三氯蔗糖成品的檢測方法

1、標(biāo)準(zhǔn)物料名稱三氯蔗糖測試工程色澤、組織狀態(tài)、氣味、含量、比旋光、水分、灼燒殘?jiān)?、水解物?相關(guān)物、甲醇、砷、重金屬、鑒別、PH、顆粒度、堆積密度、三苯氧磷、細(xì)菌總數(shù)、霉菌酵母菌、鉛、溶液的顏色和澄清度、口感1 色澤、組織狀態(tài)1.1儀器潔凈的白搪瓷托盤1.2試劑無1.3實(shí)驗(yàn)步驟取20g樣品置于清潔、枯燥的白瓷盤中,在相同的自然或照明光線下,觀察其色澤和組織狀態(tài).1.4考前須知保證使用的取樣簽、取樣袋干凈無污染,取完樣后立即扎緊袋口.2 氣味2.1儀器留樣瓶2.2試劑無2.3實(shí)驗(yàn)步驟三氯蔗糖倒入留樣瓶中,在塑料留樣瓶中嗅其味.2.4考前須知保證使用的取樣簽、取樣袋干凈無污染,留樣瓶無污染.3 含量

2、3.1儀器和設(shè)備高效液相色譜儀配備示差折光檢測器、電子天平3.2試劑色譜純乙腈、三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品.3.3實(shí)驗(yàn)步驟 參考色譜條件a色譜柱：SUPELCOSILTMLC- 184.6*2505艸.或其他等效色譜柱.b流動相：將150mL乙腈與850mL水混合均勻后,用0.45卩m濾膜過濾,超聲脫氣 后備用.c柱溫：30 C.d流動相流速：1.0 mL/min .e進(jìn)樣量：60 Lf三氯蔗糖保存時間：9min左右,為保證獲得所需的保存時間,必要時可以調(diào)整流動 相的比例.注：系統(tǒng)適用性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次,所得響應(yīng)面積的RSD不大于2.0 %.分析步驟標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：稱取 0.1500g三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品

3、精確至 O.OOOIg ,溶于預(yù)先準(zhǔn)確稱 取的49.0000g純水中,所得溶液用 0.45卩m濾膜過濾,濾液備用.試樣液的制備：稱取約 0.1500試樣精確至O.OOOIg ,溶于預(yù)先準(zhǔn)確稱取的 49.0000g 純水中,所得溶液用0.45卩m濾膜過濾,濾液備用.測定在3.3參考色譜條件下,分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣液進(jìn)行測定,進(jìn)樣量為60 uL,重復(fù)進(jìn)樣一次,計(jì)算出其主峰面積平均值.計(jì)算結(jié)果X仁Au*Ms*P/ As*Mu *100式中：X1 試樣中三氯蔗糖的含量,% ；Au試樣液色譜主峰面積的平均值；Ms稱取三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量,g ;P 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品的含量,%;As標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜主峰面積的平均值

4、； Mu稱取的試樣質(zhì)量,g ;實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn).3.4考前須知a系統(tǒng)適應(yīng)性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次,所得響應(yīng)面積的RSD不大于2.0 %.b進(jìn)樣時不得有氣泡,并且進(jìn)樣速度保持勻穩(wěn)推進(jìn).4 比旋光°4.1儀器旋光儀、容量瓶、電子天平4.2試劑純水4.3實(shí)驗(yàn)步驟精確稱取1g 精確至0.0001g 待測樣品,用純水溶解,定容至 50ml同時做空白.先 將裝有空白液的試管放入樣品室,將測量示數(shù)清零.然后將待測樣品注入試管, 同方向放入樣品室,測量其旋光度.計(jì)算公式：【a =50* a /2*m+0.1*T -20其中：仏所測得旋光度；m樣品質(zhì)量T測定條件下的溫度兩次平行測

