疫苗制劑工藝穩(wěn)定性研究

1、制劑工藝研究技術(shù)路原液外觀及性狀澄明度色澤 鑒定分子量大小的純度測(cè)定應(yīng)采用經(jīng)過(guò)論證能指示穩(wěn)定性分析方法 電荷異構(gòu)體的純度測(cè)定雜質(zhì)及純度初步穩(wěn)定性指標(biāo)的建立及確證生物活性制定內(nèi)部一級(jí)參考物質(zhì)冷凍干燥，制成凍干制品制劑處方的初步確定及驗(yàn)證制劑處方的初步篩選原液強(qiáng)制破壞試驗(yàn)雜質(zhì)及純度利用凍干顯微鏡，確定處方溶液的共熔點(diǎn)，及共晶點(diǎn)。優(yōu)化凍干曲線原液擬冷凍貯藏的穩(wěn)定性考察高溫，高于加速條件10有助于確定可能的降解產(chǎn)物，幫助了解降解途徑和分子內(nèi)在的穩(wěn)定性外觀性狀賦形劑相關(guān)降解監(jiān)控注射制劑相關(guān)要求效價(jià)反映穩(wěn)定性指標(biāo)凍干制品溶解后的穩(wěn)定性試驗(yàn)包裝容器/閉塞物的選擇表面活性劑的選擇抗氧化劑的選擇氨基酸類選擇多糖

2、類選擇單因素影響實(shí)驗(yàn)光穩(wěn)定性試驗(yàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)制劑穩(wěn)定性研究加速穩(wěn)定性試驗(yàn)優(yōu)化凍干，工藝?yán)肈OE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件，探討多因素相互交互影響，對(duì)制劑處方進(jìn)行優(yōu)化緩沖體系的選擇（協(xié)助QC，幫忙完成）較寬pH值范圍評(píng)價(jià)光穩(wěn)定性試驗(yàn)氧化反應(yīng)（參考文獻(xiàn)：ICHQ5C,ICHQ1B, 生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則，中國(guó)藥典2020版）反復(fù)凍融實(shí)驗(yàn)（凍干制劑省略）震蕩實(shí)驗(yàn)（凍干制劑省略）第一章 原液擬冷凍貯藏的穩(wěn)定性考察國(guó)內(nèi)方面根據(jù)生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則相關(guān)要求：研究樣品通常包括原液、成品、中間產(chǎn)物及產(chǎn)品自帶的稀釋液或是重懸液。凡涉及到不連續(xù)操作的生產(chǎn)工藝步驟，其中間產(chǎn)物需要嚴(yán)格的貯存操作的均需要進(jìn)行

3、相應(yīng)的穩(wěn)定性研究，以證明該貯存操作不會(huì)影響到后續(xù)工藝產(chǎn)品的質(zhì)量。 穩(wěn)定性研究的樣品批次數(shù)量應(yīng)至少為三批。各個(gè)階段穩(wěn)定性研究樣品的生產(chǎn)工藝與質(zhì)量應(yīng)一致（即具有代表性），批量應(yīng)滿足穩(wěn)定性研究的需要。研究用制劑產(chǎn)品應(yīng)為來(lái)源自不同原液批次的質(zhì)量檢驗(yàn)后的合格批次。穩(wěn)定性研究樣品應(yīng)采用與實(shí)際貯存過(guò)程中相同的包裝容器與密閉系統(tǒng)進(jìn)行研究；原液或中間產(chǎn)物樣品可以采用與實(shí)際應(yīng)用中相同材質(zhì)或材料的容器和密封系統(tǒng)開(kāi)展研究。某些產(chǎn)品可能具有多個(gè)規(guī)格，如不同裝量、不同單位或是不同重量等，在穩(wěn)定性研究中可以根據(jù)檢測(cè)樣品的代表性，合理的設(shè)計(jì)研究方案，減少對(duì)部分樣品的檢測(cè)頻度或根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)（如規(guī)格）選擇部分代表性檢測(cè)項(xiàng)目。原則

