pcr實(shí)習(xí)自我鑒定

1、第1頁(yè)共 15 頁(yè)竭誠(chéng)為您提供優(yōu)質(zhì)文檔 /雙擊可除per 實(shí)習(xí)自我鑒定篇一：實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)總結(jié)在這兩年半的碩士研究生生涯里，從各位老師尤其是我 的導(dǎo)師喻紅教授和各位師兄師姐、師弟師妹那里學(xué)到了很多， 這里面不僅有科研技術(shù)和理論知識(shí)，還包括很多為人處事的 道理?？傊?，兩年多的時(shí)間里我成長(zhǎng)了很多，懂得了很多， 學(xué)到了很多，我明白這些對(duì)于我今后的人生都是一筆寶貴的 財(cái)富。還記得剛一進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的那段時(shí)間，本就好奇心重的我對(duì) 什么都有興趣。師兄師姐們做實(shí)驗(yàn)時(shí)我都會(huì)從一邊看著，不 時(shí)的還會(huì)問(wèn)很多問(wèn)題。有時(shí)我的問(wèn)題很淺薄幼稚，但是師兄 師姐們都一一詳細(xì)地給我解答。有時(shí)因?yàn)樽约旱闹R(shí)積累不 足，一時(shí)還聽(tīng)不明白，翻看文

2、獻(xiàn)的效率又是非常的慢，自己 很是沮喪。這時(shí)，導(dǎo)師和師兄師姐們就會(huì)開(kāi)導(dǎo)并引導(dǎo)我一步 一步來(lái)。讓我以最快的速度融入科研生活中來(lái)。通過(guò)這兩年半的磨練，我從一個(gè)剛?cè)腴T的菜鳥(niǎo)逐漸成長(zhǎng)為一個(gè)能單獨(dú)完成各種實(shí)驗(yàn)的科研小能手。比如：基因組 DnA總 RnA 的提取，引物設(shè)計(jì)，RT-pcR 技術(shù)、熒光定量 pcR 技術(shù)，免疫組化技術(shù)，轉(zhuǎn)基因小鼠的飼養(yǎng)與管理，動(dòng)物取材與處理，第 2 頁(yè)共 15 頁(yè)細(xì)胞培養(yǎng)及 w-bloting 技術(shù)等。尤其是熒光定量pcR 技術(shù)，整板復(fù)孔之間誤差基本能控制在絕對(duì)cT 值 0.2 以下，得到了老師和師兄師姐的肯定和認(rèn)可。在這兩年多的時(shí)間里，我 也曾遇到過(guò)很多困難，面對(duì)不理想的實(shí)驗(yàn)數(shù)

3、據(jù)和結(jié)果也曾沮 喪懊惱過(guò)。有段時(shí)間還一度懷疑自己的科研能力。比如剛一 上手引物設(shè)計(jì)的時(shí)候，有很多不懂的地方，設(shè)計(jì)出來(lái)的引物 擴(kuò)增效率不高，bLAsT 方面的知識(shí)很多不會(huì)，不會(huì)摸退火溫 度條件等。后來(lái)通過(guò)一步一步努力和別人的幫助，這些很快 都能做的得心應(yīng)手?？傊?，一路走來(lái)讓我成長(zhǎng)了許多，學(xué)會(huì)了許多。更是導(dǎo) 師和同學(xué)幫我打開(kāi)了科研世界的大門，面對(duì)這個(gè)有很多未知 的世界我不知道我能走多遠(yuǎn)登多高，但是我想我不會(huì)輕言放 棄。在這里我要感謝我的導(dǎo)師喻紅教授及其它亦師亦友的老 師，還有這些朝夕相處的師兄師姐師弟師妹們。*老師您好：我叫謝光輝，是武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生 物學(xué)專業(yè)的一名碩士三年級(jí)學(xué)生

