jìn)行滅菌，也采用過熱水噴淋或浸殺滅細(xì)菌。（一定壓力下的蒸氣進(jìn)行滅菌，也采用過熱水噴淋或浸沒）。沒）。n濕熱滅菌法系導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵性蛋白質(zhì)和酶發(fā)生熱變性或凝固。濕熱滅菌法系導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵性蛋白質(zhì)和酶發(fā)生熱變性或凝固。n具有穿透力強(qiáng)，

14、傳導(dǎo)快，滅菌能力甚強(qiáng)?！舅梢簯B(tài)變成氣態(tài)時(shí)，會(huì)具有穿透力強(qiáng)，傳導(dǎo)快，滅菌能力甚強(qiáng)。【水由液態(tài)變成氣態(tài)時(shí)，會(huì)吸收大量的熱能吸收大量的熱能(540cal/g)，氣態(tài)冷凝成液態(tài)時(shí)，會(huì)釋放相等的能量，氣態(tài)冷凝成液態(tài)時(shí)，會(huì)釋放相等的能量(即汽化熱即汽化熱)】。因此應(yīng)盡可能使用飽和蒸汽進(jìn)行滅菌。】。因此應(yīng)盡可能使用飽和蒸汽進(jìn)行滅菌。n濕熱滅菌是一種十分經(jīng)濟(jì)有效的方法。用于藥品、藥品的溶液、玻璃濕熱滅菌是一種十分經(jīng)濟(jì)有效的方法。用于藥品、藥品的溶液、玻璃器械、培養(yǎng)基、無菌衣、敷料以及其他遇高溫與濕熱不發(fā)生變化或損器械、培養(yǎng)基、無菌衣、敷料以及其他遇高溫與濕熱不發(fā)生變化或損壞的物質(zhì)，均可選用。壞的物質(zhì)，均可選

15、用。n常見濕熱滅菌器包括脈動(dòng)真空滅菌器（或稱預(yù)真空滅菌器）、蒸汽常見濕熱滅菌器包括脈動(dòng)真空滅菌器（或稱預(yù)真空滅菌器）、蒸汽-空氣空氣(kngq)混合物滅菌器和過熱濕熱滅菌水滅菌器等。混合物滅菌器和過熱濕熱滅菌水滅菌器等。濕 熱 滅 菌第十九頁，共101頁。n干熱滅菌是指在非飽和濕度下進(jìn)行干熱滅菌是指在非飽和濕度下進(jìn)行(jnxng)的熱力學(xué)滅菌。滅菌介質(zhì)通常的熱力學(xué)滅菌。滅菌介質(zhì)通常為被滅菌品所處濕度下的熱空氣干熱滅菌是使微生物氧化而不是蛋白質(zhì)為被滅菌品所處濕度下的熱空氣干熱滅菌是使微生物氧化而不是蛋白質(zhì)變性，這就是干熱滅菌之所以要求相對(duì)較高溫度的原因。變性，這就是干熱滅菌之所以要求相對(duì)較高溫度

16、的原因。n利用干熱滅菌工藝滅菌溫度高、時(shí)間長的這一特點(diǎn)如利用干熱滅菌工藝滅菌溫度高、時(shí)間長的這一特點(diǎn)如170-250，甚至更，甚至更高，可使干熱滅菌同時(shí)具備除熱原的功用。干熱是去熱原最為有效的方高，可使干熱滅菌同時(shí)具備除熱原的功用。干熱是去熱原最為有效的方法之一。干熱去熱原工藝進(jìn)行法之一。干熱去熱原工藝進(jìn)行(jnxng)驗(yàn)證，應(yīng)證明該工藝能使標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒驗(yàn)證，應(yīng)證明該工藝能使標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素至少下降素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。個(gè)對(duì)數(shù)單位。 n在制藥工業(yè)中，干熱滅菌被廣泛用于不耐受高壓蒸氣的熱穩(wěn)定性物品的在制藥工業(yè)中，干熱滅菌被廣泛用于不耐受高壓蒸氣的熱穩(wěn)定性物品的滅菌。如玻璃、金屬設(shè)備、器具，不需濕氣穿透的

17、油脂類（甘油、油類、滅菌。如玻璃、金屬設(shè)備、器具，不需濕氣穿透的油脂類（甘油、油類、凡士林、石蠟），耐高溫的粉末化學(xué)藥品（滑石粉、磺胺類藥物）等，凡士林、石蠟），耐高溫的粉末化學(xué)藥品（滑石粉、磺胺類藥物）等，但不適用于橡膠、塑料及大部分藥品。但不適用于橡膠、塑料及大部分藥品。n革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的脂多糖革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的脂多糖-內(nèi)毒素。低劑量內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致人體發(fā)內(nèi)毒素。低劑量內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致人體發(fā)熱反應(yīng)，故而也稱之為熱原。熱反應(yīng)，故而也稱之為熱原。 干 熱 滅 菌第二十頁，共101頁。p 使用范圍可分為試驗(yàn)室器具用，生產(chǎn)制劑用，生產(chǎn)器具用干熱滅菌設(shè)備。p 按使用方式分為連續(xù)式和批量式，p 批量

18、式干熱滅菌設(shè)備如干熱烘箱(hngxing)，可用于內(nèi)毒素檢驗(yàn)用玻璃、金屬器具的滅菌和除熱原，以及生產(chǎn)設(shè)備部件、生產(chǎn)器具的滅菌除熱原；p 連續(xù)干熱滅菌設(shè)備，如隧道烘箱(hngxing)，可用于小容量注射劑的生產(chǎn)。p 按加熱方式可分為：以輻射加熱為主的熱輻射式干熱滅菌機(jī)和以對(duì)流加熱為主的熱層流加熱式干熱滅菌機(jī)等。 干 熱 滅 菌第二十一頁，共101頁。p在特定溫度下，任一時(shí)間在特定溫度下，任一時(shí)間(shjin)點(diǎn)的芽胞死亡特性僅與這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的芽胞死亡特性僅與這個(gè)時(shí)間(shjin)點(diǎn)的芽胞濃度相關(guān)。點(diǎn)的芽胞濃度相關(guān)。微生物的熱致死微生物的熱致死(zh s)特性特性Y軸及軸及X軸均為普通座標(biāo)（示意）軸

