亞硝酸鹽的測定

1、鹽酸蔡乙二胺法測定亞硝酸鹽得含量1亞硝酸鹽得測定(鹽酸蔡乙二胺法)1、1原理樣品經(jīng)沉淀蛋口質、除去脂肪后，在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸 (H：NCeH -SOsH)重氮化，產(chǎn)生重氮鹽，此重氮鹽再與偶合試劑(鹽酸蔡乙二胺)偶 合形成紫紅色染料，其最大吸收波長為550nm,測定其吸光度后，可與標準比較定 量。2HCl+NaN02 + H2N-<-S03H2HC1 - H2NH2CH2CHN-<>+ Cl-N-<>-SO3H 空<0鹽酸蔡乙二胺2HC1 H2NH2CH2CHN- -N= N->-S03H + HC1紫紅色1、2儀器與試劑1、2、1儀

2、器 小型粉碎機。 分光光度計。 25ml具塞比色管。1、2、2試劑 氯化錢緩沖溶液:在1 000ml容量瓶中加人500ml水,然后準確加入20、0ml鹽酸，振蕩混勻后，再準確加入50ml氫氧化鞍，用水稀釋至刻度。必要時用稀 鹽酸與稀氫氧化錢調(diào)試pH至9、69、7o 硫酸鋅溶液(0、42mol/L):稱取120g硫酸鋅(ZnSO,7H：0),用水溶解, 并稀釋至1000ml o 氫氧化鈉溶液(20g/L):稱取20g氫氧化鈉用水溶解,稀釋至1 000ml。 對氨基苯磺酸溶液:稱取10g對氨基苯磺酸，溶于700ml水與300ml冰 乙酸中，置棕色瓶中混勻，室溫保存。 鹽酸蔡乙二胺溶液(lg/L):

3、稱職0、lg鹽酸蔡乙二胺，加60%乙酸溶解 并稀釋至100ml,混勻后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周內(nèi)穩(wěn)定。 顯色劑:臨用前,將鹽酸蔡乙二胺溶液(lg/L)與對氨基苯磺酸溶液等體積混 合。僅供1次使用。 亞硝酸鈉標準儲備液:準確稱取250、Omg于硅膠干燥器中干燥24h得 亞硝酸鈉，用水溶解后移入500ml容量瓶中，加100ml氯化錢緩沖溶液，用水稀釋 至刻度，混勻，在4°C避光保存。此溶液每毫升相當于500 u g得亞硝酸鈉。 亞硝酸鈉標準使用液:臨用前，吸取亞硝酸鈉標準儲備液1、00ml,置于 100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度,混勻。此洛液每毫升相當于5、Oug得亞硝酸 鈉。

4、1、3操作步驟1、3、1樣品得處理稱取約10、00g(糧食稱取5、00g)經(jīng)絞碎混勻得樣品，置于250ml燒杯中，力口。 70ml水與12ml氫氧化鈉溶液(20g/L),混勻，用氫氧化鈉溶液(20g/L)調(diào)樣品pH 至&定量轉移至200ml容量瓶中，加10ml硫酸鋅溶液，混勻。如不產(chǎn)生白色沉淀, 可再補加25ml氫氧化鈉溶液，攪拌混勻。置60°C水浴中加熱10min,取出后冷 至室溫，加水至刻度，混勻。放置0、5h,用濾紙過濾，棄去初濾液20ml,收集濾液 備用。1、3、2亞硝酸鹽標準曲線得繪制吸取0、0、0、5、1、0、2、0、3、0、4、0、5、0ml亞硝酸鈉標準使用液(

5、相 當于 0、0、2、5、5、0、10、0、15、0、20、0、25、Oug 得亞硝酸鈉)，分別置 于25ml具塞比色管中。分別加入4、5ml氯化鞍緩沖溶液,2、5ml60%得乙酸, 然后立即加入5、0ml顯色劑，加水至刻度，混勻，在暗處靜置25min,用lcm比色 杯(靈墩度低時可換2cm比色杯)，以零管調(diào)節(jié)零點,于波長550nm處測吸光度，繪 制標準曲線。1、3、3樣品得測定吸取10、0ml樣品濾液于25ml具塞比色管中，按標準曲線制備程序，自“分別加入4、5ml氯化錢緩沖液”起依法操作。同時做試劑空白。1、4結果計算X 加？ X OOP 心X冷X】000V式中：X樣品中亞硝酸鹽得含量,m

6、g/kg;nu樣品得質量,g;m：測定用樣液中亞硝酸鹽得質量，P g;V一樣品處理液得總體積,ml;V：測定用樣液體積,ml o結果以算術平均值得二位有效數(shù)字表述。亞硝酸鈉含雖的標準曲OD538nmV=2O.81x-0.016R2 = 0.990亞硝酸鈉復/pg一純性（亞硝酸鈉量/此012345樣1樣200.100.2Q0.300.400.50才昭于亞6淳竣鋰屋心01.02.03.04.05.0/0.050.050.4%對氛呈責1.001-001.001.001.001.001.001.00$583 35miii0.500.500.500.500J0O.fioO.f00.50加1水至詡虞碎箝貿(mào)

