疑血型鑒定中若干問題1

1、疑難血型鑒定中若干問題疑難血型鑒定中若干問題輸血前免疫學檢測 輸血前檢測要求做abo血型（正反聯(lián)合）、rhd抗原鑒定，抗體篩選和交叉配血 。 血型定型是基礎(chǔ) 。 目的：準確定型，選擇相容血液。 意義：輸血安全、有效。 “ “疑難血型疑難血型”的定義的定義 “疑難血型”是指一種血型難以判定的“現(xiàn)象”實質(zhì)不是一種獨立的血型 在臨床輸血中,只要求查abo,rhd,不要求查其它血型,因此,疑難血型只涉及abo和rhd abo疑難血型一般是因為正,反定型不合而發(fā)現(xiàn)的 紅細胞血型系統(tǒng)簡介紅細胞血型系統(tǒng)簡介 血型系統(tǒng)：29個血型系統(tǒng)，已檢出的抗原超過200個。 血型集合：達不到血型系統(tǒng)命名標準的血型抗原，但

2、在血清學、生化、或遺傳學上有相關(guān)性。 血型系列：一個高頻組（90%），一個低頻組（1%）。紅細胞血型系統(tǒng)簡介紅細胞血型系統(tǒng)簡介 最具臨床意義：abo、rh 重要臨床意義：輸血安全、器官移植、新生兒溶血病。abo血型臨床意義血型臨床意義 溶血性輸血反應 abo抗體與相應抗原結(jié)合后，能夠激活補體，導致紅細胞在血管內(nèi)立即被破壞。輕者僅表現(xiàn)為發(fā)熱、腰背痛、血紅蛋白尿或手術(shù)野彌漫性滲血。 重者可表現(xiàn)為dic、休克、急性腎衰竭，甚至死亡。abo血型臨床意義血型臨床意義 新生兒溶血病 器官移植 abo抗原的發(fā)育抗原的發(fā)育 在胚胎早期a a和b b抗原就開始產(chǎn)生，到出生時，他們比成人的抗原數(shù)目要少，大約是成人

3、2550%。 與抗a a和抗b b試劑血清反應比成人弱，18個月后才能充分表現(xiàn)出抗原性。 24歲時，抗原逐步發(fā)育成熟，并終生基本保持恒定。abo血型抗體 正常情況下存在于缺少相應抗原的人血清中。 新生兒abo抗體很少；無抗體成人罕見。 自然產(chǎn)生抗體：igm（主要是a和b型）、igg類（主要是o型）。 igm可被唾液中血型物質(zhì)中和。 o型-抗a,b：識別a和b抗原表位共同的結(jié)構(gòu)部分具有交叉反應性。abo血型系統(tǒng)的獨特性質(zhì)血型系統(tǒng)的獨特性質(zhì)血清中常存在反應很強的抗體，而紅細胞上缺乏血清中常存在反應很強的抗體，而紅細胞上缺乏相應的抗原。相應的抗原。許多組織細胞上有規(guī)律地存在著許多組織細胞上有規(guī)律地存

4、在著a、b、h抗原抗原（消化道呼吸道泌尿系統(tǒng)上皮細胞）以及分泌型（消化道呼吸道泌尿系統(tǒng)上皮細胞）以及分泌型人的分泌液（唾液、眼淚、尿液、消化液、膽汁、人的分泌液（唾液、眼淚、尿液、消化液、膽汁、乳液、羊水、卵巢囊腫液、腹水）中存在著乳液、羊水、卵巢囊腫液、腹水）中存在著a、b、h血型血型物質(zhì)。物質(zhì)。abo血型的鑒定血型的鑒定 完整的完整的abo定型必須包括定型必須包括正定型正定型和和反定反定型型兩種方法，并互相核對其結(jié)果是否一致。兩種方法，并互相核對其結(jié)果是否一致。 正定型正定型 用已知型特異性的抗體試劑檢查用已知型特異性的抗體試劑檢查被檢紅細胞抗原。試劑血清常規(guī)用抗被檢紅細胞抗原。試劑血清常

5、規(guī)用抗a、抗抗b兩種標準血清。兩種標準血清。 反定型反定型 用已知血型的紅細胞檢查血清中用已知血型的紅細胞檢查血清中的抗體。試劑細胞常規(guī)用的抗體。試劑細胞常規(guī)用a、b和和o型三種型三種 紅紅細胞。細胞。血型鑒定方法 玻片法（瓷板法、紙片法） 試管法：經(jīng)典的試管離心方法仍被認為是最可靠的abo定型方法。 微量板法(u型或v型板)：大量標本 微柱凝膠免疫實驗技術(shù)（卡式） pcr方法 注意：細胞濃度、血清與細胞比例abo正反定型不符合原因 試驗因素假陰性：未加試劑；紅細胞與血清比例不當；試驗溫度不當；離心速度不夠；未判明結(jié)果為溶血；試驗結(jié)果解讀不準確。假陽性：試劑血清、紅細胞或生理鹽水污染；應用不潔