19、均為普通座標(biāo)（示意）t N102030101001000半對(duì)數(shù)半對(duì)數(shù)(du sh)座座標(biāo)標(biāo)Y軸：微生物取對(duì)數(shù)軸：微生物取對(duì)數(shù)X軸：時(shí)間為軸：時(shí)間為10進(jìn)制普通座標(biāo)進(jìn)制普通座標(biāo)tlgN102030123第二十二頁，共101頁。n無菌的影響因素可用下式表示無菌的影響因素可用下式表示: PNSU=N0-DR nPNSU指非無菌品概率指非無菌品概率nN0指滅菌前產(chǎn)品的污染水平指滅菌前產(chǎn)品的污染水平nDR指滅菌時(shí)的殺滅水平。指滅菌時(shí)的殺滅水平。n 最終最終(zu zhn)產(chǎn)品的無菌質(zhì)量取決于兩個(gè)因產(chǎn)品的無菌質(zhì)量取決于兩個(gè)因素素n滅菌前的含菌量控制滅菌前的含菌量控制n滅菌工藝的殺滅效果。滅菌工藝的殺滅效果

20、。第二十三頁，共101頁。n微生物的熱致死微生物的熱致死(zh s)特性：受熱死亡速度符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方特性：受熱死亡速度符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程程ndN/dtK(N0Nt)n N0為為t0時(shí)，存活的微生物數(shù)；時(shí)，存活的微生物數(shù)；n Nt為為t時(shí)被殺滅的微生物數(shù)；時(shí)被殺滅的微生物數(shù)；n N為為t時(shí)存活的微生物數(shù)時(shí)存活的微生物數(shù)n K為常數(shù)。為常數(shù)。n將上式積分得到：將上式積分得到：nlgNt lgN0(K2.303)t第二十四頁，共101頁。專 業(yè) 名 詞D值在一定溫度下將微生物數(shù)量殺滅90%或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間z值滅菌溫度系數(shù) 即指使微生物D值改變(增加或減少)一個(gè)對(duì)數(shù)單位時(shí)，溫度應(yīng)變化(

21、降低或升高)的度數(shù)。是耐熱曲線或熱致死時(shí)間曲線斜率的負(fù)倒數(shù)FTT滅菌時(shí)間 指滅菌程序賦予被滅菌品在T下的等效滅菌時(shí)間F0標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間 將121作為標(biāo)準(zhǔn)滅菌溫度，當(dāng)z設(shè)定為10時(shí)，滅菌程序賦予被滅菌品121下的等效滅菌時(shí)間第二十五頁，共101頁。n它是分析滅菌工藝效果它是分析滅菌工藝效果(xiogu)的重要生物學(xué)參數(shù)。的重要生物學(xué)參數(shù)。并且其數(shù)值可通過殘存曲線并且其數(shù)值可通過殘存曲線法或陰性分?jǐn)?shù)法加以確定。法或陰性分?jǐn)?shù)法加以確定。nlgN0lgNtlg（N0Nt）nt(K2.303)lgl01,n所以所以D= t=2.303K.n即：即：D是直線斜率的負(fù)倒數(shù)是直線斜率的負(fù)倒數(shù)nD 值越大，該溫度

22、下微生物值越大，該溫度下微生物的耐熱性就越強(qiáng)，在滅菌中的耐熱性就越強(qiáng)，在滅菌中就越難殺滅。就越難殺滅。lgNlgNt t1 12 23 34 4t t1 1t t2 2D D第二十六頁，共101頁。n對(duì)某一種微生物而言，對(duì)某一種微生物而言，在其他條件保持不變?cè)谄渌麠l件保持不變的情況下，的情況下，D 值隨滅值隨滅菌菌(mi jn)溫度的變溫度的變化而變化?；兓滅菌滅菌(mi jn)溫度升溫度升高時(shí)，直線方程的斜高時(shí)，直線方程的斜率變大，即使微生物率變大，即使微生物殺滅殺滅90所需的時(shí)間所需的時(shí)間就短就短n滅菌滅菌(mi jn)溫度低溫度低時(shí)，達(dá)到同一滅菌時(shí)，達(dá)到同一滅菌(mi jn)效果

23、的時(shí)間效果的時(shí)間就長就長115121125lgNtlgN=1D125D121D115第二十七頁，共101頁。微生物名稱微生物名稱溫度溫度介介 質(zhì)質(zhì)D值值min嗜熱嗜熱脂肪脂肪桿菌桿菌105葡萄糖葡萄糖87.811032.011511.71212.4微生物名稱微生物名稱溫度溫度介介 質(zhì)質(zhì)D值值min梭狀芽梭狀芽孢桿菌孢桿菌105葡萄糖葡萄糖1.3注射用水注射用水2.1微生物名稱微生物名稱溫度溫度介介 質(zhì)質(zhì)D值值min嗜熱嗜熱脂肪脂肪桿菌桿菌121葡萄糖乳酸林格液葡萄糖乳酸林格液2.1葡萄糖葡萄糖2.4注射用水注射用水3.0微生物名稱微生物名稱溫度溫度介介 質(zhì)質(zhì)D值值min梭狀芽孢桿菌梭狀芽孢桿菌

24、105葡萄糖葡萄糖1.3嗜熱脂肪桿菌嗜熱脂肪桿菌注射用水注射用水2.1第二十八頁，共101頁。n在濕熱在濕熱(sh r)滅菌條件下，實(shí)滅菌條件下，實(shí)驗(yàn)測(cè)得細(xì)菌芽胞的驗(yàn)測(cè)得細(xì)菌芽胞的z值在值在8-12之間之間n濕熱濕熱(sh r)滅菌計(jì)算時(shí)滅菌計(jì)算時(shí)z通常取通常取10；干熱滅菌計(jì)算時(shí)；干熱滅菌計(jì)算時(shí)Z通常取通常取20，去熱原時(shí)，去熱原時(shí)Z通常取通常取54 。n Z=直線斜率的負(fù)倒數(shù)直線斜率的負(fù)倒數(shù),n 其中其中:D1指溫度為指溫度為T1時(shí)的時(shí)的D值，值，n D2指溫度為指溫度為T2時(shí)的時(shí)的D值。值。tT（）D1D2121117TD Z=-T/D =(Tl-T2)/log10 (D2/D1)，第二

25、十九頁，共101頁。nF0D l21LgNnFTDTLgNn達(dá)到同樣達(dá)到同樣(tngyng)滅菌效果時(shí)，滅菌效果時(shí)，LgN 等值等值lgNtLgNoLgNt121117LgNFTFo指在某一溫度指在某一溫度T()下滅菌下滅菌1min 所獲得的標(biāo)準(zhǔn)所獲得的標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)滅滅菌時(shí)間菌時(shí)間所以所以(suy) F0FTD121DTpL= D121/Di =10 (Ti-121)/ZpTi指各個(gè)滅菌時(shí)段的溫度指各個(gè)滅菌時(shí)段的溫度p標(biāo)準(zhǔn)參照溫度（標(biāo)準(zhǔn)參照溫度（121）pZ10。第三十頁，共101頁。n100滅菌時(shí)滅菌時(shí)1分鐘，相當(dāng)分鐘，相當(dāng)于于121 滅菌滅菌0.008分鐘，分鐘，即即Fo值為值為0

