酶活性測(cè)定的主要影響因素及控制.

1、酶活性濃度測(cè)定的酶活性濃度測(cè)定的主要影響因素及控制主要影響因素及控制酶（酶（enzyme）酶的應(yīng)用l臨床診斷酶學(xué)產(chǎn)生至今已有100年的歷史。l用于診斷的酶類已超過100多種，常用的數(shù)十種。l酶測(cè)定約占目前臨床化學(xué)總工作量的1/4到1/2。酶的概念l是一種由活細(xì)胞產(chǎn)生，具有高度專一性、高度催化活性的特殊蛋白質(zhì)，又稱為生物催化劑。生物催化劑。l酶的測(cè)定方法分為絕對(duì)定量法和相對(duì)定量法相對(duì)定量法兩大類，以后者為主。l酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力稱為酶活性酶活性（activity）。l酶活性濃度的測(cè)定受許多因素的影響酶活性濃度的測(cè)定受許多因素的影響。酶活性濃度測(cè)定的主要影響因酶活性濃度測(cè)定的主要影響因素素1.

2、1. 標(biāo)本及標(biāo)本采集和處理因素標(biāo)本及標(biāo)本采集和處理因素2. 2. 試劑及方法學(xué)因素試劑及方法學(xué)因素3. 3. 儀器因素的影響儀器因素的影響4. 4. 測(cè)定條件與參數(shù)設(shè)置測(cè)定條件與參數(shù)設(shè)置1.1.標(biāo)本及標(biāo)本采集和處理因素標(biāo)本及標(biāo)本采集和處理因素的影響及控制的影響及控制1.1.標(biāo)本及采集和處理的影響因素標(biāo)本及采集和處理的影響因素1.1 1.1 溶血溶血1.2 1.2 抗凝劑抗凝劑1.3 1.3 溫度溫度1.4 1.4 空氣與光線空氣與光線1.5 1.5 標(biāo)本副反應(yīng)標(biāo)本副反應(yīng)1.6 1.6 酶蛋白濃度酶蛋白濃度1.7 1.7 其他其他1.1 1.1 溶血溶血 最重要的影響是RBC內(nèi)酶的大量釋出。l大

3、部分酶在細(xì)胞內(nèi)外濃度差異明顯，且其活性遠(yuǎn)高于血清；l如RBC內(nèi)的LD、AST和ALT活性分別較血清中高100、15和7倍左右。RBC釋放的Hb在300500nm可見光波段能使吸光度值明顯升高，干擾分光光度計(jì)的測(cè)定。1.1 Hb1.1 Hb的吸光度曲線的吸光度曲線1.1 1.1 溶血影響的控制溶血影響的控制減少溶血l體外溶血可通過實(shí)施樣品制備技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化加以克服；l分清體內(nèi)溶血與體外溶血。減少溶血的干擾l可通過設(shè)置樣品對(duì)照，或使用雙波長比色、連續(xù)監(jiān)測(cè)法以及改進(jìn)商品試劑等措施，克服對(duì)分光光度分析的影響。l應(yīng)用血清(溶血)指數(shù)直接判斷溶血程度。1.1 注意注意: RBC中酶的干擾中酶的干擾不僅表現(xiàn)在

4、溶血影響上，采血后如不及時(shí)將血清和血凝塊分離，血細(xì)胞中酶同樣可以透過細(xì)胞膜進(jìn)入血清，所以，靜脈采血后，必須在12h內(nèi)及時(shí)離心，將血清與血細(xì)胞、血凝塊分離，以免引起誤差。 1.2 1.2 抗凝劑抗凝劑臨床上除非測(cè)定與凝血或纖溶有關(guān)的酶，一一般都應(yīng)以血清作為首選測(cè)定標(biāo)本般都應(yīng)以血清作為首選測(cè)定標(biāo)本。大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性，lEDTA、草酸鹽和檸檬酸鹽等抗凝劑，它們?yōu)榻饘匐x子螯合劑；l在去除Ca2+同時(shí)也去除其中Mg2+、Mn2+等離子，Ca2+是AMY的激活劑，Mg2+是ALP、CK和5-核苷酸酶（5-NA）的激活劑激活劑。1.2 1.2 肝素肝素是一種粘多糖，是對(duì)酶活性影響最小的抗