5、定結(jié)果不超過 0.5%,取兩次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為測定結(jié)果.4.4考前須知a使用前調(diào)試儀器先要開電源開關(guān),預(yù)熱約 30分鐘；b樣品的測試溫度要限制在室溫20 C± 0.5 C ；c從溶解樣品到測試的整個過程時間要短,預(yù)防樣品因溫度和容積變化帶來測試偏差；d測試過程中試液不能滴漏到儀器上,測量時旋光管中的氣泡要趕到球中.5 水分5.1儀器水分測定儀、注射器、天平 5.2試劑無水甲醇、卡爾費(fèi)休試劑、純水 5.3實(shí)驗(yàn)步驟在卡爾費(fèi)休滴定池內(nèi)先注入約20ml左右的無水甲醇,用卡爾費(fèi)休試劑滴定至終點(diǎn),然后用10卩l(xiāng)進(jìn)樣針抽取10卩l(xiāng)純水樣,注入滴定池,再用卡爾費(fèi)休試劑滴定,記下讀數(shù)V1,緊

6、接著稱取1g左右三氯蔗糖試樣,精準(zhǔn)至 0.0001g,記下讀數(shù)m,注入滴定池,用卡爾費(fèi)休 試劑再次滴定,記下讀數(shù)V2,最后按下式計(jì)算：W=V/Vi*m*100*100%mlml兩次平行測定結(jié)果之差值不大于0.03%.其中：Vi滴定純水時消耗的卡爾費(fèi)休試劑的體積,V2滴定試樣時消耗的卡爾費(fèi)休試劑的體積, m 試樣的質(zhì)量,gw一水精制的水分取兩次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為測定結(jié)果.5.4考前須知a保證所使用的試劑在有效期內(nèi)；b稱量、計(jì)算必須準(zhǔn)確無誤.6 灼燒殘?jiān)?.1儀器電子天平、馬弗爐、枯燥器6.2試劑試劑硫酸 6.3實(shí)驗(yàn)步驟精確稱取1.0000g樣品于恒重的坩堝中,放電爐上燒至無煙,冷卻10分

7、鐘后加1ml硫酸,繼續(xù)燒至無煙放置于800 C的馬弗爐中,3小時后取出置于電爐上稍冷卻數(shù)秒鐘,再置于枯燥器中冷卻至室溫稱量.計(jì)算公式：?=m1-m2m*100%其中：m1為坩堝+試樣灼燒前的質(zhì)量,g ;m2為坩堝+試樣灼燒后的質(zhì)量,g ;m為樣品質(zhì)量,g.6.4考前須知a稱樣量必須精準(zhǔn)；b加硫酸時一定要等冷卻 10分鐘后才加,以防坩堝爆裂;c保證使用的坩堝是恒重的,并且一定要放在枯燥器中冷卻.7 PH7.1儀器酸度計(jì)、溫度計(jì)7.2試劑pH=4.00,6.86, 9.18 的緩沖溶液7.3實(shí)驗(yàn)步驟樣品制備：準(zhǔn)確稱取 10g 精準(zhǔn)至0.0002g 的樣品于100ml小燒杯中,加90ml的純 水溶解

8、.開機(jī)預(yù)熱30min,測量前用PH=4.00,6.86,9.18的緩沖溶液進(jìn)行儀器校準(zhǔn),再用卷 紙擦拭干,將電極插入樣品,按讀數(shù)鍵,當(dāng)出現(xiàn)根號后,記下讀數(shù).7.4考前須知a測量前一定要開機(jī)預(yù)熱,并進(jìn)行3點(diǎn)校正；b使用完電極要放在飽和氯化鉀溶液中.8 相關(guān)物8.1儀器薄層層析板：涂有 0.2mm厚度的C18烷基修飾的硅膠或其他等效物質(zhì).8.2試劑三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)> 98.0%、乙腈、硫酸、無水甲醇、氯化鈉溶液： 50g/L.8.3實(shí)驗(yàn)步驟展開劑的制備：氯化鈉溶液：乙腈=70 : 30 體積比顯色劑的制備：配制 15%硫酸的甲醇溶液體積分?jǐn)?shù).標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：稱取0.5g三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品