26、.008分鐘。分鐘。n105滅菌滅菌40分鐘時(shí)，分鐘時(shí)，F(xiàn)o約約為為 1分鐘，能使分鐘，能使D值為值為1分鐘分鐘的芽孢數(shù)量下降的芽孢數(shù)量下降1個(gè)對(duì)數(shù)個(gè)對(duì)數(shù)(du sh)單位單位n116下滅菌下滅菌lmin 對(duì)芽孢殺對(duì)芽孢殺滅效果只有標(biāo)準(zhǔn)滅菌狀態(tài)下滅效果只有標(biāo)準(zhǔn)滅菌狀態(tài)下的的32n121下滅菌下滅菌lmin 相當(dāng)于相當(dāng)于116下滅菌下滅菌3.16min滅菌溫度滅菌溫度 滅菌率滅菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59第三十一頁，共101頁。n可用滅菌率計(jì)算可用滅菌率計(jì)算FT值

27、值=F0L=8/0.316=25.3nF0=10 (Ti-T121)/Z dt=10 (116-121)/10 *25.3=8n根據(jù)梯形規(guī)則，將整個(gè)滅菌過程根據(jù)梯形規(guī)則，將整個(gè)滅菌過程(包括升溫、保溫和冷卻階段包括升溫、保溫和冷卻階段)的滅菌率累加，從而估算出某滅菌程序在標(biāo)準(zhǔn)溫度下的等效滅的滅菌率累加，從而估算出某滅菌程序在標(biāo)準(zhǔn)溫度下的等效滅菌時(shí)間：菌時(shí)間：nF0=t（L1/2+L2+L3+Ln-1+Ln/2）, t指測(cè)量溫度的時(shí)間指測(cè)量溫度的時(shí)間間隔。每兩次測(cè)量溫度的時(shí)間間隔必須相同。在初始及結(jié)束時(shí)間隔。每兩次測(cè)量溫度的時(shí)間間隔必須相同。在初始及結(jié)束時(shí)間段的滅菌率非常間段的滅菌率非常(fic

28、hng)小小,可將公式簡化為可將公式簡化為:FT=tL。L1 L2 L3 LN-1 LN100第三十二頁，共101頁。n由由 FT(LgN0LgNT)DT， FTDT LgN0LgNT，則，則lgNTlgN0FTDT。根據(jù)滅菌設(shè)備內(nèi)溫。根據(jù)滅菌設(shè)備內(nèi)溫度監(jiān)控系統(tǒng)所測(cè)得的物理參數(shù)，估測(cè)某滅菌程序?qū)ξ⒍缺O(jiān)控系統(tǒng)所測(cè)得的物理參數(shù)，估測(cè)某滅菌程序?qū)ξ⑸锏臍缧Ч?。生物的殺滅效果。nDT表示某實(shí)際微生物（待滅菌物品中的污染表示某實(shí)際微生物（待滅菌物品中的污染(wrn)菌菌)或假設(shè)的微生物或假設(shè)的微生物(生物指示劑生物指示劑)在在T下的下的D值。值。n例如，假設(shè)例如，假設(shè)F0為為8分鐘，分鐘，DT=0.

29、5分鐘，數(shù)量為分鐘，數(shù)量為106，由，由公式可以得出在滅菌結(jié)束時(shí)，芽胞的殘存數(shù)量為公式可以得出在滅菌結(jié)束時(shí)，芽胞的殘存數(shù)量為10-10，SAL=lgNT =6-8/0.5=-10。n在整個(gè)滅菌過程中，芽胞數(shù)量的對(duì)數(shù)下降值在整個(gè)滅菌過程中，芽胞數(shù)量的對(duì)數(shù)下降值: SLR=LgN0-LgNT= FTDT =6-(-10) =8/0.5=16。第三十三頁，共101頁。n生物指示劑，簡稱為生物指示劑，簡稱為BI，是對(duì)特定滅菌者，是對(duì)特定滅菌者 工藝工藝(gngy)具有一定耐受性并且能夠定量測(cè)定滅具有一定耐受性并且能夠定量測(cè)定滅 菌效力的微生物制劑，菌效力的微生物制劑，n生物指示劑多為芽胞類細(xì)菌，具有更

30、強(qiáng)的耐受性。生物指示劑多為芽胞類細(xì)菌，具有更強(qiáng)的耐受性。n生物指示劑既可用來測(cè)定一個(gè)給定的滅菌工藝生物指示劑既可用來測(cè)定一個(gè)給定的滅菌工藝(gngy)條件的滅菌效果，也可判別它是否符合無條件的滅菌效果，也可判別它是否符合無菌保證要求。菌保證要求。n采用生物指示劑做對(duì)照試驗(yàn)，是評(píng)判一個(gè)滅菌程序采用生物指示劑做對(duì)照試驗(yàn)，是評(píng)判一個(gè)滅菌程序有效性的直接方法而且也是最佳方法。有效性的直接方法而且也是最佳方法。第三十四頁，共101頁。n常用于滅菌工藝驗(yàn)證的生物指示劑主要有三種常用于滅菌工藝驗(yàn)證的生物指示劑主要有三種(sn zhn)形式形式n芽胞條芽胞條n芽胞懸浮液芽胞懸浮液n自含型生物指示劑自含型生物指

31、示劑 第三十五頁，共101頁。n芽胞條芽胞條 n將芽胞接種于濾紙片、玻璃、塑料等薄片或條狀物，并用特將芽胞接種于濾紙片、玻璃、塑料等薄片或條狀物，并用特定的材料包起來以保持其完整性和生物活性。直接接種到產(chǎn)定的材料包起來以保持其完整性和生物活性。直接接種到產(chǎn)品中品中.n適用于驗(yàn)證適用于驗(yàn)證(ynzhng)和監(jiān)控非溶液類物品的滅菌工藝和監(jiān)控非溶液類物品的滅菌工藝.第三十六頁，共101頁。p芽胞懸浮液芽胞懸浮液 p芽胞懸浮液可被接種待滅菌產(chǎn)品溶液或模擬芽胞懸浮液可被接種待滅菌產(chǎn)品溶液或模擬(mn)產(chǎn)品溶液中。直接接種于產(chǎn)品內(nèi)或產(chǎn)品產(chǎn)品溶液中。直接接種于產(chǎn)品內(nèi)或產(chǎn)品外表面，這樣能更加直觀地考察產(chǎn)品的實(shí)