4、上，濃度不一致的多種規(guī)格的產(chǎn)品，均應(yīng)按照要求開(kāi)展穩(wěn)定性研究。國(guó)際方面根據(jù)ICHQ5C相關(guān)規(guī)定：如果生產(chǎn)出來(lái)的原料藥，在生產(chǎn)后、配方或者制成成品前貯藏起來(lái)，至少應(yīng)提供3批穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，這3批應(yīng)能代表生產(chǎn)規(guī)模的生產(chǎn)和貯藏條件。在貯藏期要求大于6個(gè)月時(shí)，至少需申報(bào)6個(gè)月的穩(wěn)定性試驗(yàn)資料。貯藏期要求小于6個(gè)月時(shí)，最初申報(bào)所需的最短穩(wěn)定性資料交依不同的原料藥而定。在向管理機(jī)構(gòu)申報(bào)全套資料時(shí)，如果穩(wěn)定性資料是由試生產(chǎn)規(guī)模的發(fā)酵及純化工藝所生產(chǎn)的原料藥研究得來(lái)的，而該試生產(chǎn)規(guī)模比規(guī)?；a(chǎn)小，則申報(bào)者應(yīng)承諾在獲得批準(zhǔn)后，對(duì)最初三批規(guī)模化生產(chǎn)的原料藥進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)。進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的原料藥的質(zhì)量應(yīng)能代表用于臨

5、床前研究、臨床研究以規(guī)模化生產(chǎn)制品的質(zhì)量。此外，中試生產(chǎn)的原料藥生產(chǎn)工藝和貯存條件亦應(yīng)與規(guī)?；a(chǎn)相同。進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的原料藥應(yīng)貯藏在能充分代表其規(guī)?；a(chǎn)所使用的真實(shí)容器中，也可將用于穩(wěn)定性試驗(yàn)的原料藥置于較小容器中，但這些容器應(yīng)與規(guī)?；a(chǎn)所用的容器的材料及封口的方式相同。1 材料及儀器設(shè)備1.1 試驗(yàn)材料：留樣袋（廠家：待定 ； 批號(hào)：）；1.2 儀器設(shè)備：2 試驗(yàn)方法2.1 批的選擇 進(jìn)行正式穩(wěn)定性研究，至少提供三批規(guī)?；a(chǎn)原料藥。2.2 包裝容器將用于穩(wěn)定性試驗(yàn)的原料藥置于較小容器50ml PALL 留樣袋。其該容器與規(guī)?；a(chǎn)所用的容器的材料及封口的方式相同。2.3 試驗(yàn)條件2.

6、3.1 擬冷凍貯藏的原料藥研究放置條件申報(bào)數(shù)據(jù)涵蓋的最少時(shí)間周期長(zhǎng)期試驗(yàn)-20±512個(gè)月2.3.2 偏離標(biāo)簽上所建議的貯藏條件研究放置條件申報(bào)數(shù)據(jù)涵蓋的最少時(shí)間周期偏離貯藏條件試驗(yàn)5±3適當(dāng)時(shí)間（暫定3個(gè)月）2.4 試驗(yàn)頻率對(duì)于長(zhǎng)期試驗(yàn)，第一年每3個(gè)月一次，第二年每6個(gè)月一次，以后每年一次，直到建議的再試驗(yàn)期。對(duì)于偏離貯藏條件的試驗(yàn)，前一個(gè)月每周進(jìn)行一次，后續(xù)，每月一次，持續(xù)兩個(gè)月。2.5 取樣量 以上試驗(yàn)取樣量為全檢用量的10倍2.6穩(wěn)定性留樣數(shù)量除有特殊規(guī)定，穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣量為檢驗(yàn)次數(shù)×2倍全檢用量，每次至少保證有2倍的化驗(yàn)量。如按照常規(guī)試驗(yàn)頻次，進(jìn)行36個(gè)