5、凝劑，對(duì)ALT、AST、CK、LD和ACP無影響，適于急診時(shí)迅速分離血漿進(jìn)行測(cè)定。1.3 1.3 溫度溫度由于血清清蛋白對(duì)酶蛋白有穩(wěn)定作用，如無細(xì)菌污染，某些酶（如AST、-GT和ALP等）可在室溫保存13天活性不受影響。有些酶極不穩(wěn)定，如血清前列腺ACP，在37放置1h，活性可下降50%。1.3 貯存不同室溫體液酶的穩(wěn)定性貯存不同室溫體液酶的穩(wěn)定性（活性變化小于（活性變化小于10%） 酶酶室溫（室溫（2525） 冷藏（冷藏（0 044）冰凍（冰凍（-25-25）LD1周13d13d-GT2d1周1月ALD2d2d不穩(wěn)定*ALT2d5d不穩(wěn)定*AST3d1周1月CK1周1周1月ChE1周1周1

6、周ALP23d23d1月ACP4h3d#3d#5-NT24h1周3月AMY1月7月2月LPS1周3周3周*酶不耐融化；與同工酶類型有關(guān)；標(biāo)本未酸化；#標(biāo)本加枸櫞酸或醋酸至pH 51.3 1.3 溫度影響的控制溫度影響的控制及時(shí)檢測(cè)低溫貯存l大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，因此當(dāng)天不能測(cè)定時(shí)，應(yīng)在血清分離后置冰箱中冷藏。1.4 1.4 空氣與光線空氣與光線血清置于空氣空氣中時(shí)，l血中CO2喪失極快，pH可在15min內(nèi)由7.4增至8.0，從而使對(duì)堿性環(huán)境敏感的ACP活性迅速下降。某些酶易受光線光線破壞，lCK可因吸收藍(lán)光而引起酶發(fā)生不可逆地失活，其失活程度與暴光時(shí)間的長短成正比。1.5 1.5 副反應(yīng)

7、副反應(yīng)副反應(yīng)是指酶促反應(yīng)體系中，除待測(cè)酶反應(yīng)外，其他非待測(cè)酶和物質(zhì)引起的干擾待測(cè)酶測(cè)定的反應(yīng)。 NAD（P）H是目前使用最多的指示反應(yīng)物質(zhì)。l體內(nèi)存在數(shù)以百計(jì)的氧化還原酶，它們的輔酶很多是一致的。l若存在內(nèi)源性代謝物，必然會(huì)相互干擾。1.5 1.5 副反應(yīng)副反應(yīng)( (酶偶聯(lián)法測(cè)酶偶聯(lián)法測(cè)ALT)ALT)由于反應(yīng)體系中含有大量NADH和LD，可與血液標(biāo)本中所含丙酮酸反應(yīng)，引起340nm波長處吸光度下降，從而引起ALT活性測(cè)定誤差。ALT活性測(cè)定的反應(yīng)式如下：丙酮酸谷氨酸氧代戊二酸丙氨酸 LLLALT2NADLHNADHLLD乳酸丙酮酸1.5 1.5 副反應(yīng)的控制副反應(yīng)的控制可通過加入副反應(yīng)抑制劑

8、，或?qū)悠愤M(jìn)行預(yù)處理等方法給予排除。雙試劑底物啟動(dòng)模式雙試劑底物啟動(dòng)模式因不增加成本、不耗費(fèi)時(shí)間是最經(jīng)濟(jì)的方法。1.6 1.6 酶蛋白濃度酶蛋白濃度酶蛋白在低濃度時(shí)易失活低濃度時(shí)易失活，可能是亞基易解離、易吸附于容器上和易發(fā)生表面變性之故。酶蛋白在高濃度時(shí)較穩(wěn)定高濃度時(shí)較穩(wěn)定，但活性過高超過檢測(cè)儀器的線性范圍時(shí)，需將樣品進(jìn)行稀釋或減少樣品用量后再行測(cè)定。樣品稀釋后所測(cè)得的活性常偏高，可能與抑制劑被稀釋有關(guān)。1.7 1.7 其他其他樣本器皿的質(zhì)地和潔凈度，采血部位，以及血清中過量的膽紅素、脂質(zhì)，樣品制備過程中的振搖等，均可引起酶活性改變。季節(jié)l冬季氣溫低，血液凝固慢，血清分離時(shí)間延長，可引起血細(xì)

