染色體標(biāo)本的制作及組型觀察

1、-作者xxxx-日期xxxx染色體標(biāo)本的制作及組型觀察【精品文檔】染色體標(biāo)本的制備及組型觀察【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?. 掌握染色體標(biāo)本制作的基本方法；2. 認(rèn)識(shí)不同生物的染色體的狀態(tài)，學(xué)會(huì)做染色體組型圖。【制作染色體標(biāo)本的意義】了解染色體的特征（形態(tài)、大小、數(shù)目）繪制染色體組型圖【染色體組型圖的應(yīng)用】 生物學(xué)方面：根據(jù)染色體特征鑒別生物及種類：兔44條；小鼠40條；大鼠42條；雞78條；貓38條；狗78條；人46條；馬64條 臨床醫(yī)學(xué)方面：主要用于遺傳性疾病的診斷和研究：21三體綜合癥：是21對(duì)常染色體多一條，此種人“先天愚型”，或稱“伸舌樣白癡”卵巢退化癥：45 XO，外貌表現(xiàn)為女性，卵巢發(fā)育不全或無(wú)

2、，1.5米以下，不能生育。睪丸退化癥：47 XXY ，外貌為男性，比一般男性高，睪丸發(fā)育不全，有女性樣乳房，智力低下或超常，不能生育，發(fā)聲尖高。因此，染色組型實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于胎兒遺傳性疾病早期診斷中（抽羊水做組型）【染色體標(biāo)本制作的原理】細(xì)胞具有旺盛的分裂能力 選擇活躍的組織：胸腺，骨髓，睪丸，小腸制作染色體標(biāo)本的先決條件 施加藥物使細(xì)胞分裂：PHA 設(shè)法得到大量的分裂中期細(xì)胞：秋水仙素1. PHA：促進(jìn)細(xì)胞分裂，使淋巴細(xì)胞返幼，變成淋巴母細(xì)胞。2. 秋水仙素：破壞微管裝配，使紡錘體不能形成，使大量細(xì)胞停在分裂中期。3. 空氣干燥：使細(xì)胞與染色體展開(kāi)。4. 低滲作用：水進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)容空間變

3、大，染色體間的距離變大，易于染色體分散開(kāi)。5. 固定：用Camoys solution,作用使蛋白變性，對(duì)染色體內(nèi)的組蛋白講，變形后硬度增加，保持了染色體的“即時(shí)形態(tài)”對(duì)細(xì)胞膜蛋白講，變性使細(xì)胞膜硬度增強(qiáng)，形成屏障作用，防止了細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外溢和丟失?！緦?shí)驗(yàn)用品】1. 實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、手術(shù)剪、解剖盤(pán)、膠頭滴管、離心管、離心機(jī)、小燒杯、冰箱、酒精燈、小燒杯2. 實(shí)驗(yàn)藥品：蒸餾水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素3. 實(shí)驗(yàn)材料：小鼠【實(shí)驗(yàn)步驟】1. 取雄性小鼠，以每克體重4微克注射秋水仙素（約1mL），14-16h后，用斷頭

4、法處死小鼠，取出睪丸用生理鹽水（0.9% NaCl溶液）洗去血污，置于解剖盤(pán)中。2. 將睪丸放入裝有1mL 0.3% KCl溶液的小燒杯中剪碎（液體呈乳白色）。3. 用銅網(wǎng)過(guò)濾到刻度離心管中，再加0.3% KCl溶液至4mL。4. 37靜置30mins，進(jìn)行低滲處理。5. 以800-1000r/min離心8分鐘。6. 棄上清液，加入2mL甲醇·冰醋酸固定液。用吸管至管底吹氣，輕輕打散細(xì)胞，固定8mins。7. 再以800-1000r/min離心8分鐘。8. 棄上清液，加入1mL甲醇·冰醋酸固定液，再制成細(xì)胞懸液，固定5mins。9. 取去潔凈的低溫預(yù)冷載片，距載片10-15