32、際滅外表面，這樣能更加直觀地考察產(chǎn)品的實(shí)際滅菌效果。菌效果。p芽胞接種到液體產(chǎn)品時(shí)，其耐熱性會(huì)增強(qiáng)或降芽胞接種到液體產(chǎn)品時(shí)，其耐熱性會(huì)增強(qiáng)或降低。如果不宜被直接接種于產(chǎn)品或耐熱芽胞與低。如果不宜被直接接種于產(chǎn)品或耐熱芽胞與產(chǎn)品不相適應(yīng)，則可用模擬產(chǎn)品不相適應(yīng)，則可用模擬(mn)產(chǎn)品（生理產(chǎn)品（生理鹽水或其他溶液）替代。鹽水或其他溶液）替代。p但必須保證所用的替代品與產(chǎn)品具有相似的物但必須保證所用的替代品與產(chǎn)品具有相似的物理和化學(xué)性質(zhì)理和化學(xué)性質(zhì)(如粘度和如粘度和pH)，并且耐熱芽胞在，并且耐熱芽胞在替代品中的替代品中的D值（耐熱性）不得小于在產(chǎn)品中值（耐熱性）不得小于在產(chǎn)品中的的D值。否則將影

33、響到滅菌工藝驗(yàn)證或日常監(jiān)值。否則將影響到滅菌工藝驗(yàn)證或日常監(jiān)控的可靠性?？氐目煽啃?。第三十七頁，共101頁。n 自含型生物指示劑自含型生物指示劑 n是將芽胞條是將芽胞條(或片或片)加入到含有指示劑的培養(yǎng)基包裝內(nèi)加入到含有指示劑的培養(yǎng)基包裝內(nèi)(如小瓶內(nèi)如小瓶內(nèi))，培養(yǎng)基單獨(dú)包裝并與芽胞載體分離培養(yǎng)基單獨(dú)包裝并與芽胞載體分離(fnl)，經(jīng)滅菌處理后，擠碎，經(jīng)滅菌處理后，擠碎培養(yǎng)基小瓶使芽胞條培養(yǎng)基小瓶使芽胞條(或片浸沒在培養(yǎng)基內(nèi)，在適當(dāng)溫度和時(shí)或片浸沒在培養(yǎng)基內(nèi)，在適當(dāng)溫度和時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)，通過觀察培養(yǎng)基內(nèi)的酸堿指示劑的顏色變化判斷其間內(nèi)培養(yǎng)，通過觀察培養(yǎng)基內(nèi)的酸堿指示劑的顏色變化判斷其生長狀況生長狀

34、況;或?qū)⒀堪苯咏臃N在含有指示劑的培養(yǎng)基內(nèi)?；?qū)⒀堪苯咏臃N在含有指示劑的培養(yǎng)基內(nèi)。n自含型生物指示劑的耐熱性與其載體、包裝的材質(zhì)、結(jié)構(gòu)有很自含型生物指示劑的耐熱性與其載體、包裝的材質(zhì)、結(jié)構(gòu)有很大的相關(guān)性；生物指示劑的包裝要易于殺菌劑透過。大的相關(guān)性；生物指示劑的包裝要易于殺菌劑透過。n測(cè)定測(cè)定D值時(shí)務(wù)必要考慮包裝可能會(huì)引起殺菌效來的滯后，不能僅值時(shí)務(wù)必要考慮包裝可能會(huì)引起殺菌效來的滯后，不能僅測(cè)定芽胞條測(cè)定芽胞條(或片或片)的的D值。值。第三十八頁，共101頁。n滅菌滅菌(mi jn)溶液時(shí)，多選用自含型安瓶瓶生物指示劑溶液時(shí)，多選用自含型安瓶瓶生物指示劑n滅菌滅菌(mi jn)織物時(shí)，多選

35、用芽胞條織物時(shí)，多選用芽胞條n滅菌滅菌(mi jn)管路時(shí)，選用特殊生物指劑管路時(shí)，選用特殊生物指劑(如用接有芽胞如用接有芽胞的鋼絲、線等的鋼絲、線等)以測(cè)試死角處以測(cè)試死角處(最冷點(diǎn)最冷點(diǎn))的滅菌的滅菌(mi jn)狀況狀況第三十九頁，共101頁。滅菌方式滅菌方式 微生物（孢子）微生物（孢子） D值范圍（分）值范圍（分） 濕濕 熱熱121嗜熱脂肪芽孢桿菌嗜熱脂肪芽孢桿菌 Bacillus stearothermophilus 1.5-3.0 枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis 0.3-0.7凝結(jié)芽孢桿菌凝結(jié)芽孢桿菌 Bacillus coagulans 0.4-0.

36、8梭狀芽孢桿菌梭狀芽孢桿菌 Clostridium sporogenes 0.4-0.8干熱干熱 150 枯草芽孢桿菌黑色變種枯草芽孢桿菌黑色變種 Bacillus subtilis var. niger 1.0 第四十頁，共101頁。注射劑注射劑無菌生產(chǎn)無菌生產(chǎn)過濾過濾(gul)除菌除菌無菌分裝無菌分裝（凍干）粉針劑（凍干）粉針劑溶液狀態(tài)下穩(wěn)定等注射液注射液否否是是最終滅菌最終滅菌無菌生產(chǎn)無菌生產(chǎn)否否是是熱壓滅菌熱壓滅菌(mi (mi jn)jn)殘存概率法殘存概率法不能耐受過度殺菌法不能耐受過度殺菌法過度殺菌法過度殺菌法注射劑滅菌工藝注射劑滅菌工藝(gngy) (gngy) 的選擇的選擇第

37、四十一頁，共101頁。EMEA 滅菌(mi jn)工藝決策樹風(fēng)險(xiǎn)增加一般是濕熱滅菌方式 F08 ，首選過度(gud)殺滅法F012 ，如不能耐受過度(gud)殺滅，選用殘存概率法8F012 。第四十二頁，共101頁。最終滅菌非最終滅菌生產(chǎn)工藝是在控制微生物污染量的基礎(chǔ)上，在完成內(nèi)包裝工藝生產(chǎn)過程最終采取一個(gè)可靠的滅菌措施。是在無菌系統(tǒng)環(huán)境下，通過除菌過濾法或無菌操作法，在完成內(nèi)包裝工藝生產(chǎn)全過程始終未采取單獨(dú)的滅菌措施?；?本 概 念無菌性的過程或內(nèi)容不同第四十三頁，共101頁。無菌保證(bozhng)值與Fo、D值及帶菌量的關(guān)系lgN2345-2-3-41-5-6-1012345768910

