產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證方案-wm

1、產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證項目名稱產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證項目編號編制人員日 期審核人員日 期批準(zhǔn)人員日 期目錄1 .概述2 .驗證目的3 .適用范圍4 .驗證依據(jù)5 .驗證小組成員及職責(zé)6 .試驗材料7 .樣品洗脫方法回收率驗證8 .技術(shù)方法驗證9 .驗證方案的評定和建議10 .驗證方案的最終審核意見11 .產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證報告產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證1 .概述初始污染菌是用于檢測產(chǎn)品未滅菌前屏障系統(tǒng)表面或內(nèi)在的活微生物數(shù)量。初始污染菌 回收率用于補(bǔ)償無法從產(chǎn)品中完全取出的微生物的數(shù)值。是用特定的技術(shù)從產(chǎn)品上移除并培 養(yǎng)微生物的方法，測定滅菌前產(chǎn)品細(xì)菌總

2、數(shù)可用來判斷產(chǎn)品受細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單 位工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對產(chǎn)品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)，確定 滅菌前產(chǎn)品中微生物的數(shù)量和性質(zhì)，可為下一步滅菌提供參考依據(jù)。確保本企業(yè)所生產(chǎn)的成 品符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求。2 .驗證目的確定產(chǎn)品初始污染菌檢測方法3 .適用范圍本公司產(chǎn)品的初始污染菌檢測4 .驗證依據(jù)中國藥典2015版通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法；ISO11737-1:2006醫(yī)療器械的滅菌 微生物學(xué)方法 第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測定;GB/T19973-12005醫(yī)療器械的滅菌微生物學(xué)方法 第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計;GB15980-19

3、95 一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)；5.驗證小組成員及職責(zé)小組人員職務(wù)姓名所在部門職責(zé)組長組員組員6 .試驗材料6.1. 試驗產(chǎn)品：6.2. 儀器與設(shè)備:DSX-280B手提式壓力蒸汽滅菌器,SPX-150型生化培養(yǎng)箱,SW-CJ系列潔凈工作臺, MJK-150型霉菌培養(yǎng)箱，BSC-1000H A2生物安全柜，ZW 型集菌儀,GZX-9076MBE電熱 鼓風(fēng)干燥箱。6.3. 其他試驗材料：微孔濾膜（孔徑00.45um直彳約50mm）、量筒、銀子、吸管、酒精燈、產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證試管、75%乙醇棉簽、滅菌刻度吸量管（1ml）、滅菌硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿（490m由15mnj）、 錐形瓶，滅

4、菌手術(shù)剪、無菌燒杯等。6.4. 培養(yǎng)基及稀釋液：胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液0.9%NaCl 溶液6.5. 菌種：金黃色葡萄球菌白色念珠菌7 .樣品洗脫方法回收率驗證7.1. 方法描述驗證試驗應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗，每次試驗時，先將已知菌落數(shù)的懸液菌液涂布于 樣品上，然后對同一樣品進(jìn)行多次洗脫處理，每次洗脫后的供試液通過薄膜過濾法過濾，培 養(yǎng)并計數(shù)，得出回收率。7.2. 樣品準(zhǔn)備取產(chǎn)品（未組裝的），滅菌7.3. 菌液制備7.4. 試驗步驟7.4.1. 樣品處理：取50100cfu的 菌液，均勻涂布于樣品（最難洗脫的部位）上，自然晾干。7.4.2. 樣

5、品洗脫：在凈化臺下取處理后的樣品，浸沒于裝有一定體積的0.9%無菌NaCL溶液的適合容器中，手工震搖5分鐘洗脫樣品中的菌，作為供試液，做好標(biāo)記。7.4.3. 按7.4.2再反復(fù)洗脫3次，分別做好標(biāo)記。7.4.4. 采用薄膜過濾法，將每一次洗脫的供試液分別過濾集菌于不同的膜上，取下濾膜正面 朝上貼于相應(yīng)的培養(yǎng)基平皿上，置該培養(yǎng)基的溫培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)；7.4.5. 計數(shù)：對每一次洗脫的菌落進(jìn)行計數(shù)，并記錄于下表1中7.4.6. 回收率計算第一次洗脫的菌落數(shù)回收率=一總菌落數(shù)7.5. 結(jié)果判定產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證在3次獨(dú)立平行試驗中，回收率均應(yīng)大于70%,則洗脫方法有效，若任一次試驗中回

