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1、會計學1大實驗三米曲霉固體發(fā)酵制曲大實驗三米曲霉固體發(fā)酵制曲1、學習固體發(fā)酵工藝 2、制備米曲霉固體曲,測定蛋白酶活力 實驗目的要求第1頁/共15頁實 驗 原 理第2頁/共15頁實 驗 步 驟1、制備麩皮固體培養(yǎng)基:25g麩皮,加15ml水(加水量40%60%),拌勻;裝茄瓶。 2、滅菌:Mpa 滅菌2030min,冷卻至室溫。 第3頁/共15頁 已培養(yǎng)好的米曲霉孢子斜面一支,加入約10ml無菌水,洗下孢子,制成孢子懸液。 注意:勿使孢子飄落實驗室 3、制備孢子懸液菌種:實驗步驟 (continued)第4頁/共15頁實驗步驟 (continued)每茄瓶加入孢子懸液2ml,抖動茄瓶,使孢子懸

2、液與麩皮培養(yǎng)基混勻。 4、接種:第5頁/共15頁28培養(yǎng)4天其間,于接種2448h左右抖動茄瓶翻曲一次觀察記錄菌絲生長及孢子形成情況5、培養(yǎng):實驗步驟 (continued)第6頁/共15頁另一次實驗第7頁/共15頁實驗步驟 (continued)6、蛋白酶活力測定: 1)粗酶液制備:向一茄瓶中加入無菌水約100ml,浸泡固體曲1h;過濾得粗酶液。 2)倒平板:融化酪蛋白明膠雙基質固體培養(yǎng)基,每人倒一平板。 第8頁/共15頁實驗步驟 (continued)3)打孔:打孔器經酒精燃燒滅菌后,每平板打13孔,并在酒精燈火焰上稍稍加熱打孔處,使孔周圍的培養(yǎng)基微融,然后平放冷卻。 4)加樣:往孔內加入

3、粗酶液適量(約100ul),可設對照。 第9頁/共15頁實驗步驟 (continued)5)培養(yǎng)(反應):將加樣后的平板小心平端放入30培養(yǎng)箱,放置20小時左右。 6)觀察結果:可直接觀察透明圈有無、測定透明圈直徑;也可向平板滴加少量10%三氯乙酸,以增強觀察效果。 第10頁/共15頁實驗結果 第11頁/共15頁實驗報告1、實驗原理、方法步驟、結果及分析 2、思考題第12頁/共15頁準 備:1、10%三氯乙酸 2、雙基質固體培養(yǎng)基 (以對應的L-R組配制,每L-R組配400ml,分裝3瓶) 配方:10g干酪素,10g明膠,18g瓊脂,1000ml, pH7.0 配法:干酪素先用N NaOH溶解,倒入熱水中加熱攪拌至完全溶解;適量1N HCl調至;加入明膠和瓊脂,繼續(xù)加熱至完全融化。 第13頁/共15頁附:大實驗四“蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)殺蟲劑液體搖瓶發(fā)酵”方案設計 研究內容:1)培養(yǎng)基組成對芽孢形成的影響 2)通氣狀況對芽孢形成的影響 以實驗小組為單

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