4、，本科是武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn) 專業(yè)（5 年制）。意向報(bào)考 16 年上海交通大學(xué)的博士研究生。 之前了解到上海交大的招生制度是一個(gè)導(dǎo)師每年只能招一 個(gè)博士生。所以想咨詢一下您16 年還有沒(méi)有博士研究生的指標(biāo)，本人可否報(bào)考您的博士生。百忙打擾，望見(jiàn)諒！另附個(gè)人簡(jiǎn)歷一份。篇二：20XX 年分子生物學(xué)組實(shí)習(xí)小結(jié)分子生物學(xué)室實(shí)習(xí)報(bào)告刖言分子診斷學(xué)作為一門新興的學(xué)科，在疾病的診斷、療效 監(jiān)測(cè)等多方面都逐第3頁(yè)共 15 頁(yè)漸扮演起了重要的角色，但真正能很好的 將分子生物學(xué)診斷信息運(yùn)用好的醫(yī)務(wù)工作者還只是少數(shù)，不 少醫(yī)生目前仍對(duì)傳統(tǒng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床意義和可信度仍然 懷有質(zhì)疑的態(tài)度，更不用說(shuō)一些剛發(fā)展起來(lái)的檢驗(yàn)項(xiàng)目

5、。因 此檢驗(yàn)專業(yè)的實(shí)習(xí)生不僅要掌握分子診斷學(xué)常用檢驗(yàn)項(xiàng)目 的原理、方法，更應(yīng)該孰知其臨床意義，更好的與臨床進(jìn)行 溝通，才能更好的運(yùn)用先進(jìn)的檢驗(yàn)診斷技術(shù)為患者服務(wù)。實(shí) 習(xí)目的：熟悉分子室常規(guī)的檢查項(xiàng)目，掌握標(biāo)本的簽收和處理，掌握 pcR 的原理，核酸（DnA 和 RnA 的提取，pcR 儀的使用， 熟悉核酸雜交的原理和操作方法及雜交儀的使用。了解各檢 測(cè)項(xiàng)目的臨床意義。實(shí)習(xí)內(nèi)容：1. hbVDnA 檢測(cè)（定性和定量）、hcVRnA 檢測(cè)（定量）：核酸提取是擴(kuò)增前最主要的步驟，每個(gè)環(huán)節(jié)都要注意防止交 叉污染。主要步驟：每個(gè) ep 管加 100 微升 DnA 濃縮液，再加 100 微升待測(cè)血清，震蕩

6、混勻，離心12000rpmx10min，用加樣槍棄上清，加 30 微升 DnA 提取液，震蕩，金屬?。?00C）10min，離心12000rpmx5min。提取后，配試劑，加樣，擴(kuò)增 1h45min，擴(kuò)增儀型號(hào)為 7300。分析結(jié)果。注意，金屬浴過(guò) 程中，金屬浴箱要蓋上，每個(gè)ep 管要蓋嚴(yán)，防止加熱過(guò)程中發(fā)生爆管，造成實(shí)驗(yàn)室的污染。若發(fā)生爆管，詳細(xì)記錄好 發(fā)生爆管的標(biāo)本編號(hào)，爆管發(fā)生的原因，時(shí)間等情況。hsV-ll 型病毒 DnA 檢測(cè)（定量）、hpV 病毒（6、11 型和 16、18 型） DnA 檢測(cè)（定量）的標(biāo)本均為分泌物，標(biāo)本加生理鹽第4頁(yè)共 15 頁(yè)水，震 蕩，取 1ml 至 ep

7、管，離心 12000rpmx5min，棄上清，注意沉 淀易漂起，不要講沉淀?xiàng)壍?，?50 微升 DnA 提取液，震蕩， 金屬?。?00C）10min。然后配試劑，加樣，擴(kuò)增 1h20min , pcR 儀為 7600。檢驗(yàn)結(jié)果需要與患者的病史、臨床信息綜合 分析，絕對(duì)不可僅僅只憑pcR 結(jié)果進(jìn)行疾病的診斷。2. 核酸雜交主要是指 hpV21 型檢測(cè)，標(biāo)本多為女性的陰道分泌物，首先提取 DnA,進(jìn)行核酸體外擴(kuò)增，得到擴(kuò)增 產(chǎn)物，然后金屬浴煮沸，淬火，得到大量單鏈的DnA 片段，將單鏈 DnA 片段加入到 500 微升雜交液中（之前的 DnA 提取 及淬火等操作在標(biāo)本處理間進(jìn)行，擴(kuò)增在核酸擴(kuò)增間進(jìn)

