血液中碳氧血紅蛋白飽和度的雙波長分光光度簡便測定法

1、血液中碳氧血紅蛋白飽和度的雙波長分光光度簡便測定法第18卷,第1期2001年1月光譜實驗室Chinese.,rmofSpectroscopyLaboratoryJanuary,2c01血液中碳氧血紅蛋白飽和度的雙波長分光光度簡便測定法劉冬嫻胡啟芬王彥華譚家鎰(中國刑警學院祛醫(yī)系沈陽市皇姑區(qū)塔灣暫83號110035)摘要本文報道血液中碳氧血紅蛋白基于吸光度差值的雙波長分光光度檢測方法:撿血用臺有NazS:O的溶液稀釋得到HbCO和Hb的雙組分溶液,Hb有相同吸光度的雙波長處的吸光度差值只反映HbC0拘濃度,HbC0有相同吸光度的雙波長處的吸光度差值只反映Hb的液度,測定了這些噯光度差值可以利用給

2、值與理論值嚴格一致,當檢血是中毒案件撿血時,本方法測定值與可靠方法的測定值嚴格一致.關鍵詞血,一氧化碳,碳氧血紅蛋白,雙波長分光光度法.中圖分類號;O657.32文獻標識碼:B文章編號:10048l粥(2001)010035041前言一氧化碳是一種常見引起人中毒死亡的毒物.為確定死因,司法鑒定中常需要進行血液碳氧紅蛋白飽和度(HbCO)的測定.在各種類型的測定方法中,以光譜法應用最為廣泛,因為該類方法總體上看都具有操作簡便,快速,結果準確可靠的特點.常用的光譜法中有等吸光點法,聯立方程組法0,雙波長法0,導數光譜法r等.其中導數光譜法需要使用能進行導數光譜測定的儀器,普遍性應用受到限制;等吸光

3、點法和聯立方程組法易受血液澄清度的影響,測定值準確性差;艘波長法需要對檢血及通一氧化碳飽和后檢血2次測定,操作不夠簡便本文報道的雙波長法使用普通光譜儀,不受血液澄清度影響,不需對檢血通一氧化碳前后2次測定,因此是一種簡便,準確,可廣泛應用的方法2實驗部分島津UV250型紫外可見分光光度計,狹縫寬度2nm,吸光池厚lcm.新煮沸放冷的蒸餾水中.作者簡舟;劉冬嫻(1963一),女.湖南省長沙市人,學士|湖南高等公安?？茖W校講師,中目刑蓄學院進修生;王彥華(19B6一),男,內蒙古赤峰市.博士,中國刑蓄學院講師譚家鎰(1942一),男.遼寧省昌圖縣人,碩士,中國刑蓄學院救授,以上4均從事掛醫(yī)毒物分析

4、的教學和研究工作10-11光譜實驗室已知HbCO的檢血:取不吸煙人的血液,用稀釋劑進行約200倍的稀釋,把血稀釋分成2份,其中一份通一氧化碳至飽和,再用氮氣趕除溶解的一氧化碳,與另一份稀釋血液按一定的比伊混臺,得到一系列巳知HbCO的檢血(測定時不再稀釋).2份,一份通一氧化碳至飽和為碳氧血紅蛋白HbCO溶液,另一份為濃度相等的還原血紅蛋白Hb溶液.測定各份Hb溶液在530nm處的吸光度和583nm至584nm每間隔0.1nm處的吸光度,找出527nm至528nm每間隔0.1nm處的吸光度,找出吸光度與554.5nm()處吸光度相等的波長().由不同人血,不同稀釋度測得的z和計算和的平均值見表

5、1.在和(上述求出的平均值)處分目U測定上述各HbCO溶液的吸光度和,在和丑(上述求出的平均值)處分別測定上述各Hh溶液的,和.用相同濃度的HbCO溶液和Hb溶液(也即同一人,同一稀釋濃度的通一氧化碳飽和血和不通一氧化碳血)捌得的,z,H和A按公式K=(一A.)/(A一)計算K值.由不同血源,不同稀釋度血液計算的K值求出平均K值(表,口取檢血1滴,用稀釋劑進行約200倍的稀釋,測定,(,為上述求出的平均值)處的吸光度值,z,A和A,按本文公式(6)計算HbCO.3結果與討論在測定波長范圍內血液中的吸光物質為各種形式的血紅蛋白,即氧和血紅蛋白HbO,碳氧血紅蛋白HbCO和還原血紅蛋白Hb,不吸煙

