呼吸道病原體檢測(cè)

1、編輯ppt呼吸道病原體檢測(cè)呼吸道病原體檢測(cè)編輯ppt呼吸道感染呼吸道感染n呼吸道感染是指病原體感染人體的鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等呼吸系統(tǒng)n分為上呼吸道感染和下呼吸道感染編輯ppt上呼吸道感染上呼吸道感染n常見(jiàn)急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱(chēng)，是呼吸道最常見(jiàn)的一種傳染病n常見(jiàn)病因?yàn)椴《?，少?shù)由細(xì)菌引起?；颊卟环帜挲g、性別、職業(yè)和地區(qū)。不僅具有較強(qiáng)的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥編輯ppt下呼吸道感染下呼吸道感染n包括急性氣管/支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴(kuò)張等n由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌等微生物引起，其防治應(yīng)遵循預(yù)防為主、準(zhǔn)確診斷、及時(shí)治療的原則，治療時(shí)必須明確

2、引起感染的病原體以選擇有效的抗生素編輯ppt呼吸道病呼吸道病原體原體n常見(jiàn)的呼吸道病原體主要有病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體和立克次體等n據(jù)統(tǒng)計(jì)，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起n一種病原體可引起多種臨床癥狀，同一臨床表現(xiàn)可由多種病原體引起編輯ppt呼吸道病原體呼吸道病原體n細(xì)菌：細(xì)菌引起呼吸道感染的機(jī)會(huì)比病毒少。一旦感染，癥狀多較嚴(yán)重，定位比較明顯，如扁桃體炎、中耳炎、鼻竇炎等。由細(xì)菌引起的兒童肺炎往往是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌或金黃色葡萄球菌編輯ppt呼吸道病原體呼吸道病原體n病毒，包括鼻病毒、冠病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等編輯ppt呼吸道病原體呼吸道病原體n支原體、

3、衣原體感染導(dǎo)致的呼吸道感染與其它病原體感染的早期臨床表現(xiàn)類(lèi)似?？赡茉?-3天后咳嗽的癥狀會(huì)表現(xiàn)比較突出。在小于30歲的年輕人中，肺炎支原體是最重要的下呼吸道病原體編輯ppt非典型呼吸道病原體非典型呼吸道病原體n是指除肺炎鏈球菌以外的病原體，包括嗜肺軍團(tuán)菌(LP)、肺炎支原體(MP) 、肺炎衣原體(CP) 、Q熱立克次體(貝納柯克斯體) 、腺病毒(ADV) 、呼吸道合胞病毒(RSV) 、流感病毒(IFV)和副流感病毒(PIV)等編輯ppt非典型呼吸道病原體非典型呼吸道病原體n這些病原體變異快，傳播廣，由于不易形成長(zhǎng)期免疫力而難以預(yù)防和控制 流感病毒 副流感病毒病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒 編輯p

4、pt呼吸道病呼吸道病原體檢測(cè)原體檢測(cè)現(xiàn)有的主要方法：n病毒分離培養(yǎng)n抗原檢測(cè)n抗體檢測(cè)n分子生物學(xué)方法等編輯ppt檢測(cè)方法的比較檢測(cè)方法的比較檢測(cè)方法檢測(cè)方法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)病毒分離培養(yǎng)病毒分離培養(yǎng)特異性高，金標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件要求高、靈敏度低，標(biāo)本中病原體量少時(shí)，易致假陰性?？乖瓩z測(cè)抗原檢測(cè)直接免疫熒光法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度和特異性均較高且可用于疾病的早期診斷需要特異性抗體、熒光顯微鏡，易受采樣限制抗體檢測(cè)抗體檢測(cè) 間接免疫熒光法靈敏度、特異性較高對(duì)疾病早期診斷沒(méi)有太大幫助酶聯(lián)免疫吸附法較快速，批量篩查特異性不高，假陽(yáng)性多分子生物學(xué)方法分子生物學(xué)方法靈敏度和特異性均很高操作繁瑣，價(jià)格昂貴編輯ppt抗

5、體抗體、抗原檢測(cè)的比較、抗原檢測(cè)的比較抗體抗體IgM檢測(cè)檢測(cè)病原體抗原檢測(cè)病原體抗原檢測(cè)檢測(cè)最佳時(shí)間一般在感染一周左右病毒感染出現(xiàn)癥狀后即可檢測(cè)出臨床意義回顧性診斷，適用于疾病中后期的診斷，可用于疾病早期診斷，對(duì)患者的治療有重要指導(dǎo)意義檢測(cè)靈敏度將包被有不同基質(zhì)的生物薄片固定在一個(gè)反應(yīng)區(qū)中，可同時(shí)檢測(cè)多種抗不同病原體的抗體檢測(cè)方法一般使用ELISA或者間接免疫熒光法，有非特異性熒光一般使用直接免疫熒光法，幾乎沒(méi)有非特異性反應(yīng)，敏感性較差編輯pptnIgMnIgG編輯pptn機(jī)體產(chǎn)生IgM一般需要一周左右的時(shí)間，而有免疫缺陷或免疫系統(tǒng)不健全的個(gè)體如兒童，特別是3歲以下的小孩，其產(chǎn)生抗體往往需要更

