實(shí)驗(yàn)二-普通顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)觀察

1、2021/6/161實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 普通光學(xué)顯微鏡的使用普通光學(xué)顯微鏡的使用 和細(xì)菌形態(tài)觀察和細(xì)菌形態(tài)觀察22021/6/16一一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法。、學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法。2 2、學(xué)習(xí)普通臺(tái)式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部、學(xué)習(xí)普通臺(tái)式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能和使用方法。分的功能和使用方法。3 3、了解細(xì)菌的三種基本形態(tài)了解細(xì)菌的三種基本形態(tài)32021/6/16二、基本原理二、基本原理n微生物是個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼無(wú)法微生物是個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼無(wú)法看到的微小生命體。因此，我們要借助顯看到的微小生命體。因此，我們要借助顯微鏡來(lái)進(jìn)行觀察。顯微鏡的種類

2、很多，但微鏡來(lái)進(jìn)行觀察。顯微鏡的種類很多，但基本構(gòu)造可分為兩大部分基本構(gòu)造可分為兩大部分 ：一是機(jī)械裝置，：一是機(jī)械裝置，二是光學(xué)系統(tǒng)二是光學(xué)系統(tǒng)n1 1、機(jī)械裝置由鏡座、鏡臂、鏡筒與物鏡轉(zhuǎn)、機(jī)械裝置由鏡座、鏡臂、鏡筒與物鏡轉(zhuǎn)移器、載物臺(tái)、移動(dòng)器粗細(xì)調(diào)節(jié)器組成。移器、載物臺(tái)、移動(dòng)器粗細(xì)調(diào)節(jié)器組成。n2 2光學(xué)系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光鏡、反光鏡、光學(xué)系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光鏡、反光鏡、光圈組成。光圈組成。42021/6/16 現(xiàn)代普通光學(xué)顯微鏡利用目鏡和物鏡現(xiàn)代普通光學(xué)顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來(lái)放大成像，故又稱為復(fù)式顯兩組透鏡系統(tǒng)來(lái)放大成像，故又稱為復(fù)式顯微鏡。它們由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部

3、分微鏡。它們由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。組成。1.1.鏡座；鏡座；2.2.載物臺(tái)；載物臺(tái)；3.3.鏡臂；鏡臂；4.4.棱鏡套；棱鏡套；5.5.鏡鏡筒；筒；6.6.接目鏡；接目鏡；7.7.轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)換器；器；8.8.接物鏡；接物鏡；9.9.聚光聚光器；器；10.10.虹彩光圈；虹彩光圈；11.11.光圈固定器；光圈固定器；12.12.聚光聚光器升降螺旋；器升降螺旋；13.13.反光反光鏡；鏡；14.14.細(xì)調(diào)節(jié)器；細(xì)調(diào)節(jié)器；15.15.粗調(diào)節(jié)器；粗調(diào)節(jié)器；16.16.標(biāo)本夾標(biāo)本夾52021/6/16顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率 1.1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)= =接物鏡放大倍數(shù)接

4、物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) 2.2.顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 是表示顯微鏡辨析物體是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點(diǎn)之間距離的能力，可用公式表示（兩端）兩點(diǎn)之間距離的能力，可用公式表示為：為： D=/2nD=/2nsin(/2 ) sin(/2 ) 式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間的最短距離。：物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間的最短距離。 ：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（平均0.550.55 m) m) n: n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。 ：鏡口角（即入射角）。：鏡口角（即入射角）。62021/6/16n油鏡使用的原理油鏡使用的原理 1.1.香

5、柏油的折射率與玻璃接近，提高了視香柏油的折射率與玻璃接近，提高了視野的照明度。野的照明度。 2.2.提高了顯微鏡的提高了顯微鏡的分辨率分辨率72021/6/16三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材1 1、菌種、菌種 金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和四聯(lián)球菌染色玻片標(biāo)本等。菌、大腸桿菌和四聯(lián)球菌染色玻片標(biāo)本等。2 2、溶液或試劑、溶液或試劑 香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯3 3、儀器或其他用具、儀器或其他用具 顯微鏡、擦鏡紙。顯微鏡、擦鏡紙。82021/6/16n顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng)：顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng)：1.1.不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡

