公開課用土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)PPT學習教案

1、會計學1公開課用土壤中分解尿素的細菌的分離公開課用土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)與計數(shù) 課題背景第1頁/共25頁 課題背景2、尿素的利用3、細菌能分解尿素的原因直接原因：能合成脲酶（分解尿素的酶）根本原因：具有合成脲酶相關(guān)的基因第2頁/共25頁（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌；（2）統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌。 課題目的第3頁/共25頁尋找耐高溫的DNA聚合酶說明：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。DNA多聚酶鏈式反應(PCR)是一種在體外將少量DNA大量復制的技術(shù)，此項技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。1966年，布魯克在美國黃石

2、國家公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)了耐熱的Taq細菌，并分離到耐高溫的DNA聚合酶。一、篩選菌株耐高溫的酶耐高溫生物體耐高溫環(huán)境（熱泉、火山口）尋找尋找第4頁/共25頁2、方法：實驗室如何篩選菌種人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。1、原理：根據(jù)原理， 培養(yǎng)基應如何配制，才能將分解尿素的細菌分離出來？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進行篩選第5頁/共25頁統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少細菌第6頁/共25頁平板劃線法得到的菌落 稀釋涂布平板法得到的菌落第7頁/共25頁間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）統(tǒng)計菌落數(shù)目每克樣品中的菌株數(shù)=（CV)M C:某一稀釋度下平板上

3、生長的平均菌落數(shù)； V:所用稀釋液的體積；M:稀釋倍數(shù)。第8頁/共25頁注意事項為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板上進行計數(shù)。稀釋度是不是越高越好？如果稀釋度過高，菌落數(shù)少于30，計算結(jié)果偏低，誤差大；如果稀釋度過低，菌落數(shù)超過300，統(tǒng)計和計算結(jié)果都會有誤差；恰當?shù)南♂尪仁浅晒y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。第9頁/共25頁 兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)。從對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。 1、甲同學在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230。 2、乙同學在該濃度下涂布了A、B、C三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學以這

4、三個平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計結(jié)果。 你認為這兩位同學的作法正確嗎？如果有問題，錯在哪？ 甲：沒有重復實驗（至少涂布3個平板） 乙：其中一個平板計數(shù)結(jié)果與其他兩個相差太大，操作過程可能出現(xiàn)了錯誤。資料分析：第10頁/共25頁注意事項為增強實驗說服力與準確性，設計實驗時，需要涂布至少三個平板作為重復組。分析實驗結(jié)果時，要考慮重復組結(jié)果是否接近，如果相差太大，意味著操作有誤，需重新實驗。為防止培養(yǎng)時間不足導致菌落遺漏，在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)，選取菌落數(shù)穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌實際數(shù)目低。因為當兩個或多個細胞連在一起時，繁殖后形成的還是一個菌落第11頁/共

5、25頁第12頁/共25頁三、設置對照1、目的： 排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。 對照實驗是指除了 被測試 的條件外，其他條件都 相同 的實驗。第13頁/共25頁 利用選擇培養(yǎng)基進行尿素分解菌的分離過程中，從對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，A、B兩同學分別得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。 1、A同學篩選出150個菌落。 2、B同學篩選出50個菌落。 B認為A的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)，因而導致不能分解尿素的細菌也能在該培養(yǎng)基中生長。A確認自己的操作無誤，不同的原因是自己所用的土壤樣品與其他同學不同，但由于自己在實驗時未設置對照，因此也拿不出能令人信服

6、的證據(jù)。請你幫助A同學改進實驗，提供具有說明了的證據(jù)。資料分析：第14頁/共25頁小結(jié)：通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案一：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗 方案二：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預測：如果結(jié)果與A同學一致，則證明是土樣不同引起；如果結(jié)果不同，則證明A同學的操作有誤。土樣不同操作有誤導致培養(yǎng)基被污染第15頁/共25頁 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。第16頁/共25頁第17頁/共25頁為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？第18頁/共25頁實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。第19頁/共25頁第20頁/共25頁第21頁/共25頁第22頁/共25頁利用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基分離出的微生物都是能分解尿素的微生物嗎？思考： 不一定。因為有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物進行生長繁殖。第23頁/共25頁 課題延伸：鑒定菌株原理：產(chǎn)脲酶的細菌將尿素