9、胞內(nèi)酶釋至血清，加上血清與空氣長時(shí)間接觸，可使某些抑制劑遭到破壞，故冬季測(cè)定LD的活性較夏季高。2. 2. 試劑及方法學(xué)因素試劑及方法學(xué)因素的影響及控制的影響及控制2. 2. 試劑及方法學(xué)的影響因素試劑及方法學(xué)的影響因素酶的測(cè)定大多使用商品試劑盒酶的測(cè)定大多使用商品試劑盒l(wèi)不同廠家酶試劑盒的測(cè)定原理、試劑配方（包括緩沖液、底物、添加劑等）、產(chǎn)品質(zhì)量、技術(shù)含量等常有區(qū)別。常見的影響因素常見的影響因素l2.1 定時(shí)法與連續(xù)監(jiān)測(cè)法l2.2 檢測(cè)底物或檢測(cè)產(chǎn)物l2.3 底物啟動(dòng)模式與樣品啟動(dòng)模式l2.4 正向反應(yīng)與逆向反應(yīng)l2.5 試劑的干擾作用2. 2. 影響因素的控制影響因素的控制選購試劑盒時(shí)選購

10、試劑盒時(shí)l要仔細(xì)閱讀試劑盒說明書；l了解試劑盒所用方法的原理、試劑配方等；l選擇IFCC或中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)推薦的常規(guī)方法，或選擇公認(rèn)的測(cè)定方法。使用時(shí)使用時(shí)l定期對(duì)試劑盒的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)；l準(zhǔn)確性、重復(fù)性、穩(wěn)定性好，線性范圍寬；l正向型試劑空白吸光度低、反向型試劑空白吸光度高、試劑空白速率低、瓶間差小等。 2. 2. 酶活性測(cè)定的原理酶活性測(cè)定的原理酶活性與速度的關(guān)系 *酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線2.1 2.1 定時(shí)法與連續(xù)監(jiān)測(cè)法的選用定時(shí)法與連續(xù)監(jiān)測(cè)法的選用在條件許可的情況下，應(yīng)盡可能全部采用連續(xù)應(yīng)盡可能全部采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法監(jiān)測(cè)法，少用或不用定時(shí)法。l連續(xù)監(jiān)測(cè)法可以選擇線性期的反應(yīng)速度來計(jì)算酶活性，測(cè)定

11、結(jié)果可靠，是首選的方法。l但該方法儀器要求相對(duì)較高。 在基層單位，某些酶采用定時(shí)法測(cè)定也可以得到比較準(zhǔn)確的結(jié)果。lALP酶活性的測(cè)定，如加做樣品空白，兩法的結(jié)果準(zhǔn)確性相當(dāng)。2.1 2.1 連續(xù)監(jiān)測(cè)法與定時(shí)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法與定時(shí)法的酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線的酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線2.2 2.2 檢測(cè)底物或檢測(cè)產(chǎn)物的選擇檢測(cè)底物或檢測(cè)產(chǎn)物的選擇取決于哪個(gè)更方便，測(cè)定的結(jié)果更準(zhǔn)確。通常原則通常原則是選擇測(cè)定產(chǎn)物的生成量而不是底是選擇測(cè)定產(chǎn)物的生成量而不是底物的消耗量。物的消耗量。l反應(yīng)時(shí)底物濃度高，反應(yīng)時(shí)間短；l這也是淀粉酶的碘淀粉比色法逐漸被色素源底物所取代的原因之一。l除部分測(cè)定NADH減少可以看成測(cè)底物