6、久，且抗體產(chǎn)生的水平也較低n若檢測(cè)的是IgG，則不能很好地區(qū)分既往感染和急性感染編輯pptn因此，抗原檢測(cè)的方法對(duì)嬰幼兒和兒童的呼吸道感染的病因診斷、鑒別診斷和臨床用藥指導(dǎo)比抗體法更有優(yōu)勢(shì)n檢測(cè)抗體IgM比IgG更有臨床意義編輯ppt采樣采樣抗原檢測(cè)n拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。 伸入距離為從耳垂部到鼻尖長(zhǎng)度的一半，一般針對(duì)兩周歲以下兒童，伸入距離約為拭子絨毛頭的長(zhǎng)度兩倍n拭子伸入后要輕輕捻動(dòng)拭子轉(zhuǎn)3圈。 取樣后在一小時(shí)之內(nèi)洗脫到生理鹽水中，12小時(shí)內(nèi)送檢編輯ppt抗原檢測(cè)采樣抗原檢測(cè)采樣編輯ppt采樣采樣抗體檢測(cè)編輯pptn采樣對(duì)結(jié)果影響較大n非典型感染多為干咳，無(wú)痰/少

7、痰n陽(yáng)性率低（標(biāo)本問(wèn)題，病毒顆粒?。﹏抗原在體內(nèi)存在時(shí)間短抗原檢測(cè)的劣勢(shì)抗原檢測(cè)的劣勢(shì)編輯ppt九項(xiàng)呼吸道感染病原體九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)抗體檢測(cè)編輯ppt檢測(cè)原理檢測(cè)原理n間接免疫熒光法（IFA）是基于待測(cè)樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果編輯ppt試劑盒組成試劑盒組成組分組分成分和用途成分和用途載玻片檢測(cè)的物理載體，覆有聚四氟乙烯并包被有針對(duì)檢測(cè)物的特異性抗原，質(zhì)控品吸附劑羊抗人IgG用來(lái)吸附人IgG避免干擾

8、IgM 檢測(cè)FITC結(jié)合物熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白結(jié)合物，和抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)，并顯色封閉介質(zhì) 甘油緩沖液，便于觀察磷酸鹽緩沖液(PBS)用于洗滌步驟，從反應(yīng)介質(zhì)中除去未結(jié)合的免疫球蛋白和結(jié)合物編輯ppt實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1n樣本的稀釋?zhuān)貉鍢?biāo)本與PBS按1:1比例稀釋n稀釋后的血清加入吸附劑中，徹底混勻。處理后的血清要離心10-15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測(cè)編輯ppt實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟2編輯ppt結(jié)果判斷結(jié)果判斷編輯ppt陰性結(jié)果熒光圖譜陰性結(jié)果熒光圖譜n軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無(wú)熒光；支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色編輯ppt陽(yáng)性結(jié)果熒光圖譜陽(yáng)

9、性結(jié)果熒光圖譜n腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對(duì)陽(yáng)性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋(píng)果綠色熒光；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋(píng)果綠色熒光；支原體對(duì)陽(yáng)性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋(píng)果綠色熒光編輯ppt病原體病原體形態(tài)或熒光模式形態(tài)或熒光模式嗜肺軍團(tuán)菌桿狀肺炎支原體細(xì)胞外圍熒光模式立克次體球桿狀肺炎衣原體球狀腺病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）呼吸道合胞病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）甲型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）乙型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）副流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）編輯ppt嗜肺軍團(tuán)菌n陰性：熒光弱、

10、少、不規(guī)則編輯ppt嗜肺軍團(tuán)菌n陽(yáng)性：熒光密集，且亮度較好，桿狀形態(tài)編輯ppt肺炎支原體n陰性：紅色細(xì)胞周?chē)鸁o(wú)或少量熒光，亮度弱編輯ppt肺炎支原體n陽(yáng)性：熒光占視野50%以上，亮度好，形態(tài)為明顯的細(xì)胞膜或胞漿編輯pptQ熱立克次體n陰性：熒光弱、少、不規(guī)則編輯pptQ熱立克次體n陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，形態(tài)典型編輯ppt肺炎衣原體n陰性：熒光弱、少編輯ppt肺炎衣原體n陽(yáng)性：熒光密集，且亮度較好編輯ppt腺病毒n陰性：熒光弱、少編輯ppt腺病毒n陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞3-5個(gè)編輯ppt呼吸道合胞病毒n陰性：熒光弱、少編輯ppt呼吸道合胞病毒n陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量

11、多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞3-5個(gè)編輯ppt甲型流感病毒n陰性：熒光弱、少編輯ppt甲型流感病毒n陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞3-5個(gè)編輯ppt乙型流感病毒n陰性：熒光弱、少編輯ppt乙型流感病毒n陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞3-5個(gè)編輯ppt副流感病毒n陰性：熒光弱、少編輯ppt副流感病毒n陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞3-5個(gè)編輯ppt方法的局限性方法的局限性n抗體水平無(wú)顯著上升時(shí)不能排除感染的可能性n單一樣本抗體檢測(cè)結(jié)果不能幫助作出近期感染的診斷。應(yīng)采集雙份樣本（急性期和康復(fù)期）同時(shí)檢測(cè)來(lái)觀察血清轉(zhuǎn)化或抗體水平的明顯升高編輯ppt方法的局限性方法的局限性n對(duì)患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA檢測(cè)時(shí)，支原體、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，會(huì)在細(xì)胞上發(fā)生非特異性反應(yīng)，這些血清不能用此方法評(píng)價(jià)n質(zhì)控孔用于檢測(cè)這種現(xiàn)象編輯ppt方法的局限性方法的局限性n在嗜肺軍團(tuán)菌和Q熱