7、月的長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)需要14倍的全檢用量，加速穩(wěn)定性試驗(yàn)需要8倍的全檢用量。0月數(shù)據(jù)采用產(chǎn)品初次檢驗(yàn)或放行檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)。2.7檢驗(yàn)周期檢驗(yàn)周期內(nèi)的時(shí)間規(guī)定，以首次檢驗(yàn)的日期為準(zhǔn)，長(zhǎng)期試驗(yàn) 1年內(nèi)最多延后5天檢測(cè)，1年后最多延后10天檢測(cè)；加速試驗(yàn)6個(gè)月內(nèi)最多延后3天，不得提前檢驗(yàn)。檢測(cè)周期結(jié)束后，對(duì)含量、有關(guān)物質(zhì)等可量化項(xiàng)目，尤其質(zhì)量有較大變化的產(chǎn)品要做趨勢(shì)分析。采用趨勢(shì)分析和統(tǒng)計(jì)的方法，確定產(chǎn)品的有效期或復(fù)驗(yàn)期。有時(shí)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示降解和變異非常小，這時(shí)通常不必進(jìn)行正式的統(tǒng)計(jì)分析，只需提供正當(dāng)?shù)睦碛伞?.8 穩(wěn)定性重點(diǎn)考察指標(biāo)2.8.1 等電點(diǎn)檢測(cè)。依法測(cè)定（中國(guó)藥典三部，通則0541）應(yīng)符合規(guī)定

8、2.8.2 pH值檢測(cè)。依法測(cè)定（通則0631）2.8.3 純度和雜質(zhì)2.8.3.1 高效液相色譜法（1）分子排阻色譜法（通則0512），檢測(cè)聚集體及降解產(chǎn)物（2）離子交換色譜法（通則0512），檢測(cè)電荷異構(gòu)體等相關(guān)產(chǎn)物2.8.3.2毛細(xì)管凝膠電泳法（CE-SDS）（1） CE-SDS還原電泳 依法測(cè)定（通則3127）（2） CE-SDS非還原電泳 依法測(cè)定（通則3127）2.8.4 生物活性檢測(cè) 待定2.8.5 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 依法測(cè)定（通則 1143）2.8.6 肽圖檢測(cè)依法測(cè)定（通則3405）3.2 穩(wěn)定性數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)參照ICHQ1E評(píng)價(jià)。4.結(jié)果與討論長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察試驗(yàn)記錄（I）產(chǎn)品名稱：

9、 產(chǎn)品代號(hào)： 產(chǎn)品批號(hào)： 儲(chǔ)存溫濕度： 日期： 檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)限度儲(chǔ) 存 期 及 測(cè) 試 結(jié) 果0個(gè)月3個(gè)月6個(gè)月9個(gè)月12個(gè)月18個(gè)月24個(gè)月36個(gè)月檢驗(yàn)結(jié)論備 注檢驗(yàn)人員主管人員原液強(qiáng)制降解試驗(yàn)氧化反應(yīng)依據(jù)ICHQ5C及生物制品穩(wěn)定性指導(dǎo)原則相關(guān)規(guī)定，制定如下氧化試驗(yàn)方案流程圖：定義：No degradation: 符合QC制定標(biāo)準(zhǔn)范圍 Sufficient degradation: 各項(xiàng)指標(biāo)不符合QC相關(guān)規(guī)定 Total degradation:各項(xiàng)指標(biāo)不符合QC相關(guān)規(guī)定，主成分80%-100%降解Sufficient degradationSufficient degradation原液

10、需要在更溫和的條件下進(jìn)行反應(yīng)Total degradation1%H2O2 24h 37.5Total degradation1%H2O2 30min 37.5Sufficient degradationSufficient degradationSufficient degradationSufficient degradationNo degradationNo degradationNo degradation3%H2O2 24h 37.510%H2O2 24 h 37.530%H2O2 24 h 37.5原液可認(rèn)為不受氧化影響ACCEPTNo degradation3%H2O2 6 h

11、 37.5原液后續(xù)制劑需添加抗氧化劑或者采取相應(yīng)的抗氧化措施1材料及儀器設(shè)備1.1 試驗(yàn)材料：西林瓶（廠家：肖特新康，批號(hào)：）；色譜柱：；雙氧水（廠家： 批號(hào)：）；0.22um水系濾膜（廠家：，批號(hào)：）；1.2 儀器設(shè)備：AcQuity UPLC/Waters；Millipore 純水儀；水浴鍋（廠家）；2 試驗(yàn)方法參照上述氧化試驗(yàn)流程圖。取樣數(shù)量為全檢用量的10倍。3. 檢測(cè)指標(biāo)3.1純度和雜質(zhì)高效液相色譜法（1）分子排阻色譜法（通則0512），檢測(cè)聚集體及降解產(chǎn)物（2）離子交換色譜法（通則0512），檢測(cè)電荷異構(gòu)體等相關(guān)產(chǎn)物4. 結(jié)果與討論原液強(qiáng)制降解試驗(yàn)光穩(wěn)定性試驗(yàn)依據(jù)ICHQ5C及生物