8、行）,并到產(chǎn)物分析間進(jìn)行核酸的雜交，每臺(tái)雜交儀可一次做15個(gè)標(biāo)本，應(yīng)注意防止漏液和交叉污染。3. 其他流式細(xì)胞術(shù)等，但由于標(biāo)本量較少，平時(shí)多的不多。實(shí)習(xí)存在的問(wèn)題和不足分子生物學(xué)室的實(shí)習(xí)感覺(jué)還是太過(guò)短暫，再加之實(shí)習(xí)人 數(shù)多，操作的機(jī)會(huì)少，特別是標(biāo)本少的項(xiàng)目，基本還是處于 見(jiàn)習(xí)的狀態(tài)，而且相比其他組的實(shí)習(xí)，缺乏主動(dòng)思考的的動(dòng) 力，也許事理論知識(shí)學(xué)習(xí)不夠扎實(shí)，也許是跟老師交流太少，在以后的學(xué)習(xí)和工作中，應(yīng)加強(qiáng)相關(guān)學(xué)習(xí)，真正掌握好這這 一門新興的學(xué)科，為今后的學(xué)習(xí)、該工作或者科研服務(wù)實(shí)習(xí)感想：一個(gè)月的實(shí)習(xí)很快結(jié)束了，每天其實(shí)都在做著大量的重 復(fù)工作，但是我并第5頁(yè)共 15 頁(yè)沒(méi)有因此而感到厭煩，相反

9、我覺(jué)得這是一 門藝術(shù)，因?yàn)闆](méi)有誰(shuí)能保證 2 次加樣的量是完全一樣的，而 我們能做的就是是通過(guò)不斷的練習(xí)，規(guī)范我們的操作，使每 次加樣量盡可能的減小誤差，會(huì)做不代表能做好，真正的快 樂(lè)就在于，將別人認(rèn)為枯燥無(wú)聊的工作做的完美無(wú)瑕。分子診斷學(xué)是一門有力的科研武器，不僅可以運(yùn)用于臨 床診斷，在今后的工作中我們也可以運(yùn)用這一門學(xué)科，在學(xué) 術(shù)上進(jìn)行更深入的探索在實(shí)習(xí)結(jié)束之際，我要感謝分子生物學(xué)室每一位老師， 感謝他們耐心、親切的教導(dǎo)，是他們嚴(yán)謹(jǐn)、一絲不茍的工作 態(tài)度教育了我，是他們團(tuán)結(jié)協(xié)作、融洽的工作氣氛感染了我。 他們循循善誘給我講解，他們耐心規(guī)范了我的操作，他們給 予我很大的信任與鼓勵(lì)，。而我能做的

10、是在今后的學(xué)習(xí)和工 作中帶著一顆感恩的心認(rèn)真負(fù)責(zé)地工作，培養(yǎng)高尚的職業(yè)道 德、嚴(yán)肅的科學(xué)態(tài)度和一絲不茍的工作作風(fēng)，使自己成為一 名合格的檢驗(yàn)專業(yè)的的優(yōu)秀人員。祝福分子生物學(xué)室每一位老師工作順利、闔家幸福篇三：關(guān)于 pcR 總結(jié)pcR 總結(jié)若模板為環(huán)狀質(zhì)粒，最好先用酶將其切開(kāi)成線性分子。酵母、細(xì)菌及質(zhì)?；蚪M，每次反應(yīng)的模板最大加入量 分別為 10ng，1ng和 1pg。引物的設(shè)計(jì)原則1.引物的長(zhǎng)度應(yīng)適宜，一般要求 1825bp, 對(duì)引物中兩個(gè)引物之間的長(zhǎng)度差異應(yīng)小于3bp。第6頁(yè)共 15 頁(yè)2 .基本成分：g+c 的含量一般為 40%60%四種堿基應(yīng)隨機(jī)的分布，避免堿基堆積的現(xiàn)象。尤其引物的3

