苯甲酸鈉急性毒性試驗

1、安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院本科畢業(yè)論文苯甲酸鈉的急性毒性試驗食品質(zhì)量與安全111:王文靜學(xué)號：2302110120摘要:苯甲酸鈉的急性毒性試驗?zāi)康模焊鶕?jù)實驗動物小鼠的苯甲酸鈉的致死劑量水平初步估計其對人類的可能毒害的危險性。為了對苯甲酸鈉毒性性質(zhì)的進一步了解， 找出其劑量一反應(yīng)和劑量一效 應(yīng)的關(guān)系。方法：經(jīng)查閱資料得小鼠的 LD50值為2512mg/kg ,通過霍恩式法設(shè)計出劑量組。通過經(jīng)口灌胃方式染毒，觀察小鼠中毒癥狀。結(jié)論：苯甲酸鈉毒性為3級，屬于低毒物質(zhì)。中毒癥狀出現(xiàn)的時間與灌胃劑量存在直接線性關(guān)系：劑量越大，死亡就越快，死亡率就越高.。關(guān)鍵字：苯甲酸鈉急性毒性LD50值 灌胃染毒1.引言

2、1.1苯甲酸鈉性質(zhì)：苯甲酸鈉是酸性防腐劑，一般用在酸性條件下，在酸性條件下能轉(zhuǎn) 化為有活性的苯甲酸，因此防腐的機理同苯甲酸。其防腐功能在pH為2.5 4.0時最佳。在堿性介質(zhì)中則無殺菌和抑菌作用。由丁苯甲酸鈉的水溶性遠大丁苯甲酸，在水介體系中 更容易溶解和分散，而且在空氣中穩(wěn)定，因此比苯甲酸常用得多。苯甲酸鈉親油性較大， 易穿透細胞膜進入細胞體內(nèi)，干擾細胞膜的通透性，抑制細胞膜對氨基酸的吸收；進入細 胞體內(nèi)電離酸化細胞內(nèi)的堿儲，并抑制細胞的呼吸酶系的活性，阻止乙酰輔酶A縮合反應(yīng), 從而起到食品防腐的目的。1.2苯甲酸鈉的作用及限量：苯甲酸鈉是很常用的食品防腐劑，有防止變質(zhì)發(fā)酸、延 長保質(zhì)期的效

3、果。在飲料、罐頭、果汁、冷食、醬油、醋等食品領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用，也可 作為飲料的防腐劑。苯甲酸鈉低蠹。近年來對其蠹性的顧慮使得它的應(yīng)用受限，對它的使 用作出限制。應(yīng)用在食品中的限量為 0.1%,不允許用丁食用肉類和維生素 B1中?？蓞⒁?苯甲酸。苯甲酸鈉的ADI值05mg/kg （即每人每天每千克體重可允許攝入 0 5毫克）， 相當(dāng)丁 60kg成人的終身攝入無蠹作用劑量是每天 300mg中國規(guī)定苯甲酸鈉在飲料中的最 大使用量為0. 2g/kg，即一個成年人每天喝一升飲料，苯甲酸鈉為 200mg比國際規(guī)定的 ADI值還低。1.3急性蠹性試驗設(shè)計：本研究采用小鼠經(jīng)口染蠹，急性蠹性試驗主要測定半數(shù)致死

4、 量，觀察中蠹表現(xiàn)，確定蠹作用方式，為業(yè)急性和慢性試驗的觀察指標及劑量分組提供參 考依據(jù)。本試驗采用灌胃染蠹是將配成一定濃度梯度的溶液，裝入灌胃針，注入受試小鼠 的胃內(nèi)。實驗所選小鼠體重差別不大，所以受試小鼠一次灌胃體積在0.4ml/只。急性蠹性中蠹重點觀察癥狀如下：器官系統(tǒng)觀察及檢驗項目中毒后反應(yīng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能及軀體運動行為與動作體位、叫聲、活動異常，不安或臥倒。振顫、運動失調(diào)、麻痹、驚覺,對刺激反應(yīng)易興奮，感覺遲鈍或過敏。肌肉張力松弛或緊張自主神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔放大或縮小腺體分泌垂涎，流淚，出汗2.呼吸系統(tǒng)鼻鼻孔溢出液體材呼吸表現(xiàn)呼吸徐緩或過速，困難或衰竭- 料與方法2.1實驗材料：小白鼠16

5、只（室溫，自由飲水?dāng)z食），鼠籠，鼠糧。2.2儀器與試劑儀器：灌胃針，灑精棉，100ml容量瓶若干，燒杯，分析天平。試劑：苯甲酸鈉150mg/ml,蒸僻水。2.3 實驗動物處理取16只小鼠，隨機分成A、B、C、D四組，每組四只小鼠。分別稱取每只小鼠重量， 記錄并做標記，分別為頭部，前腿，腹部，后腿。將試驗小鼠將分組后的小鼠置丁同一籠 中喂養(yǎng)，禁食一夜，飲水正常。2.4實驗設(shè)四個劑量組濃度將查閱相關(guān)資料得到的苯甲酸鈉 LD50值安排在在第二組與第三組之間，根據(jù)霍恩式法 計算出各小組濃度如下：1.00*10 3mg/kg、2.15*10 3mg/kg、4.64*10 3mg/kg、10.00*10