38、12分分11過度殺滅示意過度殺滅示意生產(chǎn)中生產(chǎn)中Fo=8示意示意SALF0/D lgN0 假定(jidng)D121為1方法F0N0SAL過度殺滅法12 1066殘存概率法81026第四十四頁，共101頁。n確立滅菌終點(diǎn)確立滅菌終點(diǎn)-使微生物的殘存概率使微生物的殘存概率(gil)下降到下降到100，在此基礎(chǔ)上再下降，在此基礎(chǔ)上再下降6個(gè)對(duì)數(shù)單位個(gè)對(duì)數(shù)單位(即微生物的殘即微生物的殘存概率存概率(gil)不超過不超過1/百萬，或百萬，或PNSU10-6)n滅菌過程中所產(chǎn)生的各項(xiàng)物理和生物學(xué)參數(shù)應(yīng)能保證滅菌過程中所產(chǎn)生的各項(xiàng)物理和生物學(xué)參數(shù)應(yīng)能保證其滅菌效果達(dá)到其滅菌效果達(dá)到PNSU=10-6。生物

39、學(xué)因素生物學(xué)因素物理因素物理因素1.滅菌前微生物量: N02.滅菌前微生物的耐熱性: DT3.滅菌終點(diǎn)的殘存概率: NT (10-6)滅菌值:FT滅菌工藝(gngy)開發(fā)第四十五頁，共101頁。n FT =（lgN0-lgNT）DT如果N0和DT已知，為使滅菌終點(diǎn)達(dá)到10-6的要求，可計(jì)算出滅菌前的帶菌量。n 例如，滅菌前每個(gè)容器內(nèi)含有l(wèi)00個(gè)耐熱芽胞，n 其DT = 1分鐘，滅菌值F0要達(dá)到8分鐘，n 才能使產(chǎn)品中微生物降至100后，再下降6個(gè)對(duì)數(shù)單位:n F0=2-(-6)x1=8分鐘。nF0=8分鐘是滅菌工藝必須達(dá)到的最小目標(biāo)值。也可根據(jù)滅菌設(shè)備的性能和產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性確定(qudng)F

40、0的上限。滅菌工藝(gngy)開發(fā)第四十六頁，共101頁。n 過熱滅菌時(shí)，不用考慮滅菌前含菌量。這并不意味著就不用對(duì)滅過熱滅菌時(shí)，不用考慮滅菌前含菌量。這并不意味著就不用對(duì)滅菌前含菌量進(jìn)行控制。相反，控制滅菌前產(chǎn)品中的污染菌含量也是菌前含菌量進(jìn)行控制。相反，控制滅菌前產(chǎn)品中的污染菌含量也是非常重要的。非常重要的。n過熱滅菌工藝常用于熱穩(wěn)定性物品的滅菌，如包裝材料和生產(chǎn)設(shè)備過熱滅菌工藝常用于熱穩(wěn)定性物品的滅菌，如包裝材料和生產(chǎn)設(shè)備等。等。n驗(yàn)證時(shí)，先通過確定完全驗(yàn)證時(shí)，先通過確定完全(wnqun)殺滅含有殺滅含有106個(gè)嗜熱脂肪芽胞個(gè)嗜熱脂肪芽胞桿菌的生物指示劑（桿菌的生物指示劑（D121值為值

41、為1.5分鐘左右分鐘左右)所需的滅菌時(shí)間，再所需的滅菌時(shí)間，再將這個(gè)時(shí)間加倍即為實(shí)際生產(chǎn)時(shí)的過熱滅菌時(shí)間。將這個(gè)時(shí)間加倍即為實(shí)際生產(chǎn)時(shí)的過熱滅菌時(shí)間。 過熱過熱(u r)滅菌滅菌第四十七頁，共101頁。n建立在含菌量控制基礎(chǔ)上的滅菌工藝，其滅菌終點(diǎn)是由滅建立在含菌量控制基礎(chǔ)上的滅菌工藝，其滅菌終點(diǎn)是由滅菌前半成品的含菌量及所含微生物的耐熱性來決定的。菌前半成品的含菌量及所含微生物的耐熱性來決定的。n生產(chǎn)時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)品被耐熱性微生物污染，而不能依賴于最生產(chǎn)時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)品被耐熱性微生物污染，而不能依賴于最終滅菌。終滅菌。n有些產(chǎn)品在滅菌前進(jìn)行無菌生產(chǎn)和灌裝。有些產(chǎn)品在滅菌前進(jìn)行無菌生產(chǎn)和灌裝。n控制滅

42、菌前產(chǎn)品中的含菌量，可以降低滅菌條件，降低滅控制滅菌前產(chǎn)品中的含菌量，可以降低滅菌條件，降低滅菌時(shí)對(duì)產(chǎn)品及其容器菌時(shí)對(duì)產(chǎn)品及其容器/密封件的潛在破壞性。密封件的潛在破壞性。n對(duì)熱敏性產(chǎn)品對(duì)熱敏性產(chǎn)品(如蛋白質(zhì)如蛋白質(zhì))非常非常(fichng)重要重要?dú)埓?cncn)概率法第四十八頁，共101頁。n如果在滅菌前產(chǎn)品中沒有耐熱菌，如果在滅菌前產(chǎn)品中沒有耐熱菌，n可假設(shè)有一定數(shù)量的芽胞存在于其中可假設(shè)有一定數(shù)量的芽胞存在于其中(常規(guī)生產(chǎn)時(shí)可能常規(guī)生產(chǎn)時(shí)可能會(huì)碰到的最差狀況會(huì)碰到的最差狀況)。如設(shè)每只容器。如設(shè)每只容器(rngq)內(nèi)含有內(nèi)含有n D121=0. 5分鐘的耐熱芽胞分鐘的耐熱芽胞100個(gè)。

43、個(gè)。n根據(jù)與假設(shè)菌的數(shù)量及耐熱性相當(dāng)?shù)膶?shí)際生物指示劑根據(jù)與假設(shè)菌的數(shù)量及耐熱性相當(dāng)?shù)膶?shí)際生物指示劑(BI)來確定一個(gè)滅菌工藝的滅菌效果。來確定一個(gè)滅菌工藝的滅菌效果。n根據(jù)置于滅菌產(chǎn)品內(nèi)的測(cè)溫探頭的測(cè)量數(shù)據(jù)計(jì)算出理根據(jù)置于滅菌產(chǎn)品內(nèi)的測(cè)溫探頭的測(cè)量數(shù)據(jù)計(jì)算出理論論F0值，并對(duì)多次運(yùn)行的值，并對(duì)多次運(yùn)行的F0值進(jìn)行平均，將平均值進(jìn)行平均，將平均F0值值與從接有生物指示劑與從接有生物指示劑(已知胞子數(shù)量和已知胞子數(shù)量和D值值)的類似容器的類似容器(rngq)中得到的平均中得到的平均SLR(spore log reduction)值進(jìn)值進(jìn)行比較。行比較。殘存(cncn)概率法第四十九頁，共101頁。