6、人血中可認為無HbCO,稀釋劑中的連二亞硫酸鈉可將血中的Hb還原為Fib,對HbCO無作用.因此可認為稀釋劑稀釋的不吸煙人血是Hb溶液,稀釋劑稀釋的一氧化碳中毒人血是Hb和HbCO的混合溶液,稀釋劑稀釋的血通一氧化碳飽和后是IHbCO溶液圖1為HbCO溶液與Hb溶液的光譜圖(圖中HbCO溶液與Hb溶液的濃度相等),從圖1可見530nm()與583nm附近某波長(2)是Hh的等吸收波長對,554.5nm()與527nm附近某波長()是HbCO的等吸收波長對,且在Hb的等吸收波長對處HbCO有較大的吸光度差值(圖中D),在HbCO的等吸收波長對處Hb有較大的吸光度差值(圖中D).圖2是一份用稀釋劑

7、稀釋的一氧化碳中毒檢血的光譜圖.對于稀釋的檢血測得的光譜圖,從上述等吸收波長的意義可得:1一A2一(e1Hb.一Ez)×CHbc0(1)d3一d=(HbE'Hb)×CHb(2)式中,.,山和A的意義如圖2所示,e"為.波長處HbCO的摩爾吸光系數,為一常數,稀釋檢血中HbCO和Hb的摩爾濃度.根據HbCO的定義,對于稀釋中毒血液:HbCO=Cm/(C.bc0+CHb)t3)設K一(elbc.一E2")/(白Hb一Hb)(4)由于E2.等均為常數,式中K應為常數,可由實驗測得,即本文測得的K值.由(1),(2),(3),第1崩劉謄相等:血渡中碳氧血

8、紅蛋白飽和度的雙坎長分光光度簡便測定掛釜渡長Mnm圖1HhCO和Hb的吸收光譜圖HbCO;一Hb.波長,nm圖2一份稀釋(同時也被還原)檢血的吸收光譜圖(4)式可得:HbCO=(一A)/E(A一A)十K(A一A.)將測得的值(見3.2)代人公式(5):HbCO一(A1一A2)/E(A一A2)十1.297(A一A)因此,只要測定稀釋檢血的A,Az,A和A即可計算其HbCO.取了多名不吸煙自愿者血液制成HbCO及Hb溶液按前述實驗方法測定,結果如表1所示.從表1數據可見等吸收波長z,及值都非常恒定,表明本文方法原理是正確的,檢血測定值準確性有保障.按本文實驗方法配制已知HbCO的檢血數份,取實際中

9、毒案件的尸體血液數份,分別用本文方法,文獻3報道的雙波長法,文獻E43報道的導數光譜法進行測定,每份檢血每種方法各測定2次取平均(5)【6)血積稀釋倍數等吸收被長值,其中第3和第4份檢血用本文方法測定6次計算平均值及標準差(sD),結果如表2所示.方法的鍘定值與文獻報道的準確性好的方法(但操作不夠簡便或儀器不夠普遍)測定值一致各種光譜法測定rabco0A都適臺于新鮮血,不適合于腐敗血.存放時間較長,沒有腐敗的陳舊38光譜實驗室第18卷濁對入射光有散射作用,表現出的吸收光譜為一條幾乎與基線平行的直線(吸光度在各波長處基本相等),根據光譜的加臺性以及本文方法的原理可以判斷混濁對本法測值準確性不產生

10、影響(圖2中的A和a值不困混濁呈現的吸收而變化).相似的也可以推斷文獻3,4報道的雙波長及導數光譜法測定的準確性也不受輕微混濁的影響.但根據測定原理,等吸光點法和聯立方程組法測定的準確性會明顯受到混濁的影響,這兩種光譜法因此不適臺陳舊血的測定.表2方法準確性考查參考文獻13SickTJ?DeterminationofCarboxyhemoglobLninthePresenceofOtherBloodHemoglobinPigmentsbyVisibleSpectrophotometJ.Jr版攤,i984.29:3954.23RodkeyF【etalSpectrophotometticMeasu

11、mmemofCarboxyhemoslobinandMethemoglobininBlood_o3.ClinicalC&emisOO-.1979,25:l3881393.ComparisonwithGasChromatographicMethod口.ForemScmelmernatrad.1983,21ll87195.43譚家鎰,楊鳴.四階導數光譜法測定血棱磧氧血紅蛋白飽和度J_中璃法噩學梟志,1988.3;206-209.ASimplemethodofCarboxyhemoglobinDeterminationbyDoubleWavelengthSpectrophotomet

12、ryofAbsorbanceDifferenceLiuDong-XianHuQi-FenWANGYan-HuaTANJia-Yi(DepartmentoLegalMedm'neCrbninalPdiceCotlege.fCfunaShenjocrng110035tP.R.Chma,AbstractThispaperdescribedthespectrophotometricdeterminationofcarboxyhemoglobininbloodonthethetwowavelengthsatwhichHbhassameabsorbancereflectsonlytheHbCOcomponentandabsothancedifferenceattheothertwowavelengthsatwhichHbC0hassi'neabsorbancereflectsonlytheHbcomponent.Aftermeasurementofthisabsorhancedifferences,