7、"mln00.0240.0480.0770.1020.1140.0650.06S1> 5說明及注意事項硫酸鋅溶液作為蛋白質沉淀劑使用，也可用亞鐵亂化鉀與乙酸鋅得混合 溶液,利用產(chǎn)生得亞鐵氤化鋅與蛋口質共沉淀；實驗中使用重蒸水可以減少試驗 誤差。2硝酸鹽得測定2、1原理樣品經(jīng)沉淀蛋白質、除去脂肪后，將樣品提取液通過鎘柱,使其中得硝酸 根離子還原成亞硝酸根離子。在酸性條件下，亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化后, 再與鹽酸荼乙二胺偶合形成紅色染料，經(jīng)比色測得亞硝酸鹽總量，從還原前后亞 硝酸鹽量即可求得硝酸鹽得含量。2、2儀器與試劑2、2、1儀器(1)鎘柱a、海綿狀鎘粉得制備:投入足夠得鋅

8、皮或鋅棒于500ml200g/L得硫酸鎘 溶液中，經(jīng)34h,當溶液中得鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出殘余 鋅皮，使鎘沉底，傾去上層清液，以蒸懈水用傾斜法洗滌，然后移入組織搗碎機中， 加500ml水。搗碎約2s,用水將金屬細粒洗至標準篩上，取2040 L1之間得部分。 置試劑瓶中，用水封蓋保存,備用。b、鎘柱裝填:如圖83所示。用蒸鐳水裝滿鎘柱玻璃管,并裝入2cm高得玻 璃棉作墊。將玻璃棉壓向柱底，并將其中所包含得空氣全部排出，在輕輕敲擊下加 入海綿狀鎘至810cm高,上面用lcm高得玻璃棉覆蓋，上置一個儲液漏斗，末端 穿過橡皮塞與鎘柱玻璃管緊密連接。置示意圖柱玻璃管,也可用25ml酸

9、式滴定管代用。2、2、2試劑好后，先用25ml鹽酸(0、lmol/L)洗滌,再以蒸鐳水洗2次,n時用水封蓋，隨時都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層11水覆蓋鎘柱。使用完畢后，應先以25ml鹽酸(0. lmol/L)洗滌，再以水洗2 氨緩沖溶液（PH9、69、7）:量取20ml鹽酸加50ml蒸鐳水，混勻后加 50ml氨水，用水定容至1 000ml。 稀氨緩沖溶液:取50ml氨緩沖溶液，用水定容至500mlo 對氨基苯磺酸溶液（4g/L）。 鹽酸蔡乙二胺溶液（2g/L） o 鹽酸溶液（0、lmol/L）:吸取8、4ml鹽酸，用水稀釋至1 000mlo 硝酸鈉標準儲備液:準確稱取0、123 2g硝

10、酸鈉（已于110120°C干燥 至恒重，相當于0、1000g亞硝酸鈉），以重蒸水溶解，移于500ml容量瓶中并定容。 此液濃度為200 P g/ml亞硝酸鈉。 硝酸鈉標準使用液:臨用時吸取標準液2、50ml置于100ml容量瓶中， 加水定容。此液濃度為5 P mg/ml亞硝酸鈉。 亞硝酸鈉標準使用液同亞硝酸鹽得測定。2、3操作步驟2、3、1樣品得處理。同亞硝酸鹽測定。2、3、2鎘柱還原效率得測定 先以25ml稀氨緩沖洛液沖洗鎘柱，流速控制在35ml/min（以滴定管 代替得,可控制在23ml/min）。 吸取20ml硝酸鈉標準使用液，加入5ml稀氨緩沖溶液，混勻，注入儲液 漏斗，使流

11、經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液，當儲液中溶液流完后，再加5ml水 置換柱內(nèi)留存溶液。將全部收集液如前經(jīng)鎘柱再還原一次,第二次流出液收集于 100ml容量瓶中，再用20ml水洗滌鎘柱,共洗滌3次，洗滌液收集于同一容量瓶中, 加水至刻度,混勻。 吸取10.00ml還原后得標準液（相當于10mg亞硝酸鈉）于50ml比色管 中，加人2、0ml對氨基苯磺酸溶液（4g/L）,混勻，靜置35min,各加入1、0ml鹽 酸蔡乙二胺溶液（2g/L）,加水至刻度，混勻，靜置15min,用2cm比色杯，于538nm 處測定吸光度并繪制標準曲線。根據(jù)標準曲線計算測得結果。還原效率大于98% 為符合要求。式中:x還原效率， ;A測得亞硝酸鹽得含量，ug;10測定用溶液相當于亞硝酸鹽得含量，ugo2、3、3樣品中亞硝酸鹽總量測定 樣液還原:吸取20ml樣品處理液于50ml燒杯中，加5ml氨緩沖溶液， 混勻后注入儲液漏斗中，使流經(jīng)鎘柱還原，以下按鎘柱還原效率測定操作進行，收 集還原后得樣液于100ml容量瓶中并定容。 吸取1020ml還原后得樣液于50ml比色管中，以下按鎘柱還原效率測 定操作進行，測得吸光度，從標準曲線上查出亞硝酸鹽量。2、3、4亞硝酸鹽測定吸取40ml樣品處理液于50ml比色管中，按亞硝酸測定操作進行,測定吸光度, 從標準曲線上查出亞硝酸鹽含量。2、4結果計算式中：X硝酸鹽含量