xsl新新動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

1、1會(huì)計(jì)學(xué)xsl新新動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體新新動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體2、動(dòng)物融合的過(guò)程、動(dòng)物融合的過(guò)程 動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞 滅活的病毒有絲分裂兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞 酶解法，如纖維素酶或果膠酶酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.2.動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁3.3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；離心、電激等物理方法；PEGPEG等化學(xué)方法等化學(xué)方法4.4.動(dòng)物細(xì)胞

2、融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法動(dòng)物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？嗎？能能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形形 成完整的雜種個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物成完整的雜種個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？個(gè)體嗎？不能不能不同不同DNADNA的的兩個(gè)細(xì)胞兩個(gè)細(xì)胞2、動(dòng)物融合的過(guò)程、動(dòng)物融合的過(guò)程誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合方法：聚乙二方法：聚乙二醇、醇、滅活病毒滅活病毒、電激等、電激等雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性（3 3）、）、應(yīng)

3、用：主要用于制備單克隆抗體應(yīng)用：主要用于制備單克隆抗體(2)(2)、意義：意義： 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性，成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性，成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株主要用途主要用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動(dòng)、電刺激）動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融

4、合 細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目3 3、比較、比較意義：意義：克服遠(yuǎn)緣雜交障礙克服遠(yuǎn)緣雜交障礙使遠(yuǎn)緣雜交成為可能使遠(yuǎn)緣雜交成為可能復(fù)習(xí)？1.1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？漿細(xì)胞漿細(xì)胞2.2.一個(gè)淋巴細(xì)胞一個(gè)淋巴細(xì)胞( (漿細(xì)胞漿細(xì)胞) )能分泌多種抗體嗎？能分泌多種抗體嗎？ 每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。3.3.一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)

5、產(chǎn)生的抗體只有一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？一種嗎？ 動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬(wàn)種以上動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬(wàn)種以上。4. 4. 簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？簡(jiǎn)述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？ 抗原抗原 動(dòng)物體動(dòng)物體 抗體抗體 抗原不純抗原不純 抗體不純抗體不純（二）、單克隆抗體（二）、單克隆抗體刺激漿細(xì)胞閱讀課本第閱讀課本第5354頁(yè)內(nèi)頁(yè)內(nèi)內(nèi)容，回答相關(guān)問(wèn)題是內(nèi)容，回答相關(guān)問(wèn)題是。6.6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？ 體外培養(yǎng)單個(gè)淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體體外培養(yǎng)單個(gè)淋

6、巴細(xì)胞，提取分泌的抗體7.7.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎? ?怎樣解決這個(gè)怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？問(wèn)題？5.5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？這種方法獲得的抗體有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差產(chǎn)量低，純度低，特異性差設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠在體外大量增殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠在體外大量增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞（二）、單克隆抗體（二）、單克隆抗體1、原始獲得抗體的方法：、原始獲得抗體的方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后，從動(dòng)物血清中分離所抗原，使動(dòng)物

7、產(chǎn)生抗體，然后，從動(dòng)物血清中分離所需抗體。（缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差）需抗體。（缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差）制備過(guò)程制備過(guò)程免疫小鼠免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合融合B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性檢驗(yàn)陽(yáng)性專一抗體專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性檢驗(yàn)陽(yáng)性注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞克隆雜交細(xì)胞分開(kāi)不同雜交細(xì)胞，克隆分開(kāi)不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞專一抗體，檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞 單克隆抗體制備過(guò)程示意圖單克隆抗體制備過(guò)程示意圖多種雜交細(xì)胞多種雜交細(xì)胞 單克隆抗體制

