引物純化方式HAP、PAGE、DHLPC的區(qū)別

1、精品文檔引物純化方式HAP 、PAGE 、DHLPC 等的區(qū)別純化方式：一 OPC 純化OPC 純化是使用一種叫Cartridge的反向?qū)游鲋?（美國Waters公司生產(chǎn)),根據(jù) DNA保護基 (DMTr基)和層析柱中樹脂間的親和力作用的原理進行純化目的DNA 片段。 OPC 法純化的 DNA 純度大于90% ，適用于PCR 用引物， DNA 測序用引物，各種探針等。此級別對短鏈較為有效。具體操作方法如下。1. DNA 合成是用全自動 DNA 合成儀從 3 5 進行人工合成的。在剛合成完的DNA 的 5 端的堿基上帶有一個大型的疏水性保護基團DMTr基，而中間產(chǎn)物的短鏈雜質(zhì) DNA中不具有DM

2、Tr 基。利用這一性質(zhì)進行目的DNA的純化。2. 把粗樣DNA 加入Sep-PakCartridge 柱上（簡易反相柱)。此時，所有的合成產(chǎn)物全吸附于反相柱上。3. 用甲醇清洗反相柱。此時，吸附能力強的帶有DMTr保護基的目的DNA仍吸附于反相柱上，而短鏈雜質(zhì)DNA片段全部被沖走。4. 向反相柱上加入強酸TFA (Trifluoroaceticacid), 切斷DMTr保護基和目的DNA之間的連接。5. 再用乙腈洗脫目的DNA。此時回收出來的目的DNA的純度能達到95%以上?？捎糜贒NA測序等。二 PAGE 純化PAGE 純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，對DNA 片段進行分離，然后從凝膠中

3、回收目的DNA 的方法。 PAGE 純化法也是一種非常有效的DNA 純化方法，純化后的純度大于 95% ，對長鏈 OligoDNA 的純化特別有效。適用于PCR 用引物， DNA 測需用引物，隨意編輯精品文檔各種探針等。三 HPLC 純化采用高效液相色譜純化，產(chǎn)物純度極高， 可達 99% 。適用于各種基因工程試驗，特別是：熒光標記DNA 、長鏈 DNA 、 PCR 克隆，定點突變，人工合成基因等。HPLC純化HPLC純化是使用高效液相色譜儀，對目的DNA片段進行純化的方法。HPLC純化的設(shè)備投資大，生產(chǎn)成本高，但使用本法純化的DNA片段純度極高，大于99%。 HPLC純化的操作方法如下。1.

4、合成高純度級DNA制品時，在全自動DNA合成儀上，需自動脫去DMTr保護基。2. 將粗樣 DNA 注入分離性能極強的離子交換 高效液相色譜 系統(tǒng)，進行粗檢測，確認主峰位置、目的 DNA 含量等 。3.增加注樣量，回收主峰平頭部分。此時可達到去除雜質(zhì)短鏈DNA ，純化目的 DNA的目的。 為了確保DNA 的純度，一般一次的純化量為1 OD 左右。4.將回收后的 DNA進行純度檢測，確認純度的可靠性。四 HAP什么是 HAP ？HAP 是英文 HIGE AFFINITYPURIFICATIION的縮寫。HAP 方法是生工自主開發(fā)的新型oligoDNA 純化方法。用HAP 純化的引物純度可達98%

5、以上，完全可與PAGE 、 HPLC方法媲美。其原理是利用合成引物5 - 端 DMT 基團對 HAP 樹脂專一性吸附、而不含DMT的短鏈 DNA 不被吸附，從而達到分離純化的目的。HAP 方法的三大優(yōu)勢：隨意編輯精品文檔純度高。用其純化所得引物的純度高達98% 以上(見圖 1) ?？捎糜诮^大多數(shù)分子生物學(xué)實驗。快速。用 HAP 方法純化的引物一輪只需2 小時，因而可比PAGE 方法提前一天交貨，節(jié)約您更多寶貴時間。價格上更有競爭優(yōu)勢。由于HAP 方法與 PAGE 、 HPLC 方法相比速度快、成本低，從而節(jié)約科研經(jīng)費。HAP 引物的用途用 HAP 方法純化的引物可用于絕大多數(shù)分子生物學(xué)實驗，包

6、括DNA 測序、基因合成、 PCR 反應(yīng)、點突變、分子雜交和基因芯片技術(shù)等。其純度對于一般的PCR 實驗而言更是綽綽有余。從 2000年起，生工測序部和基因合成部所用引物均來自HAP 方法。目前基因合成部更是每周需要HAP 純化的引物至少 2000 條。事實證明， HAP 方法 純化 的引物完全可以用于測序反應(yīng)和基因合成等對引物純度 要求較高的實驗。五 RPC 純化RPC 純化是通過反相凈化濾芯(Reverse Phase Cartridge)對引物進行純化， 純化原理與反相 HPLC 純化一樣。與反相HPLC 比較， RPC 是一種有效且更加經(jīng)濟的純化方式。反相凈化濾芯通常包含一種疏水基質(zhì)如C18 的硅膠，能夠很好的吸附DNA ，并且可以用水輕松地將切割下來的保護基團和短的引物片段從反相柱上洗掉。RPC 純化的引物可以應(yīng)用于DNA 測序、 PCR 及基因合成等。根據(jù)純化方式的不同，DNA制品可分為三個級別：OPC級、 PAGE級、高純度級。OPC級制品： 進行OPC純化，純度大于95%。適用于PCR 用引物、DNA測序用引物、各種探針等。此級別只接受30mer以下的制品。PAGE 級制品： 用 PAGE膠純化，純度大于95%。適用于PCR 用引物、DNA測序隨意編輯精品文檔用引物、各種探針等。純化30mer以上的合成DNA制品時，純度高