實驗八 大分子物質的水解實驗及糖發(fā)酵實驗

1、編輯ppt實 驗 八大分子物質的水解實驗及糖發(fā)酵實驗編輯ppt一、實驗目的1. 1.證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力的證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力的不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。2.2.掌握進行微生物大分子水解實驗的原理和方法掌握進行微生物大分子水解實驗的原理和方法3.3.了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細菌鑒定中的重要作了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細菌鑒定中的重要作用用4.4.掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法編輯ppt二、實驗原理二、實驗原理 微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性，因此使

2、得微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性，因此使得微生物在自然界的物質循環(huán)中起著重要的作用，同時也為人類開微生物在自然界的物質循環(huán)中起著重要的作用，同時也為人類開發(fā)利用微生物資源提供更多的機會與途徑。人們在微生物的分類發(fā)利用微生物資源提供更多的機會與途徑。人們在微生物的分類鑒定工作中，常利用其生理生化反應作為重要依據(jù)。鑒定工作中，常利用其生理生化反應作為重要依據(jù)。微生物對大分子的淀粉、蛋白質和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)微生物對大分子的淀粉、蛋白質和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主生的胞外酶將大分子物質分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要為

3、水解酶，通過加水裂解大的物質為較小的化合物，使其能被要為水解酶，通過加水裂解大的物質為較小的化合物，使其能被運輸至細胞內。淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍色，但細菌水解淀粉的區(qū)域，運輸至細胞內。淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍色，但細菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測定不再產(chǎn)生藍色，表明細菌產(chǎn)生淀粉酶。明膠是由膠原蛋用碘測定不再產(chǎn)生藍色，表明細菌產(chǎn)生淀粉酶。明膠是由膠原蛋白經(jīng)水解產(chǎn)生的蛋白質，在白經(jīng)水解產(chǎn)生的蛋白質，在2525以下可維持凝膠狀態(tài)，以固體形以下可維持凝膠狀態(tài)，以固體形式存在，有些微生物可產(chǎn)生一種稱作明膠酶的胞外酶，水解這種式存在，有些微生物可產(chǎn)生一種稱作明膠酶的胞外酶，水解這種蛋白質，而使明膠液化。蛋白質，而使明膠液

4、化。 糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應，在腸道細菌的鑒定糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應，在腸道細菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是上尤為重要。絕大多數(shù)細菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們在分解糖類物質的能力上有很大的差異。不同的細菌含有發(fā)它們在分解糖類物質的能力上有很大的差異。不同的細菌含有發(fā)酵不同糖酵不同糖( (醇醇) )的酶，因而發(fā)酵糖的酶，因而發(fā)酵糖( (醇醇) )的能力各不相同，其產(chǎn)生的的能力各不相同，其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同，如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。代謝產(chǎn)物亦不相同，如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。編輯ppt三、實驗材料三、實驗

5、材料 1培養(yǎng)基培養(yǎng)基（每組的量，由班長分發(fā)）（每組的量，由班長分發(fā)） 滅菌培養(yǎng)皿（淀粉水解）：滅菌培養(yǎng)皿（淀粉水解）：3 3皿皿 明膠液化培養(yǎng)基：明膠液化培養(yǎng)基： 4 4支支 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基： 3 3支支 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基：乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基： 3 3支支 淀粉培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基： 1 1瓶瓶 接種用具接種用具 接種環(huán)（針），酒精燈，標簽紙，試管架接種環(huán)（針），酒精燈，標簽紙，試管架 實驗菌種實驗菌種 枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，普通變形桿菌，枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，普通變形桿菌，金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌編輯ppt四、實驗內容試驗名稱試驗名稱培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基名稱接種菌名稱接種菌名稱

6、 接種方式接種方式 每組個數(shù)每組個數(shù)淀粉水解淀粉水解淀粉培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基枯草枯草/ /大腸大腸 平板平板3明膠水解明膠水解明膠培養(yǎng)基明膠培養(yǎng)基枯草枯草/ /大腸大腸/ /金金葡葡穿刺穿刺4葡萄糖發(fā)酵葡萄糖發(fā)酵葡萄糖發(fā)酵培葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基養(yǎng)基大腸大腸/ /變形變形液體液體3乳糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵培養(yǎng)乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基基大腸大腸/ /變形變形液體液體3編輯ppt1. 1. 淀粉水解試驗淀粉水解試驗（1）將固體淀粉培養(yǎng)基）將固體淀粉培養(yǎng)基溶化溶化后冷卻至后冷卻至50，無菌操作，無菌操作倒平板倒平板。（2）將）將枯草枯草/ /大腸大腸分別在不同部分劃線接種（劃十字），并在平板分別在不同部分劃線接種（劃十

7、字），并在平板的背面分別記下菌名。的背面分別記下菌名。（3）將接完種的平板）將接完種的平板倒置于倒置于37恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。2. 2. 明膠液化試驗明膠液化試驗（1 1）?。┤? 4支明膠培養(yǎng)基試管，用接種針分別以穿刺接種法接種支明膠培養(yǎng)基試管，用接種針分別以穿刺接種法接種枯草枯草/ /大腸大腸/ /金葡金葡, ,第第4 4支不接種，作為對照。支不接種，作為對照。（2 2）接種后置于）接種后置于2020恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)2-5d2-5d（或（或37培養(yǎng)，冰浴培養(yǎng)，冰浴后觀察結果）。后觀察結果）。3.3.糖類發(fā)酵試驗糖類發(fā)酵試驗（1 1）取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管

8、）取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3 3支，分別接種大腸桿菌和變形桿菌，支，分別接種大腸桿菌和變形桿菌，第第3 3支不接種，作為對照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管支不接種，作為對照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3 3支，同樣分支，同樣分別接入大腸桿菌和變形桿菌，第別接入大腸桿菌和變形桿菌，第3 3支不接種，作為對照。接種后，支不接種，作為對照。接種后，輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小試管進入氣泡。輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小試管進入氣泡。（2 2）將接種過和作為對照的）將接種過和作為對照的6 6支試管置于支試管置于3737恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h24h。編輯ppt編輯ppt編輯ppt實驗結果糖

9、發(fā)酵實驗編輯ppt五、實驗結果五、實驗結果菌名菌名淀粉水解試驗淀粉水解試驗明膠液化試驗明膠液化試驗枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌大腸桿菌大腸桿菌（1 1）大分子物質水解實驗結果）大分子物質水解實驗結果將結果填入下表。將結果填入下表?！啊?表示陽性，表示陽性，“”表示陰性表示陰性注意：注意：觀察結果時，可打開皿蓋，滴加碘液于平板上，輕輕旋轉，觀察結果時，可打開皿蓋，滴加碘液于平板上，輕輕旋轉，使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，則說明使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，則說明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大小，說明該菌水解淀粉能力淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大小，說明該菌水解淀粉能力的強弱，即產(chǎn)生胞外酶活力的高低。（以的強弱，即產(chǎn)生胞外酶活力的高低。（以“+”+