5、cm的高度滴下2-3滴細(xì)胞懸液，從載片一邊向另一邊輕輕吹氣，并同時(shí)輕輕敲打載片，以使細(xì)胞均勻分布和促使染色體展開(kāi)。10. 用濾紙擦去載片上的多余液體，空氣干燥或文火干燥。11. 用染液染色2030分鐘，細(xì)水沖洗玻片背面，去除多余染液，氣干。12. 鏡檢：低倍鏡下尋找分散良好，染色適中的分裂相，高倍鏡或油鏡下觀察染色體形態(tài)并計(jì)數(shù)。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】精子頭部 精子鞭毛 分裂中期的染色體 未破碎的細(xì)胞 分裂中期染色體【實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析】1. 顯微鏡下可看到藍(lán)紫色的染色體。還有很多未破碎的細(xì)胞。因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)采用的是小鼠的睪丸進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所以視野中可見(jiàn)大量的精子，它們有一個(gè)比較圓的頭部和鞭毛。2. 我觀察到的細(xì)胞處在

6、分裂中期，顯微鏡下大致可觀察到32條染色體，這可能是因?yàn)椴糠秩旧w在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中丟失；分析丟失原因如下：（1）. 摔碎細(xì)胞時(shí)可能高度有點(diǎn)過(guò)高，導(dǎo)致細(xì)胞被摔碎后，其中的染色體也被一同摔了出去。（2）. 因?yàn)槿旧珪r(shí)間過(guò)長(zhǎng)，玻片在染液中浸泡時(shí)間太久，染色體丟失在染液中。3. 有同學(xué)在顯微鏡下觀察到20條染色體，這部分細(xì)胞為單倍體細(xì)胞，處于減數(shù)第二次分裂中期。4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果所得到的染色體大多數(shù)棒狀而不是V型，這是因?yàn)榇禋鈺r(shí)染色體未展平好。5. 實(shí)驗(yàn)中觀察到的大多數(shù)細(xì)胞未破碎，分析原因可能如下：（1）. 摔細(xì)胞時(shí)高度不夠，細(xì)胞未完全摔碎； （2）. 在剪碎組織時(shí)沒(méi)有剪好，大量細(xì)胞聚集在一起，滴片時(shí)采用的高

7、度很難摔碎； （3）. 低滲不完全，細(xì)胞膨脹不完全，很難摔碎； （4）. 敲打細(xì)胞時(shí)力度不夠，導(dǎo)致細(xì)胞還是聚集在一起?！咀⒁馐马?xiàng)】1. 吹散細(xì)胞：應(yīng)該輕輕地吹細(xì)胞，如果太用力會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂。2. 銅網(wǎng)過(guò)濾：利用銅網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾操作的時(shí)候，應(yīng)盡量將組織剪碎，并且讓濾液慢慢流下，不能人為破壞銅網(wǎng)以加快速度。3. 剪碎組織時(shí)，應(yīng)盡量將組織剪碎，若燒杯中或者過(guò)濾完銅網(wǎng)上還有較大塊的組織，應(yīng)在燒杯中繼續(xù)加入0.3% KCl溶液，繼續(xù)剪。4. 本實(shí)驗(yàn)采用倒置染色法，目的：1）. 可以節(jié)省染料；2）.可以避免染液快速揮發(fā)；3）.可以防止染色顆粒沉淀，影響觀察。5. 在染色時(shí)應(yīng)注意，多個(gè)樣品同時(shí)染色應(yīng)擺放緊密，不要有間隙；滴染液時(shí)應(yīng)盡量慢，不要有氣泡，以免部分染色體不被著色。6. 染色：染色之后應(yīng)沖去染液并晾干，注意使用小水流并從背面沖洗，這樣可以避免沖去細(xì)胞。7. 摔碎細(xì)胞：摔碎細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意滴管與載玻片的距離，如果距離太小，則細(xì)胞很難摔碎，不會(huì)觀察到染色體；但如果距離太大，會(huì)使細(xì)胞完全的碎開(kāi)，染色體飛出或者染色體布滿視野，給計(jì)數(shù)造成一定難度。【實(shí)驗(yàn)反思】本次試驗(yàn)，雖然成功的