12、制品穩(wěn)定性指導(dǎo)原則相關(guān)規(guī)定，制定如下光穩(wěn)定性試驗(yàn)方案流程圖：No DegradationSufficient Degradation/Total Degradation產(chǎn)品需要采用避光的包裝容器不需要采用避光的包裝容器光不穩(wěn)定光穩(wěn)定性樣品應(yīng)暴露總照度不低于1.2×106Lux·hr,，近紫外能量不低于200w ·hr/m2 原液定義：No degradation: 符合QC制定標(biāo)準(zhǔn)范圍 Sufficient degradation: 各項(xiàng)指標(biāo)不符合QC相關(guān)規(guī)定 Total degradation:各項(xiàng)指標(biāo)不符合QC相關(guān)規(guī)定，主成分80%-100%降解1材料及儀器設(shè)

13、備1.1 試驗(yàn)材料：西林瓶（廠家：肖特新康，批號(hào)：）；色譜柱：； 0.22um水系濾膜（廠家：，批號(hào)：）；1.2 儀器設(shè)備： AcQuity UPLC/Waters；Millipore 純水儀；Memmert CLIMATE CHAMBER ICH/ICHL 恒溫恒濕箱（光照強(qiáng)度為約6000Lux,紫外強(qiáng)度為5W/m2 ）；2 試驗(yàn)方法參照上述光穩(wěn)定性試驗(yàn)流程圖。取樣數(shù)量為全檢用量的10倍。強(qiáng)光照射試驗(yàn)將樣品開(kāi)口放在Memmert CLIMATE CHAMBER ICH/ICHL 恒溫恒濕箱（光照強(qiáng)度為約6000Lux,紫外強(qiáng)度為5W/m2 ）裝置內(nèi)，第二天關(guān)閉紫外燈，于第8天和第12天取樣，

14、按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，特別要注意樣品的外觀變化。對(duì)照樣品采用錫箔紙，采用含有避光材料的相同材質(zhì)西林瓶，或者采用錫箔紙進(jìn)行避光包裝。3. 檢測(cè)指標(biāo)3.1純度和雜質(zhì)高效液相色譜法（1）分子排阻色譜法（通則0512），檢測(cè)聚集體及降解產(chǎn)物（2）離子交換色譜法（通則0512），檢測(cè)電荷異構(gòu)體等相關(guān)產(chǎn)物4. 結(jié)果與討論原液強(qiáng)制降解試驗(yàn)酸堿條件考察依據(jù)ICHQ5C及生物制品穩(wěn)定性指導(dǎo)原則相關(guān)規(guī)定，制定如下酸堿條件考察抗體穩(wěn)定性試驗(yàn)方案流程圖：原液用0.1N HCL/0.1N NaOH調(diào)節(jié)原液pH 為4.0; 4.5;5.0;5.5;6.0; 6.5;7.0;7.5;8.0供后續(xù)制劑緩沖體系選擇做參

15、考加入等摩爾0.1N HCL/0.1N NaOH，進(jìn)行中和后，再檢測(cè)各指標(biāo)37放置21天/30天1材料及儀器設(shè)備1.1 試驗(yàn)材料：西林瓶（廠家：肖特新康，批號(hào)：）；色譜柱：； 0.22um水系濾膜（廠家：，批號(hào)：）；氫氧化鈉（廠家：，批號(hào)：）； 鹽酸（廠家：，批號(hào)：）；1.2 儀器設(shè)備： AcQuity UPLC/Waters；Millipore 純水儀；Memmert CLIMATE CHAMBER ICH/ICHL 恒溫恒濕箱；METER FE20 數(shù)顯酸度計(jì);2 試驗(yàn)方法參照上述試驗(yàn)流程圖。將樣品放置于恒溫恒濕箱，設(shè)定溫度為37，于21天/30天取出，加入等摩爾HCL或者NaOH，進(jìn)行中和后，取樣檢測(cè)。按穩(wěn)