11、端，不應(yīng)有連續(xù)的 3 個(gè) g 或 c,否則會(huì)使引物與核酸的 g 或 c 富集 區(qū)互補(bǔ)從而影響 pcR的特異性。3. 引物自身：引物自身不應(yīng)有反向重復(fù)序列或者大于 3bp 的自身互補(bǔ)序列，否則引物自身會(huì)折疊形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)， 將影響引物與待增 DnA 中的靶序列的雜交結(jié)合。4. 引物之間：引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免 3端的互補(bǔ)重疊以免形成引物二聚體。由于pcR 反應(yīng)體系中含有高濃度的引物，即使引物之間存在極為微弱的互補(bǔ)作用也會(huì)使引物相互雜交，最終得到引物二聚體的擴(kuò)增產(chǎn)物。若引物二聚體在 pcR 反應(yīng)的早期形成，它們將通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)DnA聚合酶、引物及四種單核苷酸從而抑制待增DnA 的擴(kuò)增。通過(guò)精

12、心設(shè)計(jì)引物、應(yīng)用熱啟動(dòng)pcR(hotstartpcR) 或者降落pcR(touchdownpcR)及特制的 DnA 聚合酶，可以減少引物二 聚體的生成。5.3末端：引物的 3端(羥基端)是引發(fā)延伸的起 點(diǎn)，因此一定要與模板準(zhǔn)確配對(duì)，應(yīng)盡量避免在引物3端 的第一位堿基是 A。引物 3端最佳堿基的選擇是 g 和 c,因 為他們形成的堿基配對(duì)比較穩(wěn)定。6. 溶解溫度：3端引物和 5端引物應(yīng)有相似的 Tm 值第7頁(yè)共 15 頁(yè)(不同序列的 DnA Tm 值不同。DnA 中 g-c 含量越高，Tm 值 越高，成正比關(guān)系。),其差別不應(yīng)大于 5C。擴(kuò)增產(chǎn)物與引 物的 Tm 值的差別應(yīng)小于 10C,以確保

13、pcR 循環(huán)中的擴(kuò)增產(chǎn) 物有效的變性。8. 引物的特異性：引物與非特異擴(kuò)增序列的同源性不要 超過(guò) 70%或有連續(xù)8 個(gè)堿基同源。9. 引物的簡(jiǎn)并性：引物的 3端應(yīng)為保守的氨基酸序列，即采用簡(jiǎn)并密碼較少的氨基酸如met、Trp ,且要避免三聯(lián)體密碼第三個(gè)堿基的擺動(dòng)位置位于引物的3端。設(shè)計(jì)引物時(shí)保證在最后 5 個(gè)核苷中含有 3 個(gè) A 或 To引物的用量在 pcR 反應(yīng)體系中，引物的濃度一般要求在 0.10.5 卩 m之間，這一引物濃度足以使1kb 的 DnA 片段在 pcR 反應(yīng)體系中循環(huán)擴(kuò)增 30 次。引物濃度過(guò)低，則產(chǎn)物量低；引物濃度 過(guò)高則會(huì)促進(jìn)引物二聚體的形成以及非特異性產(chǎn)物的形成。反應(yīng)緩沖系統(tǒng)反應(yīng)緩沖系統(tǒng)提供 pcR 反應(yīng)所必需的合適的酸堿度和某些離子。目前最常用的緩沖液是1050mmol/L 的Tris-hcl(ph8.38.8, 20C)，在 72C時(shí)，其 ph 值為 7.2 左右。反應(yīng)緩沖系統(tǒng)中還含有Kcl , 50mm 以內(nèi)的 Kcl 有利于引物的退火，而 50mn 以上的 Kcl 則抑制 TaqDnA 聚合酶的活性。然而，也有人認(rèn)為含有 50mmKcl 的緩沖系統(tǒng)有利于大于 500bp第8頁(yè)共 15 頁(yè)的 DnA 片段的擴(kuò)增，然而將緩沖系統(tǒng)中的Kcl 濃度提高到70100mm 則有利于提高較小的 DnA 片段的擴(kuò)增產(chǎn)量。mg