膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)-3

1、斜面斜面4 4支，空氣、手指皮膚、細(xì)菌分離培養(yǎng)物（上次實(shí)驗(yàn)平板）支，空氣、手指皮膚、細(xì)菌分離培養(yǎng)物（上次實(shí)驗(yàn)平板）器材準(zhǔn)備器材準(zhǔn)備v空氣細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析v手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析v膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容空氣的細(xì)菌學(xué)檢查空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號(hào)時(shí)間(min)地點(diǎn)菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù) A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時(shí)間(15分鐘) CFU：colony forming unit WHO推薦的醫(yī)院各部門空氣細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別cfu/m3適用范圍

2、級(jí)區(qū)10器官移植、心血管、矯形等外科手術(shù)室，保護(hù)性隔離室，灌注或配制注射液實(shí)驗(yàn)室級(jí)區(qū)200無(wú)菌室、手術(shù)室、供應(yīng)室、嬰兒室、中心滅菌單位、術(shù)后恢復(fù)室、早產(chǎn)兒及產(chǎn)房、重癥監(jiān)護(hù)病房級(jí)區(qū)200500一般病房、治療室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手術(shù)室浴室我國(guó)公共場(chǎng)所空氣衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直徑9cm）撞擊法cfu/m3沉降法個(gè)/皿適用范圍1000 1035星級(jí)賓館、飯店1500 202星級(jí)以下賓館和非星級(jí)帶空調(diào)賓館、飯店2500 30普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書館、博物館、美術(shù)館、飛機(jī)客艙4000 40音樂廳、影劇院、錄像廳（

3、室）、游藝廳、舞廳、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機(jī)室、旅客列車車廂、輪船客艙、飯館（餐廳）7000 75展覽館、商場(chǎng)（店）、書店、候車室、候船室1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對(duì)照。 2人1個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上:甲、丙常規(guī)洗手下:乙、丁標(biāo)準(zhǔn)洗手甲（丙）乙（?。┍∈种钙つw細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析第1格為洗手前：+ 第2格為洗手后 常規(guī)(甲、丙丙)洗手方法：? 標(biāo)準(zhǔn)(乙、丁丁)洗手方法：?第3格為消毒后：？第4格空白對(duì)照：-膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)（三）菌落特征觀察P11細(xì)菌純培養(yǎng)P10油鏡使用方法（

4、講解）膿汁和糞便標(biāo)本檢驗(yàn)（錄像）菌落特征(Colony Characteristics)v大?。捍?直徑約3mm以上)，中(直徑約13mm)，小(直徑約1mm以下)。v形狀：圓形，卵圓形、絲狀、不規(guī)則等。v邊緣：整齊，鋸齒狀，波浪狀，羽毛狀。v表面：隆起、平坦、中心凸起、臍形凹陷；光滑或粗糙、濕潤(rùn)或干燥。v溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周圍呈草綠色、不透明)，溶血(菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán))。v色素：一般為無(wú)色或灰白色，特殊色素有兩類：脂溶性色素(菌落本身著色，培養(yǎng)基不著色)和水溶性色素(菌落及培養(yǎng)基均著色)。 細(xì)菌的純培養(yǎng) Pure Culturesv膿汁標(biāo)本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落，菌

5、落的色素是脂溶性的，是細(xì)菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、不透明。37培養(yǎng)24小時(shí) v糞便標(biāo)本在伊紅美藍(lán)平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落顏色是水溶性的，不是細(xì)菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是因?yàn)榇竽c埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍(lán)結(jié)合，形成紫黑色具有金屬光澤、大而隆起、不透明的菌落；菌落直徑23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊紅的顏色，很淡的粉紅色，半透明，直徑12mm。37培養(yǎng)24小時(shí) v若培養(yǎng)、放置時(shí)間過長(zhǎng)或者平板上某個(gè)部位細(xì)菌比較多、菌落比較密集，大腸桿菌菌落顏色可能會(huì)發(fā)生改變。因?yàn)榇竽c桿菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物

6、質(zhì)，中和了乳糖分解時(shí)產(chǎn)生的酸。大腸桿菌菌落可能會(huì)由原來的紫黑色變成粉紅色，或者菌落中心黑色，邊緣粉紅色。v密集或半密集區(qū)域的菌落，不一定是單菌落，單菌落，有可能是菌落形成單位菌落形成單位（CFU） 。37培養(yǎng)3636小時(shí) 斜面接種分工v甲普通平板黃色菌落1支斜面 v乙普通平板白色菌落1支斜面 v丙伊紅美藍(lán)平板紫黑菌落1支斜面 v丁伊紅美藍(lán)平板粉紅菌落1支斜面 斜面正面上2/3作標(biāo)記：組號(hào)、黃色、白色、紫黑、粉紅。選擇平板上相同的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落。在平皿底部玻璃上，畫個(gè)大圈選取菌落，得到同組同學(xué)認(rèn)可，才能挑取。甲甲黃色黃色丙丙紫黑紫黑乙乙白色白色丁丁粉紅粉紅接種環(huán)接種環(huán)套住菌