6、的任何部件, ,以免損壞。以免損壞。 2.2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度證光潔度 3.3.觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。 4.4.觀察時(shí)，兩眼睜開(kāi)，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)觀察時(shí)，兩眼睜開(kāi)，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪圖

7、。眼注視繪圖。 5.5.拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。不可單手拿，更不可傾斜拿。 6.6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片而腐蝕鏡片。92021/6/16四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1 1、觀察前的準(zhǔn)備、觀察前的準(zhǔn)備（1 1） 顯微鏡的安置顯微鏡的安置 置顯微鏡于平整的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距置顯微鏡于平整的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣約實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣約3 34 4。鏡檢時(shí)姿勢(shì)要端正。鏡檢時(shí)姿勢(shì)要端正。 取、放顯微鏡時(shí)應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯取、放顯微鏡時(shí)應(yīng)一手

8、握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時(shí)睜開(kāi)觀察，以減少眼睛疲勞，微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時(shí)睜開(kāi)觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄。也便于邊觀察邊繪圖或記錄。（2 2） 光源調(diào)節(jié)光源調(diào)節(jié) 安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過(guò)調(diào)節(jié)電壓以安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過(guò)調(diào)節(jié)電壓以獲得適當(dāng)?shù)恼彰髁炼?，而使用反光鏡采集自然光或燈光作為獲得適當(dāng)?shù)恼彰髁炼龋褂梅垂忡R采集自然光或燈光作為照明光源時(shí)，應(yīng)根據(jù)光源的強(qiáng)度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用照明光源時(shí)，應(yīng)根據(jù)光源的強(qiáng)度及所用物鏡的放大倍數(shù)選

9、用凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。度適宜。102021/6/16（3 3） 根據(jù)使用者的個(gè)人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡根據(jù)使用者的個(gè)人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當(dāng)調(diào)節(jié)，的目鏡，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當(dāng)調(diào)節(jié)，而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應(yīng)而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應(yīng)眼距不同或兩眼視力有差異的不同觀察者。眼距不同或兩眼視力有差異的不同觀察者。（4 4） 聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié)聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié)聚光器虹調(diào)節(jié)聚光器虹彩光圈值與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些彩光

10、圈值與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些顯微鏡的聚光器只標(biāo)有最大數(shù)值孔徑，而沒(méi)有具顯微鏡的聚光器只標(biāo)有最大數(shù)值孔徑，而沒(méi)有具體的光圈數(shù)刻度。使用這種顯微鏡時(shí)可在樣品聚體的光圈數(shù)刻度。使用這種顯微鏡時(shí)可在樣品聚焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視野，一邊縮焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視野，一邊縮光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或略光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或略小于其邊緣。因?yàn)楦魑镧R的數(shù)值孔徑值不同，所小于其邊緣。因?yàn)楦魑镧R的數(shù)值孔徑值不同，所以每轉(zhuǎn)換一次物鏡都應(yīng)該進(jìn)行這種調(diào)節(jié)。以每轉(zhuǎn)換一次物鏡都應(yīng)該進(jìn)行這種調(diào)節(jié)。112021/6/16122021/6/16 在聚光器的數(shù)值孔徑確定后

11、，若需在聚光器的數(shù)值孔徑確定后，若需要改變光照強(qiáng)度，可通過(guò)升降聚光器或改要改變光照強(qiáng)度，可通過(guò)升降聚光器或改變光源的亮度來(lái)實(shí)現(xiàn)，原則上不應(yīng)再通過(guò)變光源的亮度來(lái)實(shí)現(xiàn)，原則上不應(yīng)再通過(guò)光圈的調(diào)節(jié)。當(dāng)然，有關(guān)虹彩光圈、聚光光圈的調(diào)節(jié)。當(dāng)然，有關(guān)虹彩光圈、聚光器高度和照明光源強(qiáng)度的使用原則也不是器高度和照明光源強(qiáng)度的使用原則也不是固定不變的，只要能獲得良好的觀察效果，固定不變的，只要能獲得良好的觀察效果，有時(shí)也可根據(jù)不同的具體情況靈活運(yùn)用，有時(shí)也可根據(jù)不同的具體情況靈活運(yùn)用，不一定拘泥不變。不一定拘泥不變。132021/6/16 2 2、顯微觀察、顯微觀察 在目鏡保持不變的情況下，使用不同放在目鏡保持

