用紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨基作用ppt課件

1、Identification of the transaminationby paper chromatography Exp.9Exp.9 用紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨基作用 Purpose(Purpose(目的目的) )1.To master the principle of transamination掌握轉(zhuǎn)氨基作用原理掌握轉(zhuǎn)氨基作用原理2.Identify the transamination by paper chromatography 用紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨基作用 PrinciplePrinciple原理）原理）1、 transaminationR2CCOOHNH2H1RCCO

2、OHOR2CCOOHOR1CCOOHNH2Hamino acid-keto acidamino acid- keto acidaminopherasetwo important aminopherasesGPTacute hepatitis）GOTmyocardial infarction）（兩種重要的轉(zhuǎn)氨酶）（兩種重要的轉(zhuǎn)氨酶） Reaction - this experimentCOOHCH2CH2COCOOH+CH3CH-NH2COOHGPTCOOHCH2CH2CH-NH2COOH+CH3C OCOOH2、the paper chromatography紙層析）紙層析）Ala, low-

3、poleGlu, high-poleThe stationary phase : Fibrin combine waterphenol , low-poleThe flowing phase:（固定相）（固定相） （流動(dòng)相）（流動(dòng)相）XsYmThe foreland of solventThe center of the speckleThe center Rf ; ，Rf coefficient of distribution = Cs/CmCs：固定相中的濃度：固定相中的濃度Cm：流動(dòng)相中的濃度：流動(dòng)相中的濃度（分配系數(shù)：（分配系數(shù)： ） Rf=Xs/YmXs：溶質(zhì)移動(dòng)的距離：溶質(zhì)移動(dòng)的距

4、離Ym：溶劑移動(dòng)的距離：溶劑移動(dòng)的距離transport ratio（遷移率）（遷移率） The influencing factor on Rf ：The structure and character of the AAThe Solvent systemTemperatureThe quality of the filter paper（影響因素（影響因素 ） 3、Color：(顯色顯色)OHOHOO2水合茚三酮水合茚三酮+ H2N-CH-COOHRONH4ONOO+RCHO+CO2羅曼氏紫羅曼氏紫Operation(Operation(操作操作) )1、 The enzymatic r

5、eaction(酶促反應(yīng)酶促反應(yīng))12100，5minsadd0.5ml Ala0.5ml aketoglutarate1.5ml bufferMix up37 , 1hr1100 10mincool23000rpm5minssupernatant 肝勻漿（兩種：已備好）（ 上清液）上清液）2、 Chromatogram(層析層析)Dont touch the filter paper by handMark with pencil , hole with toothpick Spotting the sample(點(diǎn)樣點(diǎn)樣) Chromatogram(層析層析) Drying (烘干烘干)

6、Color(顯色顯色)4(Glu ) 2 (Ala) 1(A)3(c)Results(結(jié)果）結(jié)果） X1 X1 X2 X3 X4 Y1 Y1 Y2 Y3 Y4Rf1Rf1Rf2Rf3Rf4 X Y Rf(1、assay; 2、 Ala ; 3、 control; 4、 Glu)Rf= 溶質(zhì)層析點(diǎn)中心到原點(diǎn)中心的距離X） 溶劑前沿到原點(diǎn)中心的距離Y） Discussions(討論討論)1、2、questionsAttentions(注意注意)1.手洗凈，濾紙勿污染，濾紙勿折，手洗凈，濾紙勿污染，濾紙勿折，2.點(diǎn)樣分配標(biāo)記用鉛筆點(diǎn)樣分配標(biāo)記用鉛筆1.2.3.4），），3.點(diǎn)樣點(diǎn)直徑點(diǎn)樣點(diǎn)直徑 0.4cm，1、3點(diǎn)點(diǎn)3次：干后重復(fù)次：干后重復(fù) ）；）； 2、4點(diǎn)點(diǎn)1次），點(diǎn)樣的吸管勿串用，用畢放回原處。次），點(diǎn)樣的吸管勿串用，用畢放回原處。4. 用牙簽穿洞，做濾紙芯用牙簽穿洞，做濾紙芯5.層析結(jié)束，鉛筆先標(biāo)出酚的前沿再烘干。（做記號(hào)）層析結(jié)束，鉛筆先標(biāo)出酚的前沿再烘干。（做記號(hào)）6.噴茚三酮時(shí)不要對(duì)著人噴），前沿以內(nèi)，噴均勻，。噴茚三酮時(shí)不要對(duì)著人噴），前沿以內(nèi)