44、n根據(jù)生物指示劑的致死效果根據(jù)生物指示劑的致死效果(xiogu)，估算出實(shí)，估算出實(shí)際污染菌的下降水平際污染菌的下降水平: SLR A=SLRB DB/DA nSLR A滅菌前產(chǎn)品中污染菌的對(duì)數(shù)下降值滅菌前產(chǎn)品中污染菌的對(duì)數(shù)下降值nSLR B生物指示劑的對(duì)數(shù)下降值生物指示劑的對(duì)數(shù)下降值nDA滅菌前微生物的滅菌前微生物的(已知或假定的已知或假定的)D值值n DB生物指示劑生物指示劑D值。值。如果如果(rgu)DA=0.5分鐘，分鐘，DB=2.0分鐘，分鐘，121 F0=8分鐘，分鐘，SLRB= 4，則則:SLR A=16, SLRA=4 (2.0/0.5)=16 lgNT =1gN0-SLR =

45、2-16=-14, SAL=14。殘存(cncn)概率法第五十頁，共101頁。n在滅菌在滅菌(mi jn)結(jié)束時(shí)仍有一部分生物指示劑未被殺滅，但這并結(jié)束時(shí)仍有一部分生物指示劑未被殺滅，但這并不意味著此滅菌不意味著此滅菌(mi jn)程序無效。通過它們，證實(shí)了測(cè)溫探頭程序無效。通過它們，證實(shí)了測(cè)溫探頭指示的指示的F0值（值（8分鐘分鐘)所賦予容器內(nèi)物品的實(shí)際滅菌所賦予容器內(nèi)物品的實(shí)際滅菌(mi jn)效果。效果。殘存(cncn)概率法第五十一頁，共101頁。只要對(duì)滅菌前的含菌量進(jìn)行控制、監(jiān)測(cè)并掌握其耐只要對(duì)滅菌前的含菌量進(jìn)行控制、監(jiān)測(cè)并掌握其耐熱性，一般是不會(huì)含有耐熱芽胞的熱性，一般是不會(huì)含有耐

46、熱芽胞的控制手段控制手段(shudun)對(duì)每批的灌封開始和結(jié)束階段，分別對(duì)灌裝好的半對(duì)每批的灌封開始和結(jié)束階段，分別對(duì)灌裝好的半成品取樣檢測(cè)。成品取樣檢測(cè)。樣品須作需氧菌總計(jì)數(shù)樣品須作需氧菌總計(jì)數(shù)將檢品液置于將檢品液置于100下加熱下加熱10分鐘，檢查是否有耐分鐘，檢查是否有耐熱芽孢存活熱芽孢存活須對(duì)微生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行趨勢(shì)分析以確保半成品須對(duì)微生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行趨勢(shì)分析以確保半成品的微生物處于穩(wěn)定的受控狀態(tài)的微生物處于穩(wěn)定的受控狀態(tài)殘存(cncn)概率法第五十二頁，共101頁。n一般情況下，暴熱后的樣品中是檢測(cè)不到微生物的，一旦發(fā)一般情況下，暴熱后的樣品中是檢測(cè)不到微生物的，一旦發(fā)現(xiàn)，則需對(duì)

47、其鑒別并測(cè)定其現(xiàn)，則需對(duì)其鑒別并測(cè)定其D值。值。n若分離菌的若分離菌的D值大于滅菌工藝驗(yàn)證所用生物指示劑的值大于滅菌工藝驗(yàn)證所用生物指示劑的D值，則值，則說明滅菌程序不充分，應(yīng)采取措施以消除產(chǎn)品中的耐熱說明滅菌程序不充分，應(yīng)采取措施以消除產(chǎn)品中的耐熱(nai r)菌。菌。n如果這些措施不可行，則應(yīng)采用具有更強(qiáng)耐熱如果這些措施不可行，則應(yīng)采用具有更強(qiáng)耐熱(nai r)性的生性的生物指示劑，或是從產(chǎn)品中分離出的耐熱物指示劑，或是從產(chǎn)品中分離出的耐熱(nai r)性微生物，對(duì)性微生物，對(duì)滅菌程序進(jìn)行再驗(yàn)證。滅菌程序進(jìn)行再驗(yàn)證。第五十三頁，共101頁。n生物學(xué)驗(yàn)證就是要用與產(chǎn)品滅菌工藝相適應(yīng)的最苛刻條

48、件生物學(xué)驗(yàn)證就是要用與產(chǎn)品滅菌工藝相適應(yīng)的最苛刻條件來挑戰(zhàn)該產(chǎn)品滅菌工藝的有效性、可靠性和穩(wěn)定性。來挑戰(zhàn)該產(chǎn)品滅菌工藝的有效性、可靠性和穩(wěn)定性。n過度殺滅法：一般選擇嗜熱脂肪芽孢桿菌過度殺滅法：一般選擇嗜熱脂肪芽孢桿菌(gnjn) 。n 殘存概率法：一般選擇梭狀芽孢桿菌殘存概率法：一般選擇梭狀芽孢桿菌(gnjn)第五十四頁，共101頁。n液體產(chǎn)品在液體產(chǎn)品在121滅菌滅菌15分鐘分鐘(藥典推薦的常用滅菌工藝藥典推薦的常用滅菌工藝)即即被認(rèn)為過熱滅菌工藝。被認(rèn)為過熱滅菌工藝。n對(duì)管路、膠塞、織物以及過濾器等熱穿透性較差的物品則需對(duì)管路、膠塞、織物以及過濾器等熱穿透性較差的物品則需要更長的滅菌時(shí)間

49、或更高的滅菌溫度要更長的滅菌時(shí)間或更高的滅菌溫度(wnd)，方能達(dá)到過，方能達(dá)到過熱滅菌要求（熱滅菌要求（ 121滅菌滅菌30分鐘）。分鐘）。n每個(gè)指示劑的芽胞含量通常在每個(gè)指示劑的芽胞含量通常在105-107之間之間n生物指示劑有效性生物指示劑有效性n當(dāng)當(dāng)F0值值 (DlgN0-2)時(shí)，生物指示劑均應(yīng)呈陽性結(jié)果時(shí)，生物指示劑均應(yīng)呈陽性結(jié)果n當(dāng)當(dāng)F0值值 (DlgN0+4)時(shí)，生物指示劑均應(yīng)呈陰性結(jié)果時(shí)，生物指示劑均應(yīng)呈陰性結(jié)果第五十五頁，共101頁。n要掌握滅菌前產(chǎn)品中污染菌狀況，要掌握滅菌前產(chǎn)品中污染菌狀況，n污染菌的數(shù)量及其耐熱性污染菌的數(shù)量及其耐熱性;n測(cè)定生物劑在待驗(yàn)證產(chǎn)品及驗(yàn)證用標(biāo)