12、不變的情況下，使用不同放大倍數(shù)的物鏡所能達(dá)到的分辨率及放大率都大倍數(shù)的物鏡所能達(dá)到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下，特別是初學(xué)者，進(jìn)是不同的。一般情況下，特別是初學(xué)者，進(jìn)行顯微觀察時(shí)應(yīng)遵從由低倍鏡到高倍鏡再到行顯微觀察時(shí)應(yīng)遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，因?yàn)榈捅稊?shù)物鏡視野相對(duì)油鏡的觀察程序，因?yàn)榈捅稊?shù)物鏡視野相對(duì)大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)及確定檢查的位置。大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)及確定檢查的位置。142021/6/16（1 1） 低倍鏡觀察低倍鏡觀察 將染色標(biāo)本玻片置于載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，將染色標(biāo)本玻片置于載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，移動(dòng)推進(jìn)器使觀察對(duì)象處在物鏡的正下方。下降移動(dòng)推進(jìn)器使觀察對(duì)象處在物

13、鏡的正下方。下降1010 物鏡，使其接近標(biāo)本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使物鏡，使其接近標(biāo)本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使標(biāo)本在視野中初步聚焦，再使用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清標(biāo)本在視野中初步聚焦，再使用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清晰。通過(guò)玻片夾推進(jìn)器慢慢移動(dòng)玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本晰。通過(guò)玻片夾推進(jìn)器慢慢移動(dòng)玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄觀察到各部位，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄觀察到的結(jié)果。的結(jié)果。 在任何時(shí)候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時(shí)，必須養(yǎng)成在任何時(shí)候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時(shí)，必須養(yǎng)成先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標(biāo)本，然后用目鏡觀先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標(biāo)本，然后用目鏡觀察，慢慢調(diào)節(jié)

14、物鏡離開(kāi)標(biāo)本進(jìn)行準(zhǔn)焦的習(xí)慣，以免因察，慢慢調(diào)節(jié)物鏡離開(kāi)標(biāo)本進(jìn)行準(zhǔn)焦的習(xí)慣，以免因一時(shí)的誤操作而損壞鏡頭及玻片。一時(shí)的誤操作而損壞鏡頭及玻片。152021/6/16 （2 2） 高倍鏡觀察高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的觀察目標(biāo)并將其至視在低倍鏡下找到合適的觀察目標(biāo)并將其至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對(duì)聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)作位置。對(duì)聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)后微調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進(jìn)器移動(dòng)標(biāo)后微調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進(jìn)器移動(dòng)標(biāo)本仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。本仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。 在一般情

15、況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位聚焦后，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時(shí)，物象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這置進(jìn)行觀察時(shí)，物象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦（種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦（parfocalparfocal）。利用這種）。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時(shí)僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時(shí)僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可對(duì)物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時(shí)對(duì)物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時(shí)可能的誤操作

16、而損壞鏡頭或載玻片。可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。162021/6/16 （3 3） 油鏡觀察油鏡觀察 在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標(biāo)本相接。將聚光器升至降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標(biāo)本相接。將聚光器升至最高位置并開(kāi)足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔徑超過(guò)最高位置并開(kāi)足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔

17、徑超過(guò)1.01.0，還應(yīng)在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達(dá)到最大的還應(yīng)在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達(dá)到最大的效能。調(diào)節(jié)照明使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐效能。調(diào)節(jié)照明使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細(xì)調(diào)節(jié)器使其清晰準(zhǔn)焦為止。上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細(xì)調(diào)節(jié)器使其清晰準(zhǔn)焦為止。 有時(shí)按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下有時(shí)按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下降還沒(méi)有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃降還沒(méi)有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃而過(guò)的物像。遇此情況，應(yīng)重新操作。另外應(yīng)特別注意不要而過(guò)的物像

18、。遇此情況，應(yīng)重新操作。另外應(yīng)特別注意不要因在下降鏡頭時(shí)用力過(guò)猛，或聚焦時(shí)誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向因在下降鏡頭時(shí)用力過(guò)猛，或聚焦時(shí)誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向轉(zhuǎn)動(dòng)而損壞鏡頭及載玻片。轉(zhuǎn)動(dòng)而損壞鏡頭及載玻片。172021/6/16 3 3、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處理（1 1）上升鏡筒，取下載玻片。）上升鏡筒，取下載玻片。（2 2） 用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。 切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕，影響觀察。上污漬