9、精確至0.001g ,溶解于5.0mL甲醇中, 此為溶液C.吸取0.5mL的溶 液C,用無水甲醇 定容至100mL ,此為溶 液D. 試樣液的制備：稱取 1.0g試樣精確至0.001g ,溶解于10.0mL甲醇中.取溶液C、溶液D和試樣液各5L點(diǎn)于薄層層析板底部,將層析板置于盛有展開劑 的層析缸中,待展開的溶劑前沿移至15cm 時后取出薄層層析板,放置,待展開劑揮發(fā)干凈后用顯色劑噴霧,然后于 125 C ±2C烘箱中加熱10min.試樣液主色斑的 Rf值應(yīng)與溶液 C主色斑的Rf值相同,且試樣液中其他色斑的呈色應(yīng)不深于溶液D主色斑的呈色.Rf值一一試樣展開后斑點(diǎn)到原點(diǎn)的距離與溶劑前沿到

10、原點(diǎn)的距離的比值.8.4考前須知a所有試劑都在有效期內(nèi)；b手拿薄層層析板時,不要碰到涂有0.2mm厚度的C18烷基修飾的硅膠的一面；c在點(diǎn)板時,戴上口罩,預(yù)防薄層層析板被污染；d展開缸內(nèi)一定要干凈無污染；e原點(diǎn)不要浸在展開劑里9 水解物9.1儀器和設(shè)備薄層層析板：涂有 0.25mm 厚度的Merk硅膠60或其他等效物質(zhì).9.2試劑對氨基苯甲醚、鄰苯二甲酸、甲醇、甘露糖醇、果糖.9.3實(shí)驗(yàn)步驟顯色劑的制備：將1.23g對氨基苯甲醚有毒害性和1.66 g鄰苯二甲酸溶于100 mL 甲醇中.將溶液存放在暗處并冷藏,如果溶液退色那么已失效.標(biāo)準(zhǔn)溶液A的制備：稱取10g甘露糖醇精確至 O.OOIg,用水

11、溶解后,移入 100mL 容量瓶中,用水定容至刻度.標(biāo)準(zhǔn)溶液B的制備：分別稱取10g甘露糖醇精確至 O.OOIg 和0.04g果糖精確 至O.OOOIg,移入100mL容量瓶中,用水定容至刻度.試樣液的制備：稱取 2.5g試樣精確至O.OOIg,用5mL甲醇溶解后,轉(zhuǎn)移至 10mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度.取標(biāo)準(zhǔn)溶液A、標(biāo)準(zhǔn)溶液B和試樣液各5L,分別在同一塊薄層層析板的不同位置進(jìn) 行點(diǎn)樣,將每份溶液分5次每次1卩L點(diǎn)于板上,每次點(diǎn)樣之間要待樣點(diǎn)枯燥后再繼續(xù)點(diǎn), 3份樣點(diǎn)的面積要根本相同, 點(diǎn)樣完畢后用顯色劑噴霧后于1OO C ±2C烘箱中加熱15min ,加熱后立即在陰暗背下觀察

12、層析板,試樣液的色斑呈色不應(yīng)深于標(biāo)準(zhǔn)溶液B的色斑呈色.9.4考前須知a如果標(biāo)準(zhǔn)溶液A的點(diǎn)樣點(diǎn)變黑,說明層析板加熱時間過長,需重新制備；b對氨基苯甲醚是有毒物質(zhì),操作時注意不要和皮膚接觸；10甲醇1O.1儀器和設(shè)備氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器.1O.2試劑甲醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜純、色譜純粹丙醇、色譜純吡啶.1O.3實(shí)驗(yàn)步驟參考色譜條件a色譜柱：2.1m X4mm 內(nèi)徑玻璃柱,內(nèi)填充 O.2mmO.15mm 聚苯乙烯型色譜固 定相；或其他等效色譜柱.b載氣：氮?dú)饣蚝?c柱溫：15O Cod進(jìn)樣口溫度：2OO C oe檢測器溫度：25O C of流速：20mL/min .g進(jìn)樣量：0.2注：系統(tǒng)適用