6、3mg/kg ,且每個劑量組濃度組 距為2.15倍。禁食一夜后對小鼠進行灌胃操作。各組小鼠灌胃水平組別ABCD灌胃水平1.00*10 3mg/kg2.15*10 3mg/kg4.64*10 3mg/kg10.00*10 3mg/kg小鼠灌胃死亡前后體重變化體重/g 芝別標記部位一AA'BB，CC，DD頭部25.222.329.128.323.207前腿26.721.726.324.1928.022.56腹部22.120.827.525.2626.824.55后退28.320.725.923.4829.727.81按上表對小鼠進行分次灌胃，灌胃前用灑精棉對灌胃針進行消蠹。灌胃結(jié)束之后2-

7、3h 可以進行喂食。灌胃完成后，觀察小鼠是否有反常癥狀以及死亡情況并記錄。2.5觀察指標觀察小鼠的異常癥狀及死亡數(shù)急性毒性重點觀察的中毒癥狀記錄表觀察時間現(xiàn)象記錄第一組(A第二組(B)第三組(C)第四組(D)11.27上午(灌胃 實驗結(jié)束即 計)時各鼠反應(yīng)降低，活 動量減少，飲食量減少，身體抽搐各鼠反應(yīng)降低，活 動量減少，飲食量減少，身體抽搐各鼠反應(yīng)降低，活 動量減少，飲食量減少，身體抽搐各鼠反應(yīng)降低，活 動量減少，飲食量減少，身體抽搐下 午各鼠反應(yīng)降低，活 動量減少，飲食量減少，身體抽搐各鼠反應(yīng)降低，活 動量減少，飲食量減少，身體抽搐各鼠反應(yīng)降低，活 動失調(diào)，飲食量少，身體抽搐各鼠反應(yīng)降低，

8、活 動失調(diào)，飲食量少，身體抽搐11.28上 午各鼠活動減少，身體抽搐，飲食正常各鼠活動減少，身體抽搐，飲食正常死亡三只，肺部破 裂，心臟變黑，腎 臟，肝臟腫大 另外一只活動少， 身體抽搐，飲食正 常全部死亡肺部破裂心臟變黑腎臟，肝臟腫大下 午各鼠活動減少，飲 食正常各鼠活動減少，飲 食正常小鼠活動減少，飲 食正常11.29上 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常下 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常11.30上 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常下 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常12.1上

9、 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常下 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常12.2上 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常下 午各鼠活動，飲食均正常各鼠活動，飲食均正常小鼠活動，飲食正常3. 實驗結(jié)果如上觀察記錄表，經(jīng)第一次灌胃染蠹 23h后，四組(A,B,C,D)小鼠均反應(yīng)降低，運動量 減少，進食量減少，身體抽搐。在 24h后給藥劑量大的小鼠第三，四組小鼠剛開始異?？?奮，運動量增大，呼吸急促而后精神萎靡，行動遲緩，臥倒，蜷縮，垂涎及抽搐癥狀，最 后死亡。36h后，剩余的小鼠活動，飲食漸漸趨丁正常。實驗結(jié)果：四組小鼠

10、死亡數(shù)目分 別為0, 0,3,4，通過查閱霍恩法LD5o計算用表得出小鼠經(jīng)口染蠹的苯甲酸鈉的 LD5o值，查 表知 LDo=3830mg/kg，可信限為 2.61-5.62。4. 結(jié)果分析實驗過程中，小鼠出現(xiàn)抽搐，行動遲緩，呼吸減慢，精神萎靡及死亡等中蠹表現(xiàn)，說 明苯甲酸鈉具有一定的蠹性，應(yīng)引起食品生產(chǎn)過程中防腐劑苯甲酸鈉應(yīng)用的注意。在24h后剩余小鼠中蠹狀況漸漸好轉(zhuǎn)，說明苯甲酸鈉不在機體內(nèi)蓄積。查閱資料：苯甲酸鈉進入 機體后，在9-15小時內(nèi)，大部分與甘氨酸化合成馬尿酸，從尿中排出，剩余部分和葡萄 糖醛酸化合成葡萄苜酸而解蠹，通過尿排出體外。在代謝方面小鼠與人較為接近，急性蠹 性試驗表明苯甲

11、酸鈉屆丁低蠹性物質(zhì)，苯甲酸鈉灌胃小鼠半數(shù)致死量為LD5°=3830mg/kg,95%勺可信限為2.61-5.62。5. 結(jié)論實驗結(jié)果表明：在安全范圍內(nèi)使用苯甲酸鈉對機體是沒有影響，過量使用苯甲酸鈉會 引起致癌，致畸及死亡。苯甲酸鈉屆丁低蠹物質(zhì)，中蠹癥狀出現(xiàn)的時間與灌胃劑量存在直 接線性關(guān)系，劑量越大死亡率就越高，急性蠹性經(jīng)口試驗可提供在短時間內(nèi)經(jīng)口接觸受試 物所產(chǎn)生的危害信息，為進一步試驗劑量選擇提供依據(jù)，并初步估測可能的蠹作用機制， 為實驗結(jié)果外推至人提供參考依據(jù)。苯甲酸鈉這種化學(xué)物質(zhì)，對人類有利也有害。我們應(yīng) 該盡量減少食用含有苯甲酸鈉做防腐劑的物質(zhì)，取利避害，正確對待苯甲酸鈉。參考文獻1、沈建忠，動物蠹理學(xué)M.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2