6、收 率低于70%則應(yīng)排除干擾因素，并重新驗證，或選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件 進(jìn)行試驗。8 .計數(shù)方法驗證8.1. 方法描述驗證試驗應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗，每次試驗分四個組，試驗組、菌液組、供試品對 照組、洗脫液對照組。并分別計算各試驗菌的每次試驗回收率。8.2. 供試液的制備：按7.的方法制備。8.3. 試驗步驟：8.3.1. 試驗組 將供試液用薄膜過濾法過濾，并加入 100ml （1ml含50-100cfu的試驗菌和 99mlPH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液）稀釋的菌懸液，過濾后將濾膜取下，菌面朝上貼在 對應(yīng)培養(yǎng)皿上，培養(yǎng)并計數(shù)。8.3.2. 菌液組 加入100ml （含50-10

7、0cfu的試驗菌和99mlPH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液）稀 釋的菌懸液，用薄膜過濾法過濾后，培養(yǎng)并計數(shù)。8.3.3. 供試品對照組 將供試液用薄膜過濾法過濾，力口 100mlPH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液，用 薄膜過濾法過濾后，培養(yǎng)并計數(shù)。8.3.4. 洗脫液對照組 將樣品洗脫液用薄膜過濾法過濾，加入 100ml （含50-100cfu的試驗菌 和99mlPH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液）稀釋的菌懸液，用薄膜過濾法過濾后，培養(yǎng)并計 數(shù)。8.4. 結(jié)果判定在3次獨(dú)立平行試驗中，洗脫液對照組回收率洗脫液對照組的平均菌落數(shù)/菌液組的平 均菌落數(shù)均應(yīng)不低于70%,若試驗組回收率（試驗組的平均菌落數(shù)-供

8、試品對照組的平均菌 落數(shù)的值）/菌液組的平均菌落數(shù)均不低于70%,則計數(shù)方法有效；若任一次試驗中試驗組 的菌落回收率低于70%則應(yīng)排除干擾因素，并重新驗證，若無法消除則選擇回收率最接近 要求的方法和試驗條件進(jìn)行檢驗。9 .驗證方案的評定和建議10 .驗證方案的最終審核意見產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證產(chǎn)品初始污染菌檢測方法適用性驗證報告1.產(chǎn)品概述2.儀器與設(shè)備設(shè)備名稱型號編號是否校準(zhǔn)是否在有效期內(nèi)結(jié)論壓力滅菌器DSX-280B口是口否口是口否生化培養(yǎng)箱SPX-150口是口否口是口否潔凈工作臺SW-CJ口是口否口是口否莓園培喬箱MJK-150口是口否口是口否A2生物安全柜BSC-1000H口

9、是口否口是口否集菌儀ZW型口是口否口是口否把城諷干燥箱GZX-9076MBE口是口否口是口否3.培養(yǎng)基和稀釋液名稱批號廠家配制批號配制人胰酪大H胸刺旨培養(yǎng)基沙氏葡錮糖培養(yǎng)埴PH7.0R化鈉蛋白月短沖液0.9%NaCL 溶液4.菌種菌種名稱困種編來源批號代數(shù)金黃色葡穩(wěn)球菌大腸埃希菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉5.洗脫方法回收率結(jié)果產(chǎn)品第一次洗第二次洗第三次洗第四次洗回收率平均1W攵率修正系數(shù)結(jié)論：試驗人/日期：審核/日期6.計數(shù)方法驗證結(jié)果產(chǎn)品名稱大腸埃布國試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液組回收率回收率回收率金黃色葡錮球菌試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液組回收率回收率回收率枯草芽抱桿菌試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液組回收率回收率回收率計數(shù)方法驗證結(jié)果白色念 珠菌試驗組試驗組