12、的消耗量外，已很少采用測(cè)定底物消耗量的項(xiàng)目。2.2 2.2 檢測(cè)底物或檢測(cè)產(chǎn)物的選擇檢測(cè)底物或檢測(cè)產(chǎn)物的選擇底物與產(chǎn)物底物與產(chǎn)物舉例舉例lALT測(cè)定（賴氏法測(cè)定（賴氏法-定時(shí)法）定時(shí)法）L-丙氨酸 + -酮戊二酸 -丙酮酸 + L-谷氨酸-丙酮酸 + 2，4-二硝基苯肼 2，4-二硝基苯腙l (紅棕色，=505nm)lALT測(cè)定（連續(xù)監(jiān)測(cè)法）測(cè)定（連續(xù)監(jiān)測(cè)法）L-丙氨酸 + -酮戊二酸 -丙酮酸 + L-谷氨酸 NADLHNADHLLD乳酸丙酮酸CBAEiEx ALT堿性條件下 ALT2.3 2.3 底物啟動(dòng)模式與樣品啟動(dòng)模式底物啟動(dòng)模式與樣品啟動(dòng)模式底物啟動(dòng)模式（底物啟動(dòng)模式（IFCCIFC

13、C推薦采用）推薦采用）。l指樣品先與缺乏某種底物的試劑1預(yù)孵育一定時(shí)間后，再加入內(nèi)這種底物的試劑2，開始啟動(dòng)樣品中的待測(cè)酶的酶促反應(yīng)。l好處是在待測(cè)酶酶促反應(yīng)開始之前，可以除去某些干擾物，包括內(nèi)源性干擾物和外源性干擾物。l這種模式需要雙試劑劑型。樣品啟動(dòng)模式。l指反應(yīng)所需的試劑先混合在一起，然后加入樣品，依靠樣品中的待測(cè)酶來啟動(dòng)酶促反應(yīng)；l只是在延滯期去除部分干擾物。l這種模式可采用單一試劑劑型。2.3 2.3 底物啟動(dòng)模式與樣品啟動(dòng)模式底物啟動(dòng)模式與樣品啟動(dòng)模式雙試劑與單試劑酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線2.3 2.3 需要注意需要注意某些雙試劑劑型是基于試劑穩(wěn)定性考慮，并沒有將底物單獨(dú)作為第二試劑，

14、也起不到消除內(nèi)源性干擾的作用。2.4 2.4 正向反應(yīng)與逆向反應(yīng)正向反應(yīng)與逆向反應(yīng) 一般根據(jù)測(cè)定底物或產(chǎn)物的難易程度來決定。除原則上原則上選擇對(duì)底物親和力大，酶轉(zhuǎn)換率高的方向外，還應(yīng)考慮內(nèi)源性干擾、底物價(jià)格和穩(wěn)定性等諸多因素。例如，lCK的測(cè)定普遍采用逆向反應(yīng)，因其逆向反應(yīng)是正向反應(yīng)的6倍，而且受影響因素少。2.4 2.4 正向反應(yīng)與逆向反應(yīng)正向反應(yīng)與逆向反應(yīng)LDHLDH測(cè)定的選擇目前尚有爭(zhēng)議測(cè)定的選擇目前尚有爭(zhēng)議。國內(nèi)多采用正向反應(yīng)（LP），與IFCC在2001年發(fā)表的操作手冊(cè)一致。l正向反應(yīng)有利于LD1的活性表達(dá)，同時(shí)試劑成本低廉，穩(wěn)定性好。國外常用方法曾是逆向反應(yīng)（PL），l反應(yīng)速度是正

15、向的3倍，成本也較低。HNADHNADLLD丙酮酸乳酸NADLHNADHLLD乳酸丙酮酸2.5 2.5 檢測(cè)試劑的干擾作用檢測(cè)試劑的干擾作用試劑酶的污染。l組織勻漿中往往含有NADH-細(xì)胞色素C還原酶，它將干擾各種還原酶的測(cè)定。底物的非酶反應(yīng)。l很多硝基酚的酯類衍生物在水溶液中不穩(wěn)定，放置一段時(shí)間可自行水解釋放出硝基酚。l如堿性磷酸酶（ALP）測(cè)定 解決的方法l是通過試劑空白管檢出并加以校正。l選購IFCC或中華檢驗(yàn)學(xué)會(huì)推薦的方法和質(zhì)量好的試劑。3. 3. 儀器因素的影響及控制儀器因素的影響及控制3 3 儀器的影響因素儀器的影響因素加樣系統(tǒng)加樣系統(tǒng)l加樣的準(zhǔn)確性、重復(fù)性和攜帶污染；反應(yīng)系統(tǒng)反應(yīng)