13、性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次,所得響應(yīng)面積的相對誤差小于2.0 %.實(shí)驗(yàn)步驟內(nèi)標(biāo)溶液的制備：準(zhǔn)確吸取1.0mL正丙醇,置于100mL容量瓶中,用吡啶定容至刻度, 搖勻.移取5mL該溶液,置于500mL容量瓶中,用吡啶定容至刻度,搖勻.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確吸取2.0mL甲醇,置于100mL容量瓶中,用內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度, 搖勻.移取1.0mL該溶液,置于100mL容量瓶中,用內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度,搖勻.試樣液的制備：稱取約 2g試樣精確至O.OOIg ,用內(nèi)標(biāo)溶液溶解,移入 10mL容量瓶 中,用內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度,搖勻.在10.3參考色譜條件下,分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣液進(jìn)行測定,進(jìn)樣量為0.2 uL重

14、復(fù)進(jìn)樣一次,計(jì)算出每次進(jìn)樣甲醇峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值.結(jié)果公式：?=RU?0.00158*100%RS?MU 式中:X試樣中甲醇的含量,% ；RU 兩次進(jìn)樣試樣液中甲醇與內(nèi)標(biāo)物正丙醇峰面積之比的平均值；0.00158 標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度 X甲醇的密度X試樣液的體積2X10-4 X0.79 X10 RS 兩次進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇與內(nèi)標(biāo)物正丙醇峰面積之比的平均值；MU 稱取的試樣質(zhì)量,單位為克g.實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn).在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不大于算術(shù)平均值的10%.10.4考前須知a樣品一定要稱得精準(zhǔn)；b所使用的燒杯、進(jìn)樣瓶、注射器等一定要干凈無污染.

15、11重金屬11.1儀器50mL納氏比色管11.2試劑硝酸、硫酸、6mol/L鹽酸、1mol/L鹽酸、6mol/L氨水、1mol/L氨水、PH3.5的乙酸鹽緩沖液、酚酞指示液、飽和硫化氫水、鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液、1%硝酸11.3實(shí)驗(yàn)步驟試劑配制：6mol/L鹽酸：量取50mL鹽酸,用水稀釋至 100mL.1mol/L鹽酸：量取8.3mL鹽酸,用水稀釋至 100mL.PH3.5的乙酸鹽緩沖液：稱取 25.0g乙酸銨溶于 25mL水中,參加 45mL6mol/L 鹽酸, 用稀鹽酸或稀氨水調(diào)節(jié) PH值至3.5,用水稀釋至100mL.酚酞指示液：1%乙醇溶液.飽和硫化氫水：將硫化氫氣體通入不含二氧化碳的水中,至飽

16、和為止此溶液臨用前制備.鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取 0.1598g高純硝酸鉛,溶于 10mL1% 硝酸中,中定量移入 100mL 容量瓶中,用水稀釋至刻度.此溶液 1mL相當(dāng)于1.0mg鉛.臨用前用水稀釋至 100倍,使 成1.0mL相當(dāng)于10ug鉛可以外購之.1%硝酸：取1mL硝酸加水稀釋至 100mL.試樣處理：稱取試樣5.0g置于坩堝中,參加適量硫酸浸潤試樣,小火碳化后,加2mL硝酸和5滴硫酸,小心加熱,直到白色煙霧揮盡,移入高溫中,于550 C灰化完全,冷卻后取出,加2mL6mol/L鹽酸浸潤殘?jiān)?于水浴上慢慢蒸發(fā)至干. 用1滴濃鹽酸浸潤殘?jiān)?并加10mL水, 于水浴上再次加熱 2min,將溶液

