蓬亂蛋白相關(guān)形態(tài)形成活化因子

1、會(huì)計(jì)學(xué)1蓬亂蛋白相關(guān)形態(tài)形成活化因子蓬亂蛋白相關(guān)形態(tài)形成活化因子五、細(xì)胞傷口愈合試驗(yàn)分析六、超聲心電圖分析LTR 報(bào)告基因，由上游啟動(dòng)子起始表達(dá)；SA, 剪接受體; GFNR, 綠熒光硝基還原酶基因;pPKG, PKG 啟動(dòng)子; neo, 新霉素抗性基因?；蛘T捕載體系統(tǒng)(ROSA- GFNR)結(jié)構(gòu)示意圖圖A-a ：基因誘捕載體示意圖 圖A-b：蛋白印跡和DNA電泳圖 16.5d胚胎，Het為Daam1等位基因，Mut為純合突變圖B:DNA電泳和蛋白印跡圖。 16.5d胚胎各器官，Het為Daam1等位基因，Mut為純合突變1、表明Daam1基因缺陷的小鼠模型構(gòu)建成功 2、Daam1在小鼠各處

2、器官均有表達(dá)Daam1在正常小鼠中的表達(dá)譜 A-a-c：8.5-10.5d小鼠胚胎原位雜交檢測(cè)Daam1的表達(dá)d-e：10.5d切片分析AVC，房室墊; EC，心內(nèi)膜; EPC，心外膜; 圖B：8.5-10.5d Daam1在心臟和腦中PCR檢測(cè)Daam1突變小鼠中用半乳糖苷酶染色切片分析發(fā)現(xiàn)Daam1在小鼠全身表達(dá)，在心臟處高表達(dá)10.5d表達(dá)強(qiáng)烈發(fā)育的心臟和神經(jīng)管用免疫熒光染色E12.5胚胎冰凍切片。WGA：麥胚凝集素特異性染心肌細(xì)胞膜DAPI：特異性然細(xì)胞質(zhì)Daam1gt/gt小鼠的心臟表型和功能特性。切片分析 E14.5 d、f：DORV畸形 h、I VSD畸形切片分析 P0 d、f、

3、h：DORV畸形 j： VSD畸形2月齡Daam1小鼠的病理分析圖C：Daam1突變小鼠左心室壁出現(xiàn)腦回溝疏松結(jié)構(gòu)（箭頭所示）圖D-a：心臟與身體的比重。圖D-b：超聲波心電圖分析。表明Daam1突變型小鼠LV心肌變厚。Daam1gt/gt 拯救小鼠通過(guò)NKx2.5Cre小鼠與Daam1gt/gt小鼠雜交獲得Daam1拯救型小鼠。圖A：基因示意圖圖B: E10.5 半乳糖苷酶染色表明拯救成功E14.5胚胎組織切片Daam1gt/gt/Nkx2-5Cre/+胚胎（B，D，F(xiàn)）表現(xiàn)出正常的心臟結(jié)構(gòu)1周齡小鼠組織切片。daam1gt/+（A，D）和Daam1gt/gt/Nkx2-5Cre/+（C，F(xiàn)

4、）小鼠表現(xiàn)出正常的室壁和小梁。Daam1gt/gt突變小鼠（B，E）顯示心室致密。作者發(fā)現(xiàn)作者發(fā)現(xiàn)Daam1缺陷病不影缺陷病不影響心肌細(xì)胞分化，增殖或凋亡響心肌細(xì)胞分化，增殖或凋亡通過(guò)通過(guò)Nkx2-5, Tbx20 and Gata4心臟早期發(fā)育基因心臟早期發(fā)育基因, 形態(tài)發(fā)生蛋形態(tài)發(fā)生蛋白白 BMP10心室標(biāo)志性基因心室標(biāo)志性基因MLC2A 、 MLC2V都無(wú)顯著差異表達(dá)都無(wú)顯著差異表達(dá)圖圖A：只有：只有Daam1gt/gt小鼠饑餓后小鼠饑餓后F-肌動(dòng)蛋白明顯降低表肌動(dòng)蛋白明顯降低表達(dá)達(dá) 圖圖B：E12.5心心臟中臟中 肌動(dòng)蛋白熒光分析表明，只有肌動(dòng)蛋白熒光分析表明，只有 Daam1gt/g

5、t小鼠肌動(dòng)蛋白表達(dá)量很低小鼠肌動(dòng)蛋白表達(dá)量很低以上結(jié)果表明：在心肌細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架以上結(jié)果表明：在心肌細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的形成和橫紋肌組織的形成是需要的形成和橫紋肌組織的形成是需要Daam1的的Daam1gt/gt小鼠在心肌細(xì)胞中橫紋肌的形成受到干擾 圖A:E12.5 Daam1gt/gt小鼠心肌細(xì)胞的粘附蛋白 -catenin和N-cadherin 表達(dá)明顯混亂圖B： Daam1gt/gt小鼠橋粒連接異常圖C:E12.5 Daam1gt/gt小鼠心肌黏接細(xì)胞排列無(wú)規(guī)則圖D： Daam1gt/gt小鼠連接細(xì)胞變少圖d：為差異分析Daam1在心肌細(xì)胞中對(duì)細(xì)在心肌細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞粘附是非常重

6、要的胞粘附是非常重要的Daam1缺陷小鼠新生兒致死率是由于先心畸形造成的Daam1通過(guò)對(duì)絲狀肌動(dòng)蛋白組裝的調(diào)節(jié)，控制了心肌細(xì)胞骨架的功能Daam1心肌骨架在心肌細(xì)胞中有重要功能，從而能調(diào)節(jié)正常心臟形態(tài)的形成表型表型機(jī)制機(jī)制原因原因總結(jié)：總結(jié)：圖B:DNA電泳和蛋白印跡圖。 16.5d胚胎各器官，Het為Daam1等位基因，Mut為純合突變1、表明Daam1基因缺陷的小鼠模型構(gòu)建成功 2、Daam1在小鼠各處器官均有表達(dá)Daam1突變小鼠中用半乳糖苷酶染色切片分析發(fā)現(xiàn)Daam1在小鼠全身表達(dá)，在心臟處高表達(dá)10.5d表達(dá)強(qiáng)烈2月齡Daam1小鼠的病理分析圖C：Daam1突變小鼠左心室壁出現(xiàn)腦回溝疏松結(jié)構(gòu)（箭頭所示）圖D-a：心臟與身體的比重。圖D-b：超聲波心電圖分析。表明Daam1突變型小鼠LV心肌變厚。以上結(jié)果表明：在心