50、準(zhǔn)溶液中的耐熱性測(cè)定生物劑在待驗(yàn)證產(chǎn)品及驗(yàn)證用標(biāo)準(zhǔn)溶液中的耐熱性(D值和值和Z值值);n根據(jù)產(chǎn)品的最低滅菌工藝條件、滅菌前產(chǎn)品中的污染菌根據(jù)產(chǎn)品的最低滅菌工藝條件、滅菌前產(chǎn)品中的污染菌控制要求及最終產(chǎn)品的無菌保證控制要求及最終產(chǎn)品的無菌保證(bozhng)要求，用要求，用相關(guān)公式計(jì)算出驗(yàn)證時(shí)每個(gè)生物指示劑所需要的胞子數(shù)相關(guān)公式計(jì)算出驗(yàn)證時(shí)每個(gè)生物指示劑所需要的胞子數(shù)量。量。第五十六頁，共101頁。F0（分鐘（分鐘）76543210-1-2-3-4-5-6孢子存活數(shù)量的對(duì)數(shù)值孢子存活數(shù)量的對(duì)數(shù)值t第五十七頁，共101頁。58原料藥/賦形劑量微生物檢查(jinch)微生物能否在原料或賦形劑中生長或

51、存活？原料/賦形劑合成/工藝相關(guān)步驟本身是否會(huì)減少微生物？所監(jiān)控的微生物量/指示菌量是否都低于規(guī)定限度？原料或賦形劑是否無菌？是否有科學(xué)證明減少步驟會(huì)造成原料/輔料中微生物量認(rèn)可限度（未檢出覺指示菌）？按照協(xié)調(diào)后藥典各論制訂微生物限度認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)提供支持?jǐn)?shù)據(jù)，不必作微生物限度檢查和制訂認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)不需進(jìn)一步作微生物限度檢查或制訂認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)提供支持?jǐn)?shù)據(jù)，不必作微生物限度檢查和制訂認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)逐批檢查微生物限度和指示菌抽批檢驗(yàn)微生物限度和指示菌按照協(xié)調(diào)后藥典各論制訂微生物限度認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)是是否否否否否否是是是是是是 否否是是否否n滅菌前含菌量限度以及污染菌的耐熱性限度均是以原材料的滅菌前含菌量限度以及污染菌的耐熱性

52、限度均是以原材料的微生物含量微生物含量(hnling)和常規(guī)監(jiān)控資料為基礎(chǔ)而建立的和常規(guī)監(jiān)控資料為基礎(chǔ)而建立的;n滅菌條件及滅菌條件及F0值控制是根據(jù)產(chǎn)品穩(wěn)定性研究資料而建立的值控制是根據(jù)產(chǎn)品穩(wěn)定性研究資料而建立的;n驗(yàn)證用芽胞在每種產(chǎn)品中的實(shí)際耐熱性資料由微生物實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證用芽胞在每種產(chǎn)品中的實(shí)際耐熱性資料由微生物實(shí)驗(yàn)室測(cè)得。測(cè)得。第五十八頁，共101頁。logN0 = F0/D121 +logNtNt = 2.303 log(n/q)n:每次挑戰(zhàn)試驗(yàn)用生物指示劑數(shù)量每次挑戰(zhàn)試驗(yàn)用生物指示劑數(shù)量q:挑戰(zhàn)試驗(yàn)后呈陰性的挑戰(zhàn)試驗(yàn)后呈陰性的BI數(shù)量數(shù)量如果全都如果全都(qundu)是陰性是陰性,則假

53、定則假定 q = n-1用于計(jì)算用于計(jì)算 Nt產(chǎn)品滅菌前含菌量控制限度CFU/瓶耐熱性DC DBI溫度時(shí)間F0控制范圍）驗(yàn)證用孢子在其中的耐熱性D121A100 116259 -130.8 分分B100DC DBI116258 - 120.9 分分C100 DC DBI118209 130.7 分分第五十九頁，共101頁。n可選擇產(chǎn)品(chnpn)B代表上述三產(chǎn)品(chnpn)進(jìn)行驗(yàn)證n產(chǎn)品(chnpn)的規(guī)格相同、且在同一滅菌設(shè)備內(nèi)滅菌并且滅菌工藝條件相似、以及生物指示劑芽胞在其中的耐熱性也較為相近，只要驗(yàn)證其中的一個(gè)產(chǎn)品(chnpn)B即可，n生物指示劑在其中的耐熱性最高，而滅菌程序的F0

54、值的下限低于其它二產(chǎn)品(chnpn)n但驗(yàn)證時(shí)要以100CFU/瓶作為污染菌含量n通過試驗(yàn)證明滅菌程序能使生物指示劑至少下降 8個(gè)對(duì)數(shù)單位, 所需F0為 D121 log = 7.2分n最低F0滿足要求n確定驗(yàn)證用芽孢在每瓶產(chǎn)品(chnpn)B中的接種數(shù)量第六十頁，共101頁。n驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)溶液為氯化鈉一磷酸鹽緩沖液驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)溶液為氯化鈉一磷酸鹽緩沖液(PBS)，驗(yàn)證試驗(yàn)，驗(yàn)證試驗(yàn)瓶數(shù)量為瓶數(shù)量為20袋袋/次。，產(chǎn)芽胞梭狀菌芽胞在氯化鈉一磷酸次。，產(chǎn)芽胞梭狀菌芽胞在氯化鈉一磷酸鹽緩沖液鹽緩沖液(PBS, pH7.0)中的耐熱性為中的耐熱性為1.4分鐘，高于其在分鐘，高于其在產(chǎn)品中的耐熱性，產(chǎn)品中的耐

