火腿腸中亞硝酸鹽測(cè)定的實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、火腿腸中亞硝酸鹽測(cè)定的實(shí)驗(yàn)報(bào)告XX（ 2）班第 1 組 XXX XX 號(hào)組員：XXX， XXX一實(shí)驗(yàn)?zāi)康模耗苁炀氄莆帐褂?722 型分光光度計(jì)的用法會(huì)根據(jù)測(cè)得的數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的硝酸鹽的含量二、實(shí)驗(yàn)原理亞硝酸鹽采用鹽酸萘乙二胺法測(cè)定，硝酸鹽采用鎘柱還原法測(cè)定。樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、去除脂肪后，在弱酸性條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，產(chǎn)生重氮鹽，此重氮鹽再與偶合試劑（鹽酸萘乙二胺） 偶合形成紫紅色染料， 染料的顏色深淺與亞硝酸鹽含量成正比， 其最大吸收波長(zhǎng)為538nm， 測(cè)定其吸光度后， 可與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。三、儀器、設(shè)備小型絞肉機(jī)或組織搗碎機(jī)、 天平、 722 型分

2、光光度計(jì)， 250ml 容量瓶， 25ml 比色管， 50ml 燒杯四、實(shí)驗(yàn)材料、試劑樣品材料：雙匯雞肉味火腿腸試劑：1、 亞鐵氰化鉀溶液稱取106.0g亞鐵富化鉀，用水溶解，并稀釋至1000ml。2、 乙酸鋅溶液稱取220.0g乙酸鋅，先加30ml冰醋酸溶解，用水稀釋至1000ml。3、 飽和硼砂溶液稱取5.0g硼砂鈉溶于100ml熱水中，冷卻后備用。4、 0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液稱取0.4g對(duì)氨基苯磺酸，溶于100m120%的鹽酸中，避光保存。5、 0.2%鹽酸萘乙二胺溶液稱取0.2g鹽酸蔡乙二胺，以水定容至100ml水中，避光保存。6、 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液精密稱取 0.1000g 事先于硅

3、膠干燥器中干燥24h 的基準(zhǔn)亞硝酸鈉， 用重蒸餾水溶解， 移入 500ml 容量瓶中稀釋至刻度線。 此溶液每毫升相當(dāng)于200ug 亞硝酸鈉。7、 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液5ug/ml ，臨時(shí)用亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。五、樣品預(yù)處理1、稱取5g （精確至0.01g）制成均漿的試樣（如制備過(guò)程中加水，應(yīng)按加水量折算），至于50ml燒杯中，力口 12.5ml飽和硼砂溶液，攪拌均勻，以 70 度左右的水約 150ml 將試樣洗入250ml 容量瓶中，于沸水浴加熱15min ，取出置冷水浴中冷卻，并放置至室溫。（可先打漿，再稱勻漿的樣品）2、 在振蕩上述提取液時(shí)加入 5ml 亞鐵氰化鉀溶液， 搖勻， 放置 30

4、min ，去上層脂肪，上清液用濾紙過(guò)濾，棄去初濾液30ml ，濾液備用。六、檢測(cè)步驟1、吸取15ml樣品處理液與25ml比色管中。2、吸取 0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50ml亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于 0.0ug、1.0ug、2.0ug、 3.0ug、4.0ug、5.0ug、7.5ug、10.0ug、12.5ug 亞硝酸鈉）分另U置于 25ml 比色管中。3、標(biāo)準(zhǔn)與樣品管中分別加入 2ml0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液混勻，靜置 35min。4、各加入1ml0.2%鹽酸蔡乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15m

5、in。5、用2cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng) 538nm處測(cè)吸光度，繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量，同時(shí)作試劑空白。七、數(shù)據(jù)記錄表序號(hào)123456789相口樣品樣品體積/ml0.000.200.400.600.801.001.502.002.5015業(yè)硝 酸鹽 含量 /ug01.02.03.04.05.07.510.012.56.552X 10-4吸光度A00.0220.0720.0960.1290.1580.2350.3080.3900.021八、結(jié)果計(jì)算:亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液的標(biāo)準(zhǔn)使用液由：上圖中可知y=0.021y=0.0312x代入公式即 C=0.0312X 0.021=6.552X 10-

6、4ug/ml九，注意事項(xiàng)1、實(shí)驗(yàn)中使用重蒸儲(chǔ)水可以減少試驗(yàn)誤差。2、亞鐵富化鉀和乙酸鋅溶液作為蛋白質(zhì)沉淀劑，是利用產(chǎn)生的亞鐵 富化鋅與蛋白質(zhì)共沉淀。3、硫酸鋅溶液（30%）也可以作為蛋白質(zhì)沉淀劑使用。4、飽和硼酸的作用二：一是亞硝酸鹽的提取劑，二是蛋白質(zhì)沉淀劑。5、鹽酸蔡乙二胺有致癌作用，使用時(shí)應(yīng)注意安全。6、當(dāng)鹽酸含量過(guò)高時(shí)，過(guò)量的亞硝酸鹽可以使偶氮化合物氧化，生 成黃色，而使紅色消失，這是應(yīng)將樣品處理液稀釋后再做，最好是樣 品的吸光度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度之內(nèi)。107、顯色的PH以1.93.0為好。顯色后的穩(wěn)定性與室溫有關(guān)。在攝氏度時(shí)放置24h,吸光度值降低2%3%; 20攝氏度時(shí)放置2h,吸光度值開(kāi)始下降； 30 攝氏度顯色1h 顏色開(kāi)始變淺； 40 攝氏度的溫度條件下， 顯 45min 后吸光度值即迅速下降； 溫度降低其顯色時(shí)間也會(huì)推遲。一般認(rèn)為顯色溫度1530 攝氏度，在2030min 內(nèi)比色為宜。十、參考文獻(xiàn)1 中華人民共和國(guó)國(guó)標(biāo).GB/T5009.332010食品中亞硝酸鹽和