6、的器皿；離心過度；試驗結(jié)果解讀不準確。 患者本身患者因素 紅細胞（正定型）：紅細胞抗原減弱：亞型、疾病 紅細胞抗原增多：獲得性b抗原 細菌污染造成多凝集現(xiàn)象 紅細胞被自身抗體致敏 wharton膠 混合外觀凝集： 骨髓移植、近期輸血患者因素 血清方面的原因（反定型） 血清抗體減少：年齡因素 低丙種球蛋白血癥 血清抗體增加：自身抗體的存在 同種抗體的存在 血清被細菌污染造成多凝集現(xiàn)象 球蛋白過高造成的緡錢狀凝集 近期內(nèi)血漿置換 溶血素 （溶血反應）常見問題處理方法常見問題處理方法 了解患者一般情況。了解患者一般情況。在做進一步試驗之前，先進行重復試驗。在做進一步試驗之前，先進行重復試驗。用試管法

7、用試管法, ,洗滌細胞洗滌細胞。更換新的試劑。更換新的試劑。滅活補體。滅活補體。常見問題處理方法常見問題處理方法 初步檢查：再取一份患者新鮮標本；初步檢查：再取一份患者新鮮標本； 紅細胞洗滌后配成紅細胞洗滌后配成25%濃度；濃度； 重復進行各項試驗；重復進行各項試驗； 直接抗人球蛋白試驗；直接抗人球蛋白試驗； 用用o及自身細胞檢測血清，懷疑抗及自身細胞檢測血清，懷疑抗i，用臍血細胞，用臍血細胞檢查；檢查； 判定結(jié)果之前，實驗管至少在室溫和判定結(jié)果之前，實驗管至少在室溫和4放置放置30分鐘，陰性者用顯微鏡觀察結(jié)果。分鐘，陰性者用顯微鏡觀察結(jié)果。進一步實驗 增加試劑血清：抗a1 抗h 抗a,b 增

8、加細胞：自身、o細胞、臍血細胞 唾液血型物質(zhì)鑒定 吸收試驗 放散試驗 直接抗球蛋白試驗 分子生物學實驗特殊特殊abo正反定型不一致的正反定型不一致的解決方法解決方法異常正定型（紅細胞問題）異常正定型（紅細胞問題） 抗原弱 獲得性b抗原 混合凝集視野 cisab抗原弱 當患者血清中存在抗a或抗b時，而紅細胞不與相應的抗血清凝集，高度懷疑是缺乏抗原或抗原弱。此時有兩種情況：亞型；疾病（急性白血病、骨髓增生異常綜合癥等）所致。 對策：以a亞型為例用抗a、抗a1、抗a,b、抗h，重復檢查洗滌后的被檢紅細胞，并在室溫及4放置至少30min。注意按試劑說明書操作。做吸收放散試驗，放散液與3個a細胞和3個o

9、細胞反應。若與a細胞呈陽性反應，與o細胞呈陰性反應，證明被檢細胞有a抗原。檢查唾液中abh物質(zhì)。如果有條件，當疾病緩解后復查abo血型。獲得性b抗原 當紅細胞正定型似乎是ab型，而血清中又含有抗b時，應該考慮是獲得性b抗原。常發(fā)生于a1型個體。疾病導致的。 對策：仔細觀察紅細胞與抗a抗b的凝集強度，與抗b血清反應要弱。核對患者診斷，獲得性b抗原常與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭氏陰性細菌感染有關(guān)。自身的血清與自身紅細胞不發(fā)生凝集。即獲得性b抗原者的血清與獲得性b抗原無凝集反應。酸化人源性抗b血清至ph6.0，與獲得性b抗原不出現(xiàn)凝集反應。唾液中血型物質(zhì)鑒定，可有a物質(zhì)，無b物質(zhì)?；旌夏曇?一份血液中

10、含有兩種不同的、可以分開的紅細胞。 如近期非o型的患者，接受了o型紅細胞；abo不合造血干細胞移植；異卵雙胞胎的嵌合體；a3亞型或白血病所致抗原減弱。 按照陽性結(jié)果報。cisab 雙親中一人為o型，一人為ab型。 a和b基因位于同一條染色體上。兩個基因可同時繼承和同時遺傳。 a抗原強度強于a2b，弱于a1b。較難區(qū)分。 b抗原弱，類似b3表型。 h抗原性很強。 分為四種表型：a2b3、a1b3、a2b、a2bx異常反定型（血清問題）異常反定型（血清問題） 緡錢狀假凝集：血清中含有異常的大量的蛋白質(zhì)，使受檢紅細胞發(fā)生聚集，形成具有錢串樣特征的團塊。疾病或某些藥物。 這種聚集通常形狀不規(guī)則，與正常