17、移入50mL容量瓶中,如有必要須過濾,用少量水洗滌坩 堝和濾器,洗滌液一并移入容量瓶中,混勻, 每10mL該溶液相當(dāng)于1.0g試樣.在試樣灰化 同時,另取一坩堝,按上述方法座試劑空白實(shí)驗(yàn).A管：吸取含鉛量相當(dāng)于指定種金屬限量的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液不低于10ug鉛于50mL納氏比色管中如試樣經(jīng)處理,須同時吸取與試樣液等量的試劑空白液,加水至25mL,混勻,加1滴酚酞指示液,用 6mol/L稀鹽酸或1mol/L稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性酚酞紅色剛褪去, 參加pH3.5的乙酸鹽緩沖液 5mL,混勻,備用.B管：取一支與 A管所配套的納氏比色管,參加10mL-20mL或適量試樣液,加水至25mL,混勻,加1滴1%酚酞

18、指示液,用6mol/L稀鹽酸或1mol/L稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性酚 酞紅色剛褪去,參加pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,混勻,備用.C管：取一支與A、B所配套的納氏比色管,參加與B管等量的相同試樣液,再參加與A管等量的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液,加水至25mL,混勻,力口 1滴1%酚酞指示液,用稀鹽酸或稀氨水6mol/L或1mol/L調(diào)節(jié)pH至中性酚酞紅色剛褪去,參加pH3.5的乙酸鹽緩沖液 5mL, 混勻,備用.向各管中參加10mL新鮮備制的硫化氫飽和液, 并加水至50mL刻度,混勻,于暗處放 置5min后,在白色背景下觀察,B管的色度不得深于 A管的色度,C管的色度應(yīng)與 A管的 色度相當(dāng)或深于 A管的色度.1

19、1.4考前須知：a所有試劑都在有效期內(nèi)；b所用玻璃儀器都要用 10%-20%的硝酸浸泡24h以上,用自來水反復(fù)沖洗,最后用 純水沖洗；c實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用的強(qiáng)腐蝕實(shí)際時,注意平安,做好防護(hù)工作.12砷12.1儀器測砷裝置12.2試劑5%溴化汞乙醇溶液、溴化汞試紙、硝酸、1+1硫酸、1mol/L硫酸、鹽酸、20%氫氧化鈉溶液、氧化鎂、15%硝酸鎂、15%碘化鉀、40%氯化亞錫、無砷金屬鋅、酚酞指示液、 10%乙酸鉛、脫脂棉12.3實(shí)驗(yàn)步驟試劑配制：溴化汞試紙：將剪成直徑2cm的圓形濾紙片,在 5%溴化汞乙醇溶液中浸泡 1h以上,保存于冰箱中,臨用前取出置暗處陰干備用.乙酸鉛棉花：將脫脂棉浸于10%乙酸鉛

20、溶液中,2h后取出晾干.40%氯化亞錫溶液：稱取 20g氯化亞錫,溶于 50mL鹽酸.1 + 1硫酸：將1體積濃硫酸慢慢參加 1體積水中,冷卻后使用.1mol/L硫酸：量取28mL濃硫酸,慢慢參加水中,用水稀釋至500mL.酚酞指示液：1%乙醇溶液.砷標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取 0.1320g于硫酸枯燥器中枯燥至恒重的三氧化二砷,溶于5mL20%氫氧化鈉溶液中,溶解后,參加25mL1mol/L硫酸,移入1000mL容量瓶中,加新煮沸冷卻的水稀釋至刻度.此溶液I.OOmL相當(dāng)于O.IOOg砷.臨用前取1.0mL,力口 1.0mL1mol/L硫酸與100mL容量瓶中,加新煮沸冷卻的水稀釋至刻度,此溶液1.0m