55、熱性，n接種量接種量: F0=D121(1gA-1gB)n 根據(jù)陰性分?jǐn)?shù)法，根據(jù)陰性分?jǐn)?shù)法，B=2.303 log(n/q)n假如所有假如所有(suyu)的的20只試驗(yàn)瓶無菌檢查結(jié)果均呈陰性只試驗(yàn)瓶無菌檢查結(jié)果均呈陰性，在計(jì)算時(shí)可假定只有，在計(jì)算時(shí)可假定只有19瓶呈陰性，那么，瓶呈陰性，那么，nB=2.303lg(20/19)=0.0513,lgB=-1.29,nlgA=F0/D121+lgB=8/1.4-1.29=4.4, A=104.4個(gè)菌個(gè)菌.n每個(gè)挑戰(zhàn)瓶內(nèi)的芽胞接種量可控制在每個(gè)挑戰(zhàn)瓶內(nèi)的芽胞接種量可控制在104105之間。之間。第六十一頁，共101頁。n驗(yàn)證時(shí)，腔室內(nèi)的物品應(yīng)按實(shí)際生

56、產(chǎn)時(shí)的要求進(jìn)行裝驗(yàn)證時(shí)，腔室內(nèi)的物品應(yīng)按實(shí)際生產(chǎn)時(shí)的要求進(jìn)行裝載載n生物指示劑的使用數(shù)量應(yīng)足以反映整個(gè)物品內(nèi)、外部生物指示劑的使用數(shù)量應(yīng)足以反映整個(gè)物品內(nèi)、外部的滅菌狀況，生物指示劑既要遍布整個(gè)腔室，又要盡的滅菌狀況，生物指示劑既要遍布整個(gè)腔室，又要盡可能地放在熱效應(yīng)最差的部位，如物品中央、管路拐可能地放在熱效應(yīng)最差的部位，如物品中央、管路拐角以及角以及(yj)腔室的排水口腔室的排水口(干熱滅菌的排風(fēng)口干熱滅菌的排風(fēng)口)等等n應(yīng)將生物指示劑與物理測(cè)試用溫度探頭放于同一位置應(yīng)將生物指示劑與物理測(cè)試用溫度探頭放于同一位置，以準(zhǔn)確獲取物理參數(shù)與微生物致死性之間的相關(guān)性，以準(zhǔn)確獲取物理參數(shù)與微生物致死

57、性之間的相關(guān)性資料資料n放置在每個(gè)位置的生物指示劑均應(yīng)做好標(biāo)記，并且要放置在每個(gè)位置的生物指示劑均應(yīng)做好標(biāo)記，并且要與驗(yàn)證文件中生物指示劑的驗(yàn)證分布圖相對(duì)應(yīng)與驗(yàn)證文件中生物指示劑的驗(yàn)證分布圖相對(duì)應(yīng)第六十二頁，共101頁。n驗(yàn)證時(shí)，采用相關(guān)產(chǎn)品的最低滅菌條件進(jìn)行滅菌處理驗(yàn)證時(shí)，采用相關(guān)產(chǎn)品的最低滅菌條件進(jìn)行滅菌處理n滅菌程序結(jié)束后，將生物指示劑取出并清點(diǎn)數(shù)量并確認(rèn)無誤滅菌程序結(jié)束后，將生物指示劑取出并清點(diǎn)數(shù)量并確認(rèn)無誤后，送至微生物室，于適當(dāng)條件下培養(yǎng)后，送至微生物室，于適當(dāng)條件下培養(yǎng)(piyng)檢查。檢查。n陽性對(duì)照以及培養(yǎng)陽性對(duì)照以及培養(yǎng)(piyng)基的靈敏度?；撵`敏度。n在初始驗(yàn)證階

58、段，分別用生物指示劑在相同的滅菌條件下至在初始驗(yàn)證階段，分別用生物指示劑在相同的滅菌條件下至少連續(xù)運(yùn)行少連續(xù)運(yùn)行3次，以評(píng)價(jià)滅菌工藝條件的穩(wěn)定性次，以評(píng)價(jià)滅菌工藝條件的穩(wěn)定性;在以后的定在以后的定期再驗(yàn)證中，每次檢測(cè)一批即可。期再驗(yàn)證中，每次檢測(cè)一批即可。n驗(yàn)證時(shí)的生物指示劑分布、腔室內(nèi)的產(chǎn)品裝載及指示劑的控驗(yàn)證時(shí)的生物指示劑分布、腔室內(nèi)的產(chǎn)品裝載及指示劑的控制要求均與過熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)生物指示劑的使用原則相同制要求均與過熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)生物指示劑的使用原則相同。第六十三頁，共101頁。n 與過熱滅菌工藝與過熱滅菌工藝(gngy)相比，殘存概率滅菌工藝相比，殘存概率滅菌工藝(gngy)的滅菌效

59、力相對(duì)較低，用商購的普通生物指示的滅菌效力相對(duì)較低，用商購的普通生物指示劑無法實(shí)現(xiàn)對(duì)殘存概率滅菌工藝劑無法實(shí)現(xiàn)對(duì)殘存概率滅菌工藝(gngy)的驗(yàn)證。的驗(yàn)證。n商購的生物指示劑一般用于驗(yàn)證商購的生物指示劑一般用于驗(yàn)證F0值大于等于值大于等于15分鐘分鐘的滅菌工藝的滅菌工藝(gngy)，而且在載體上的耐熱性與在實(shí)際，而且在載體上的耐熱性與在實(shí)際產(chǎn)品中的耐熱性有相當(dāng)大的差異。產(chǎn)品中的耐熱性有相當(dāng)大的差異。n直接將芽胞加到產(chǎn)品溶液內(nèi)，因其耐熱性較高，只能加直接將芽胞加到產(chǎn)品溶液內(nèi)，因其耐熱性較高，只能加人較少數(shù)量人較少數(shù)量(如如Dl21值為值為2.4分鐘，則單位驗(yàn)證產(chǎn)品中的分鐘，則單位驗(yàn)證產(chǎn)品中的胞子

60、數(shù)量只能控制在胞子數(shù)量只能控制在100個(gè)左右才可能被完全殺滅個(gè)左右才可能被完全殺滅)，這，這就難以直觀反映實(shí)際滅菌工藝就難以直觀反映實(shí)際滅菌工藝(gngy)的可靠性和穩(wěn)定的可靠性和穩(wěn)定性性n試驗(yàn)表明，嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞在孢子紙條或注射用試驗(yàn)表明，嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞在孢子紙條或注射用水中的耐熱性水中的耐熱性(D121)約為約為1.5分，但在乳劑內(nèi)的耐熱性分，但在乳劑內(nèi)的耐熱性約為約為2.4分鐘。分鐘。第六十四頁，共101頁。n在同等條件在同等條件(介質(zhì)介質(zhì)(jizh)和溫度和溫度)下，產(chǎn)芽胞梭菌芽胞的耐熱性下，產(chǎn)芽胞梭菌芽胞的耐熱性D121值在值在0.8-1.5分之間，并且它的耐熱性也比較穩(wěn)