16、系統(tǒng)l反應(yīng)杯的形狀、表面和攜帶污染；l反應(yīng)杯和反應(yīng)槽溫度的準(zhǔn)確性、波動(dòng)范圍；l攪拌和清洗機(jī)構(gòu)的效果和攜帶污染；檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)l光度計(jì)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、線性范圍和雜散光等均會(huì)造成結(jié)果的偏差。3 3 儀器影響因素的控制儀器影響因素的控制在日常工作中，除常規(guī)做好儀器和設(shè)備的正確使用和維護(hù)外，重點(diǎn)應(yīng)注意儀器的校準(zhǔn)儀器的校準(zhǔn)問題。 3.1 3.1 酶活性濃度的計(jì)算公式酶活性濃度的計(jì)算公式摩爾吸光系數(shù) 和系數(shù) K K 均為常數(shù)， 和 K K受儀器諸多因素的影響，l如波長的準(zhǔn)確性、半波寬的大小、比色池光徑及磨損與清潔度、溫控的準(zhǔn)確性、加樣系統(tǒng)狀況等。 和和 K K 可用校準(zhǔn)物定期校正可用校準(zhǔn)物定期校正。K

17、ALUmin/LvVK6103.2 3.2 校準(zhǔn)物校準(zhǔn)物可用作酶活性測(cè)定用的校準(zhǔn)物分兩類。一類是產(chǎn)物的基準(zhǔn)物質(zhì)產(chǎn)物的基準(zhǔn)物質(zhì)，l如對(duì)硝基酚、對(duì)硝基苯胺等，l用于校準(zhǔn)儀器的 值（摩爾吸光系數(shù)）。另一類稱酶校準(zhǔn)物酶校準(zhǔn)物（Enzyme calibrator），l多是用人血清或動(dòng)物血清作介質(zhì)，與測(cè)定標(biāo)本比較接近，l用于校準(zhǔn)儀器的 K K 值（酶活性濃度定量系數(shù)）。3.2 3.2 校準(zhǔn)物校準(zhǔn)物國際上已經(jīng)有經(jīng)IFCC認(rèn)可的CRM酶參考物。各試劑供應(yīng)商所提供的酶校正物的定值應(yīng)可溯源至CRM酶參考物。常規(guī)工作一般選用用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的工作校準(zhǔn)品。目前，臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多的是德國寶靈曼公司的校準(zhǔn)品(c.f.

18、a.s)。3.3 3.3 的校準(zhǔn)（的校準(zhǔn)（340 nm340 nm波長）波長）NAD(P)H是酶活性測(cè)定中常用的指示輔酶。在340nm 的NAD(P)H的 ，可用葡萄糖己糖激酶法實(shí)測(cè)、計(jì)算其實(shí)測(cè)的。NAD(P)H的為6220。如果6 0006600為不合格，則需找維修部檢查。注：注：干涉濾光片者需校準(zhǔn)，光柵式可直接使用文獻(xiàn)或試劑盒說明書的數(shù)值。3.3 3.3 的校準(zhǔn)（的校準(zhǔn)（405 nm405 nm波長）波長）最常用的色素原為對(duì)硝基苯酚對(duì)硝基苯酚等。對(duì)硝基苯酚在405 nm的 ，可用ALP測(cè)定試劑的緩沖液作為測(cè)定試劑，對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)液作為血清標(biāo)本，實(shí)際測(cè)定計(jì)算值。對(duì)硝基苯酚的為18700。如果

19、值偏差過大，則需找維修部檢查。3.4 K3.4 K的校準(zhǔn)（公式計(jì)算法）的校準(zhǔn)（公式計(jì)算法）將上述實(shí)測(cè)值代入K值計(jì)算公式得到校準(zhǔn)K值外。LvVK6103.4 K3.4 K的校準(zhǔn)（酶校準(zhǔn)物）的校準(zhǔn)（酶校準(zhǔn)物）使用公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物酶校準(zhǔn)物對(duì)K值進(jìn)行校準(zhǔn)，它是國際上目前酶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化新途徑。使用酶校準(zhǔn)物的優(yōu)點(diǎn)，l除具有實(shí)測(cè)值換算出的校準(zhǔn)K值所具有的一切優(yōu)點(diǎn)外，l還可促進(jìn)方法間的一致性和增加常規(guī)酶方法的可靠性，可使不同實(shí)驗(yàn)室之間的測(cè)定結(jié)果相對(duì)統(tǒng)一。 3.4 K3.4 K的校準(zhǔn)（頻率）的校準(zhǔn)（頻率）最好（低）每半年進(jìn)行一次酶活性的校準(zhǔn)。l儀器在使用過程中，濾光片、加樣系統(tǒng)的精度都可能發(fā)生變化，光學(xué)系統(tǒng)的燈泡、