21、L相當(dāng)于1.0ug砷可以外購之.試樣的處理：取5.0g試樣于瓷坩堝中,加10mL15%硝酸鎂溶液,參加1g氧化鎂溶液, 混勻,浸泡4h,于低溫或水浴上蒸干,用小火加熱至炭化完全,將坩堝移至高溫爐中,在 550 C以下灼燒至灰化完全,冷卻后取出,加適量水濕潤灰分,參加酚酞溶液數(shù)滴,再緩緩 參加鹽酸1+1溶液至酚酞紅色褪去,然后將溶液移入50mL容量瓶中必要時過濾,用少量水洗滌坩堝 3次,洗滌并容量瓶中,加水至刻度,混勻.每10mL試樣液相當(dāng)于1.0g試樣.取相同量的氧化鎂、硝酸鎂、按上述方法做空白試驗(yàn).吸取一定量的試樣液和砷的限量標(biāo)準(zhǔn)液含砷I.Oug或2.0ug ,分別置于錐形瓶中,加5mL鹽酸

22、試樣液中如含硫酸或鹽酸, 那么要減去試樣液中所含酸的毫升數(shù),加水至30mL ,再加5mL15%碘化鉀溶液,5滴40%氯化亞錫溶液,混勻,室溫放置10min.向上述錐形瓶中,各參加 3g無砷金屬鋅,并立即塞上預(yù)先裝有乙酸鉛棉花及溴化汞試 紙的測砷裝置,于 25C放置1h ,取出砷斑進(jìn)行比擬,試樣的砷斑不得深于砷的限量標(biāo)準(zhǔn)的 砷斑.12.4考前須知：a所有試劑都在有效期內(nèi)；b所用玻璃儀器都要用10%-20%的硝酸浸泡24h以上,用自來水反復(fù)沖洗,最后用純水沖洗；c實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用的強(qiáng)腐蝕實(shí)際時,注意平安,做好防護(hù)工作.13顆粒度13.1儀器振篩儀、電子天平13.2試劑無13.3實(shí)驗(yàn)步驟稱取10.0g樣品

23、,根據(jù)樣品的規(guī)格選擇相應(yīng)目數(shù)的篩網(wǎng),將樣品倒置篩網(wǎng)上,蓋好蓋子.放置振篩儀上,并設(shè)置振篩時間為5分鐘.振完后,根據(jù)樣品規(guī)格分別稱量篩網(wǎng)上、篩網(wǎng)下樣品的質(zhì)量m.計(jì)算公式：m/10*100%13.4考前須知根據(jù)樣品規(guī)格要求,篩網(wǎng)上、篩網(wǎng)下樣品質(zhì)量不能弄混淆.14堆積密度14.1儀器10ml容量瓶、電子天平14.2試劑無14.3實(shí)驗(yàn)步驟將10ml容量瓶放置天平上,清零,然后將樣品放置稱量紙上倒入容量瓶中,力度均勻 地?fù)u晃40-50下,直至樣品到容量瓶刻度線.放置天平稱量,記下讀數(shù)m.計(jì)算公式：m/1014.4考前須知一定要力度均勻慢慢地?fù)u晃.15鑒別在檢測三氯蔗糖含量試驗(yàn)中,試樣液在液相色譜圖中的主

24、峰保存時間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液中三氯蔗糖的保存時間相同.16三苯氧磷16.1儀器和設(shè)備高效液相色譜儀配備紫外檢測器、天平16.2試劑色譜純乙腈、三苯氧磷標(biāo)準(zhǔn)品.16.3實(shí)驗(yàn)步驟參考色譜條件a色譜柱：C18反相色譜柱,8mm x 10cm,粒度5卩m.b流動相：將670mL乙腈與330mL水混合均勻后,用0.45卩m濾膜過濾,超聲脫氣 后備用.c柱溫：室溫.d流動相流速：1.5 mL/min .e進(jìn)樣量：25卩L.f三苯氧磷保存時間：6min左右,為保證獲得所需的保存時間,必要時可以調(diào)整流動 相的比例.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精確稱取 0.1000g三苯氧磷準(zhǔn)品精確至 0.0001g,用流動性定溶 到10mL的