7、落套住菌落輕刮取菌輕刮取菌斜面接種法 Streak Slant Method甲黃色, 乙白色。丙紫黑, 丁粉紅。標(biāo)記：組號(hào)，顏色接種在斜面培養(yǎng)基的表面。生物安全警告v接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。v氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。vPike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。v實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。滅菌 收集平板 滅菌桶內(nèi)（平板底部朝下，蓋朝上放置） 速送滅菌室 高壓蒸汽滅菌 洗刷。奧林巴

8、斯 CX21型 生物顯微鏡使用須知v顯微鏡是精密光學(xué)儀器，請(qǐng)不要讓其受到撞擊，請(qǐng)小心操作。v在搬運(yùn)顯微鏡時(shí)，請(qǐng)按右圖所示，以雙手抓住鏡臂孔的兩側(cè)，小心搬運(yùn)。如果拿住載物臺(tái)和鏡筒等部位搬運(yùn)的話，有可能會(huì)造成損壞。開關(guān)與調(diào)整光強(qiáng)v開或關(guān)之前，必須將亮度調(diào)整旋鈕按箭頭相反相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)到最小最小位置位置，以免損壞燈泡。v電源開關(guān)撥到 側(cè)為開，撥到側(cè)為關(guān)閉。v按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)亮度調(diào)整旋鈕變亮，相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)則變暗。聚焦v從顯微鏡的側(cè)面觀察，按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕，使物鏡盡可能接近接近標(biāo)本。一邊看目鏡，一邊慢慢逆逆箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕， 使載物臺(tái)下降下降。v看到標(biāo)本以后，用微調(diào)旋鈕來正確對(duì)焦。10倍物鏡的工作

9、距離工作距離（WD，從物鏡到標(biāo)本的 距離）為10.5mm。 油鏡的WD為0.13mm。調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌v用聚光鏡上下移動(dòng)旋鈕，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。v在孔徑光闌環(huán)上刻有物鏡倍率（10倍，100倍等），觀察時(shí)將與使用物鏡相對(duì)應(yīng)的倍率放到正面。轉(zhuǎn)換物鏡v旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，將希望使用的物鏡（10倍、100倍）轉(zhuǎn)到標(biāo)本的上方。100倍浸油物鏡使用方法v油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察部位上加一滴浸油。v旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進(jìn)入光路，用微調(diào)旋鈕對(duì)好焦距。v如果浸油內(nèi)有氣泡，會(huì)影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過12次浸油，排除油內(nèi)氣泡。香柏油折射率香柏油折射率n=1.515n=1.515空

10、氣折射率空氣折射率n=1.00n=1.00玻璃折射率玻璃折射率n=1.52n=1.52油浸鏡的原理光線光線 滴加香柏油可使滴加香柏油可使光線更多進(jìn)入物鏡光線更多進(jìn)入物鏡, ,避避免光線通過折射率低免光線通過折射率低的空氣而散失的空氣而散失, ,以提高以提高物鏡的分辨率物鏡的分辨率, ,使物象使物象明亮清晰。明亮清晰。 放大倍數(shù)：目鏡放大倍數(shù)：目鏡1010倍倍物鏡物鏡9090或或100100倍。倍。奧林巴斯奧林巴斯 CX21CX21型型 生物顯微鏡生物顯微鏡（實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，每人一臺(tái)）每人一臺(tái)）注意：只能橫放，不得豎放。注意：只能橫放，不得豎放。顯微鏡油鏡的使用P13v10物鏡標(biāo)本位置滴加香

11、柏油100油鏡浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸（工作距離0.13mm）細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像記錄結(jié)果關(guān)閉電源。v油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油 擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦鏡紙擦拭油鏡。v顯微鏡罩上防塵罩 橫放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)。(順德校區(qū)）實(shí)驗(yàn)臺(tái)兩側(cè)的電源插座，只能插入一個(gè)插頭，請(qǐng)選擇離你最近的電源插座。（校本部）實(shí)驗(yàn)臺(tái)中間，三個(gè)位的插座，中間那位插孔沒有電，不能使用，只能用兩側(cè)的插座。 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三、一v空氣、手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析v膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)菌落特征觀察P11細(xì)菌純培養(yǎng)P10油鏡使用方法（講解）膿汁標(biāo)本檢驗(yàn) （錄像）腸道致病菌的分離鑒定（錄像）思考題v在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,怎樣才能避免雜菌的污染?v空氣的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如何?v你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了什么問題?v怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分離和鑒定金黃色葡萄球菌?v菌落特征主要描述哪幾方面問題？如何挑選單菌落？ 常用器材擺放順序：電源插座常用器材擺放順序