實驗四肌肉組織氨基移換作用---紙層析ppt課件

1、 肌肉組織氨基移換作用 紙層析法一、實驗目的一、實驗目的1. 了解氨基移換作用的原理。了解氨基移換作用的原理。2. 熟習紙層析法的根本原理。熟習紙層析法的根本原理。3. 掌握紙層析法分別鑒定氨基酸的方法。掌握紙層析法分別鑒定氨基酸的方法。n 氨基移換作用轉氨基作用氨基移換作用轉氨基作用在轉氨酶的作用下，某一氨基酸去掉在轉氨酶的作用下，某一氨基酸去掉- -氨基生成相氨基生成相應的應的- -酮酸，而另一種酮酸，而另一種- -酮酸得到此氨基生成相應的氨基酮酸得到此氨基生成相應的氨基酸的過程。酸的過程。二、實驗原理二、實驗原理n 人體內最重要的兩種轉氨酶：人體內最重要的兩種轉氨酶：谷丙轉氨酶谷丙轉氨酶

2、GPT/丙氨酸轉氨酶丙氨酸轉氨酶ALT 谷草轉氨酶谷草轉氨酶GOT/天冬氨酸轉氨酶天冬氨酸轉氨酶AST谷氨酸谷氨酸 +丙酮酸丙酮酸-酮戊二酸酮戊二酸 +丙氨酸丙氨酸GPT谷氨酸谷氨酸 +草酰乙酸草酰乙酸 -酮戊二酸酮戊二酸 +天冬氨酸天冬氨酸 GOT正常人各組織中正常人各組織中GPT及及GOT 活性活性 (單位單位/克濕組織克濕組織)n血清轉氨酶活性，臨床上可作為疾病診斷和預血清轉氨酶活性，臨床上可作為疾病診斷和預后的目的之一。后的目的之一。組組 織織 GPT GOT組組 織織 GPT GOT 肝肝 44000 142000胰胰 腺腺 2000 28000 腎腎 19000 91000脾脾 1

3、200 14000 心心 7100 156000肺肺 700 10000 骨骼肌骨骼肌 4800 99000血清血清 16 20COOH COOH CH2CH2C=OHCNH2COOHCH3COOHCOOHCH2CH2CHNH2COOHCH3C=O ALT谷氨酸谷氨酸 丙酮酸丙酮酸-酮戊二酸酮戊二酸 丙氨酸丙氨酸2. 層析 層析系統(tǒng)通常都有兩個相組成：固定相和流動相。層析系統(tǒng)通常都有兩個相組成：固定相和流動相?；旌衔镌趯游鱿到y(tǒng)中的分別決議于該混合物的組分混合物在層析系統(tǒng)中的分別決議于該混合物的組分在這兩相中的分配情況，普通用分配系數(shù)來描畫。在這兩相中的分配情況，普通用分配系數(shù)來描畫。常用的分配

4、層析包括柱層析、紙層析、薄層層析。常用的分配層析包括柱層析、紙層析、薄層層析。紙層析法紙層析法固定相：吸附在濾紙纖維之間的水分固定相：吸附在濾紙纖維之間的水分流動相：層析液水飽和酚流動相：層析液水飽和酚分別原理：分別原理：利用混合物各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)利用混合物各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)差別而分別差別而分別谷氨酸：親水性氨基酸谷氨酸：親水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸3. 顯色反響顯色反響茚三酮與茚三酮與- -氨基酸反響生成紫紅色化合物氨基酸反響生成紫紅色化合物相對遷移率相對遷移率Rf三、實驗步驟三、實驗步驟1、酶液的制備、酶液的制備2、氨基移換反響、氨基移

5、換反響 加入物（加入物（ml）對照管對照管測定管測定管 肌勻漿肌勻漿10滴滴10滴滴煮沸煮沸 5 min37 5 min0.1 mol/L丙氨酸溶液丙氨酸溶液0.5 ml0.5 ml0.1 mol/L-酮戊二酸溶液酮戊二酸溶液0.5 ml0.5 ml0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液1.5 ml1.5 ml混勻，混勻， 37 50 min 煮沸煮沸5 min3 3、層析、層析圓濾紙上標志圓濾紙上標志點樣點樣制造濾紙芯制造濾紙芯濾紙芯插入圓濾紙濾紙芯插入圓濾紙組裝層析安裝組裝層析安裝4 4、顯色、顯色把層析后的濾紙取下，吹風機吹干后，用噴霧器把層析后的濾紙取下，吹風機吹干后，用噴霧器均勻噴灑均勻噴灑0.50.5茚三酮溶液，再用吹風