25、容量瓶中,再從中移取 1.0mL溶液用流動相定溶到100mL容量瓶,再把該溶液稀 釋100倍,所得溶液用0.45卩m濾膜過濾,濾液備用.試樣液的制備：稱取約 0.1000試樣精確至0.0001g ,記錄下樣品的重量.用流動性 定容到10mL的容量瓶中,所得溶液用 0.45卩m濾膜過濾,濾液備用.在17.3參考色譜條件下,分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣液進(jìn)行測定,進(jìn)樣量為25 uL重復(fù)進(jìn)樣一次,計(jì)算出其主峰面積平均值計(jì)算公式：At ?10000?=AS?Wt式中：X三苯氧磷的含量；At 三苯氧磷的峰面積；AS 樣品的峰面積；Wt 樣品的稱樣量；mg.16.4考前須知a系統(tǒng)適應(yīng)性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次,所得

26、相應(yīng)面積的相對誤差不大于2.0% ；b進(jìn)樣時不得有氣泡,并且進(jìn)樣速度保持勻穩(wěn)推進(jìn).17細(xì)菌總數(shù)17.1儀器培養(yǎng)箱、電子天平、放大鏡、無菌均質(zhì)杯、無菌平皿、無菌吸管無菌移液槍17.2試劑磷酸鹽緩沖液、營養(yǎng)瓊脂17.3實(shí)驗(yàn)步驟17.3.1樣品稀釋與培養(yǎng)稱取10g樣品置盛有90ml磷酸鹽緩沖液的無菌均質(zhì)杯中,制成1： 10的樣品勻液.吸取1ml樣品勻液于無菌平皿內(nèi),做平行樣.同時,分別吸取1ml空白稀釋液參加兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照. 及時將15ml-20ml冷卻至46 C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿, 并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻.待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),36C ±1 C培養(yǎng)48小時

27、7;1小時.17.3.2菌落計(jì)數(shù)：可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量.菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位CFU 表示.a選取菌落數(shù)在30300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù).低于30CFU的平板計(jì)錄具體菌落數(shù),大于300CFU的可記錄為多不可計(jì).每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù).b其中一個平板有較大片狀菌落生長時,那么不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；假設(shè)片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個平板后乘以 2,代表一個平板菌落數(shù).c當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長時,那么將每條單鏈作為一個菌落

28、計(jì)數(shù). 17.3.3菌落計(jì)數(shù)的計(jì)算方法平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),計(jì)算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每 gml樣品中菌落總數(shù)結(jié)果.17.4考前須知假設(shè)空白對照上有菌落生長,那么此次檢驗(yàn)結(jié)果無效.18霉菌酵母菌18.1儀器培養(yǎng)箱、電子天平、放大鏡、無菌均質(zhì)杯、無菌平皿、無菌吸管無菌移液槍18.2試劑孟加拉紅培養(yǎng)基18.3實(shí)驗(yàn)步驟18.3.1樣品稀釋與培養(yǎng)稱取10g樣品置盛有90ml蒸餾水的無菌均質(zhì)杯中,制成1:10的樣品勻液.吸取1ml樣品勻液于無菌平皿內(nèi),做平行樣.同時,分別吸取1ml空白稀釋液參加兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照.及時將15ml-20ml冷卻至46 C的孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻.待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),28 C ±1 C培養(yǎng)5d,觀察并記錄.18.3.2菌落計(jì)數(shù)：可用肉眼觀察,必要時用放大鏡,記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母菌數(shù).以菌落形成單位(CFU )表示.選取菌落數(shù)在10-