胃癌發(fā)生發(fā)展中可溶型Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表達及其意義

1、胃癌發(fā)生發(fā)展中可溶型的表達及其意義 【摘要】探討基因蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：應用免疫組化、特定組織蛋白提取及印跡雜交技術，對例正常胃黏膜，例癌前病變和例胃癌組織中的表達情況加以分析。結果：正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織的陽性率分別為5、5、7；的陽性率分別為20、7、6。印跡雜交顯示：胃癌細胞產生的蛋白以分子量的可溶型（）為主，伴少量的膜型（）。結論：在正常胃黏膜和癌前病變、胃癌組織中的表達強度差異有顯著性（）；在胃癌組織和正常胃黏膜、癌前病變中的表達強度差異有顯著性（）。 【關鍵詞】胃癌基因表達免疫逃逸細胞凋亡 ：，：，：，5，57，20，76，2 / 11：，（）：，（），（）

2、；胃癌是發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，發(fā)病機制尚不十分清楚。（）是腫瘤壞死因子（）一神經生長因子（）受體超家族成員，它通過與其配件（，）相互作用，調控細胞的生存和凋亡。研究表明：系統(tǒng)的異常表達，不僅參與胃癌過程中細胞凋亡異常的調節(jié)，而且與胃上皮細胞癌變及免疫逃逸有關。本文通過檢測正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織的表達，探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 材料和方法 組織來源例正常胃黏膜、例癌前病變和例胃癌組織（人正常胃黏膜和胃癌手術切除）標本選自本室與中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腫瘤外科共建瘤庫。標本在術后內獲取，液氮速凍后，保存。 主要試劑兔抗人、抗體（，）購自北京中山生物技術公司；增強化學熒光蛋白檢測

3、（）試劑盒系英國公司產品；試劑盒為美國公司產品。 方法 冰凍組織切片將冰凍切片機（型）的操作箱用乙醇擦洗數(shù)次，以滅活蛋白酶；溫度降至左右，然后按常規(guī)方法做以上組織的冰凍切片。 免疫組織化學染色將上述切片做染色，組織病理學觀察，選擇病變典型的切片用冷丙酮固定，保存，用于免疫組織化學染色?？箍贵w的工作濃度均為。以食道鱗狀上皮為陽性對照。免疫組織化學染色的步驟按文獻所述方法進行。 特定組織的蛋白提取冰凍組織的連續(xù)切片，染色，組織病理學觀察。若有多種組織存在，則按本研究室建立的特定組織選擇法進行蛋白提取。選擇切片總體積約××，立即用加樣器吸頭將其移至含×，超聲破碎，加熱，

4、離心，取上清，用紫外分光光度計進行蛋白濃度然后調整濃度至，保存?zhèn)溆谩?蛋白分析取蛋白樣本，在中電泳分離，蛋白按常規(guī)行電轉移，恒流，過夜。固相支持物為硝酸纖維素膜。脫脂奶粉（，），封閉，以稀釋度為的、抗體與膜上靶蛋白孵育。辣根過氧化物酶偶聯(lián)的豬抗兔抗體（，）作用后，用熒光顯色系統(tǒng)曝光顯色。 統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)進行檢驗。 結果 免疫組織化學染色的結果顯示：在正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織的陽性率分別為5、5、7，在正常胃黏膜的表達顯著高于癌前病變和胃癌組織（）；在正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織陽性率分別為20、7、6，在胃癌組織中的表達顯著高于正常胃黏膜和癌前病變（）。的表達部位基本以細胞為主，表現(xiàn)為

5、細胞漿呈棕黃色染色顆粒。印跡雜交顯示：胃癌細胞產生的蛋白以分子量的可溶型（）為主，伴少量的模型（），見表1。表1Fas和Fasl在不同組織中的表達情況 討論 惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多階段的過程，一般表現(xiàn)為正常上皮、不典型增生、原位癌、浸潤癌，同時腫瘤的發(fā)生是多基因變異積累的過程。近年研究發(fā)現(xiàn)，細胞凋亡的抑制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。由系統(tǒng)及其細胞內信號傳導分子構成了細胞凋亡的重要通路，在此通路上任一環(huán)節(jié)的缺失都可導致癌細胞逃逸細胞凋亡，從而實現(xiàn)無限增殖。本組實驗結果表明：癌前病變、胃癌組織細胞陽性表達率顯著低于正常胃黏膜，提示胃癌細胞下調；癌前病變、胃癌組織細胞陽性表達率顯著高于正

6、常胃黏膜，提示胃癌細胞上調。因此證實了胃癌組織細胞中存在系統(tǒng)平衡失調，導致系統(tǒng)介導的細胞凋亡途徑發(fā)生異常，可能是胃黏膜癌變過程中細胞凋亡抑制的重要機制之一。另外，印跡雜交顯示：胃癌細胞產生的蛋白以分子量的可溶型（）為主，伴少量的膜型（）。胃癌細胞中缺乏膜型的表達意味著將不能與或其重組體相結合觸發(fā)凋亡。這提示：胃癌細胞可能通過大量分泌來封閉細胞外基質中以及免疫活性細胞表達的，以阻止后者與自身含膜內死亡區(qū)域（，）的接觸，從而使胃癌細胞獲得免疫逃逸能力，使胃癌細胞得以持續(xù)增殖。在胃癌發(fā)生發(fā)展各階段中均有表達，但在表達程度上存在一定差異，即癌前病變、胃癌組織陽性表達率顯著低于正常胃黏膜，表明表達異常可能在胃癌發(fā)生過程中起一定作用。在癌前病變和胃癌組織黏膜間的表達差異無顯著性，說明的出現(xiàn)很可能是各類胃癌及癌前病變的重要生物學特性之一。對的表達、功能及其可調性的分子機制的研究對胃癌的早期診斷和預后判斷及基因治療等方面具有重要意義。 【參考文獻】 ，： ，： ，： 巖，劉寧，劉佳，等冰凍