11、的凝集很難區(qū)分，常采取以下對策：核對患者診斷和用藥情況。鹽水替代。 異常反定型（血清問題）異常反定型（血清問題） 強反應性自身冷凝集素：血清中常有自身抗i、抗ih、抗ia、抗ib，在室溫能凝集所有成人的紅細胞，給血型鑒定帶來困難。多數(shù)情況下，自身冷凝集素比抗a抗b所致凝集反應為弱。 對策：在37下做試驗。由于37不是最佳反應溫度，患者抗a抗b較弱時，可能凝集強度會更弱。采用冷自身吸收法，去除自身冷凝集素。用吸收后的血清做反定型。用0.01m dtt處理血清。注意正常的igm類抗a抗b也被破壞。 異常反定型（血清問題）異常反定型（血清問題） 意外同種抗體：如抗p1、抗m、igm抗e等，注意與冷凝

12、集素鑒別。 對策：抗體篩選；與多個o型細胞反應；了解患者疾病診斷、輸血史、生育史等。異常反定型（血清問題）異常反定型（血清問題） 缺乏預期抗體：反定型均為陰性。 對策：核對患者年齡、診斷。延長反應時間，或增加血清量。血型定型以抗原為主。 abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 4 分析：患者血型可能是b型。 患者年齡（老人/嬰兒）、疾病診斷（mm、免疫球蛋白缺乏、慢淋等） 輸血：b型紅細胞、血小板abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc mf mf 3 / 3 分析：患者血型可能是a亞型。 如果是

13、急性白血病患者，抗原減弱的可能性很大。 輸血：a型紅細胞、血小板abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 4 2 4 2 分析：患者的血型可能是a型。 巨球蛋白血癥或部分多發(fā)性骨髓瘤患者，血液中異常球蛋白升高，導致緡錢狀凝集。輸血：a型紅細胞、血小板abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 3 3 2 分析：患者血型可能是o型，血清中有意外抗體。 輸血：o型相容紅細胞abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 2 4 3 分析：患者血型可能是a型，獲得

14、性b。 核對患者診斷，進行相關(guān)試驗。輸血：a型紅細胞abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b 2 2 2 分析：患者是新生兒，只做正定型。血型可能是o型，臍帶血中有wharton膠。洗滌被檢細胞。 輸血：o型血abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 3 分析：患者血型可能是b亞型。 吸收放散試驗、血型基因輸血：b型紅細胞abo正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b a1c bc oc 3mf 3 3 3 抗a1 抗h 4分析：a2型，有抗a1抗體。輸血a2/o型紅細胞。abo正反定型不符病例分析

15、正反定型不符病例分析 抗a 抗b 抗a,b ac bc oc 4 4 4 3分析：ab型，有不規(guī)則抗體（抗h）輸血：同型輸血，不能輸o型紅細胞交叉配血 交叉配血中遇到的問題如果在血型鑒定中做了反定型，在血型鑒定中就能發(fā)現(xiàn)問題，如果血型鑒定中找到原因，配血問題自然能解決。試驗結(jié)果試驗結(jié)果 可能的解釋可能的解釋 討論解決討論解決主主 側(cè)側(cè) + +自身對照自身對照 - -抗體篩選抗體篩選 - -（1 1）患者或獻血者的）患者或獻血者的aboabo定型不正確定型不正確（2 2）患者血清中的同種）患者血清中的同種抗體與獻血者紅細胞上的抗體與獻血者紅細胞上的抗原發(fā)生反應，但在篩選抗原發(fā)生反應，但在篩選細胞

16、上無此抗原存在。細胞上無此抗原存在。（3 3）獻血者細胞可能有）獻血者細胞可能有datdat陽陽（1 1）重復）重復aboabo實驗：查對抗體是否一致。實驗：查對抗體是否一致。（2 2）增加抗體篩選和鑒定的細胞，進一步檢）增加抗體篩選和鑒定的細胞，進一步檢查病人血清中的抗體查病人血清中的抗體（3 3）做獻血者直抗，如陽性，此血不能用于）做獻血者直抗，如陽性，此血不能用于臨床，廢棄。臨床，廢棄。主主 側(cè)側(cè) + +自身對照自身對照 - -抗體篩選抗體篩選 + + 患者血清中的同種抗體與患者血清中的同種抗體與獻血者紅細胞及篩選細胞獻血者紅細胞及篩選細胞上的抗原發(fā)生反應上的抗原發(fā)生反應 對患者血清進行抗體鑒定，篩選對應抗原對患者血清進行抗體鑒定，篩選對應抗原陰性的紅細胞重做交叉配血。陰性的紅細胞重做交叉配血。主主 側(cè)側(cè) + +自身對照自身對照 + +抗體篩選抗體篩選 + + （1 1）患者血清內(nèi)可能有