8、備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程注射特注射特定抗原定抗原誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合克隆培養(yǎng)，檢測(cè)，篩選，克隆培養(yǎng)，檢測(cè)，篩選，能分泌所需抗體能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體小鼠小鼠相應(yīng)的相應(yīng)的漿細(xì)胞漿細(xì)胞骨髓瘤骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 ，篩選，篩選多種細(xì)胞多種細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)從培養(yǎng)液中提取從培養(yǎng)液中提取從小從小鼠鼠腹水腹水中提取中提取說(shuō)明：雜交瘤細(xì)說(shuō)明：雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能大量胞特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。一抗體。第一次篩選：選第一次篩選：選出雜交瘤細(xì)胞。出雜交瘤細(xì)胞。第二次篩選：選第二次篩選：

9、選出能分泌所需抗體出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。的雜交瘤細(xì)胞。 由單個(gè)由單個(gè)B細(xì)胞克隆形成的細(xì)胞群細(xì)胞克隆形成的細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體 。3、單克隆抗體：、單克隆抗體：優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可大量制備優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可大量制備 。4.4.單克隆抗體的應(yīng)用：?jiǎn)慰寺】贵w的應(yīng)用：（1 1）作為診斷試劑：）作為診斷試劑：具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的特點(diǎn)。、快速的特點(diǎn)。 “生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”：借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用：借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用，能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置，在原，能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置，在

10、原位置殺死癌細(xì)胞。位置殺死癌細(xì)胞。( (在抗體上連接藥物）在抗體上連接藥物）優(yōu)點(diǎn)：療效高、毒副作用小優(yōu)點(diǎn)：療效高、毒副作用小（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物。）用于治療疾病和運(yùn)載藥物。知識(shí)結(jié)構(gòu)兩個(gè)過(guò)程兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活的病毒滅活的病毒一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)B2.2.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的（ ）A.BA.B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.T

11、B.T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C.C.骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 D.D.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 D3.3.（多選）（多選）19751975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是（ ）A.A.效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞 B BT T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.C.骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 D D雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A B C DB B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破下圖為某同學(xué)根

12、據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案?jìng)L(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體制備單克隆抗體不能，沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)不能，沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的生單一抗體的B B淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞。(1).(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：_(2).(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？(3).A(3).A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_ _ 該細(xì)胞能該細(xì)胞能夠產(chǎn)生夠產(chǎn)生_ _ 。(4).(4).圖中圖中B B為為_(kāi)過(guò)程，常用過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性

13、，既能_,_,又能又能_。(5).C(5).C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活的病毒滅活的病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無(wú)限增殖無(wú)限增殖原代原代傳代傳代5050C C2.2.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于 ( )( )A.A.細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性 B B細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性C.C.細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性D D細(xì)胞質(zhì)酶的活性細(xì)胞質(zhì)酶的活性 A一一.選

14、擇題選擇題D4.4.只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是 （ ）A APEGPEG B B滅活的病毒滅活的病毒 C C電刺激電刺激 D D離心離心B二二. .簡(jiǎn)答題簡(jiǎn)答題1.1.淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體-中的中的-細(xì)胞分細(xì)胞分化發(fā)育而來(lái)的?；l(fā)育而來(lái)的。2.2.雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓骨髓造血干造血干主動(dòng)運(yùn)輸主動(dòng)運(yùn)輸提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然相同，不同的是植物

15、體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。 提示：哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的提示：哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的B B淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，B B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過(guò)程中，每一種反應(yīng)的過(guò)程中，每一種B B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞大量增殖。大量增殖。B B

16、淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性性在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。性的抗體。 主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得

17、雜種植株主要用途主要用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動(dòng)、電刺激）動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合 細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目3 3、比較、比較意義：意義：克服遠(yuǎn)緣雜交障礙克服遠(yuǎn)緣雜交障礙使遠(yuǎn)緣雜交成為可能使遠(yuǎn)緣雜交成為

18、可能6.6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？ 體外培養(yǎng)單個(gè)淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體體外培養(yǎng)單個(gè)淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體7.7.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖嗎? ?怎樣解決這個(gè)怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？問(wèn)題？5.5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？這種方法獲得的抗體有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差產(chǎn)量低，純度低，特異性差設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠在體外大量增殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠在體外大量增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞（二）、單克隆抗體（二）、單克隆抗體1、原始獲得抗體的