20、光電轉(zhuǎn)換元件的老化、靈敏度變化等，都會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的偏差。但日常工作中，遇到下列情況時(shí)遇到下列情況時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)：l試劑盒改變廠家，或者更換了批號(hào)；l儀器性能改變，如進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件；l質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移，或者超出實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識(shí)別和糾正問題時(shí)。 4. 4. 測(cè)定條件與參數(shù)設(shè)置測(cè)定條件與參數(shù)設(shè)置4.1 4.1 最適條件包括最適條件包括合適的底物底物和最適底物濃度；理想的緩沖液緩沖液種類和最適離子強(qiáng)度；反應(yīng)液的最適pHpH；最適反應(yīng)溫度溫度；合適的輔因子輔因子、激活劑濃度；若是酶偶聯(lián)反應(yīng)，還需要確定指示酶和輔助酶指示酶和輔助酶的用

21、量；合理的測(cè)定時(shí)間測(cè)定時(shí)間，包括延滯期盡量短暫，有足夠的線性期；合適的樣品與反應(yīng)試劑的比例試劑的比例；足夠的檢測(cè)范圍檢測(cè)范圍；盡量去除各種抑制劑等。4.2 4.2 反應(yīng)溫度反應(yīng)溫度目前常規(guī)實(shí)驗(yàn)室越來越多的使用3737，這更多地是從實(shí)際工作方便來考慮。1986年以前，IFCC推薦酶活性測(cè)定的溫度是30，純鎵的熔點(diǎn)為29.77，鎵作為此溫度的基準(zhǔn)物質(zhì)，保證了測(cè)定儀器在30的高度準(zhǔn)確性。2001年，IFCC正式發(fā)表了“37下檢測(cè)酶催化活性濃度的IFCC一級(jí)參考方法操作手冊(cè)和參考制品認(rèn)可系統(tǒng)”，包括CK、LD、ALT、AST、GGT五個(gè)酶在內(nèi)。4.2 4.2 反應(yīng)溫度反應(yīng)溫度酶活性與酶促反應(yīng)溫度的關(guān)系

22、4.3 4.3 延滯期、線性期的確定延滯期、線性期的確定延滯期的確定l延滯期可以因酶在樣品中所存在的介質(zhì)不同而略有差別，原因可能是存在內(nèi)源性干擾物，也可能存在一些抑制劑。l確定原則是多觀察濃度不等、病理情況不同的標(biāo)本，選擇延滯期最長者作為確定值。線性期的確定l離不開酶濃度的可測(cè)上限，因?yàn)槊笣舛仍礁?，在同樣時(shí)間內(nèi)消耗底物越多，產(chǎn)生產(chǎn)物越多，底物的不足和產(chǎn)物的抑制將導(dǎo)致非線性期的提前到來。4.3 4.3 延滯期、線性期的確定延滯期、線性期的確定線性期與非線性度的大小有關(guān)，沒有絕對(duì)意義上的線性期，線性期是以指定的非線性度作為判斷基礎(chǔ)的。線性期如何確定呢？主要看讀數(shù)次數(shù)和讀數(shù)間隔來決定，為了計(jì)算非線性度，按最小二乘法的計(jì)算要求，讀數(shù)次數(shù)應(yīng)不少于讀數(shù)次數(shù)應(yīng)不少于4 4次，讀數(shù)間隔按一般儀器要次，讀數(shù)間隔按一般儀器要求求3030秒就足夠了，線性期在秒就足夠了，線性期在2 2分鐘以上分鐘以上即可。中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)規(guī)定酶活性測(cè)定要求線性期不短于2.5分鐘。若規(guī)定線性期不短于2.5分鐘可以測(cè)得酶活性的最高濃度就是該法的測(cè)定上限。4.3 4.3 延滯期、線性期的確定