黃榮威畢業(yè)論文初稿修改5(定稿)(1)

1、0嶺南師范學(xué)院嶺南師范學(xué)院本科生畢業(yè)論本科生畢業(yè)論文文（設(shè)設(shè)計計）正交試驗法優(yōu)選檸檬桉葉總酚的提取工正交試驗法優(yōu)選檸檬桉葉總酚的提取工藝藝二級學(xué)院二級學(xué)院： 化學(xué)化工學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院專專 業(yè)業(yè)： 制藥工程制藥工程年年 級級： 2011 級級學(xué)學(xué) 號號： 2011384207 作者姓名作者姓名： 黃榮威黃榮威指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師： 周中流周中流 副教授副教授完成日期完成日期： 20152015 年年 5 5 月月 8 8 日日 A A 基礎(chǔ)理論基礎(chǔ)理論 B B 應(yīng)用研究應(yīng)用研究 C C 調(diào)查報告調(diào)查報告 D D 其他其他1正交試驗法優(yōu)選檸檬桉葉總酚的提取工藝正交試驗法優(yōu)選檸檬桉葉總酚的提取工藝專業(yè)名

2、稱：制藥工程申 請 人：黃榮威 指導(dǎo)教師：周中流 副教授論文答辯小組論文答辯小組組組 長長： 周中流 成成 員員： 楊紅艷 李程鵬 論文成績：論文成績： 2目錄目錄1 材料與方法.21.1 試藥.21.2 儀器.31.3 方法.32 正交試驗.32.1 原料藥預(yù)處理.32.2 供試品溶液的制備.42.3 對照品溶液的制備.42.4 測定方法.42.5 測定波長的選擇.42.6 線性關(guān)系考察.52.7 測定方法.62.8 結(jié)果.72.9 驗證試驗.93 討論.93.1 提取方法的選擇.93.2 測定方法的選擇.103.3 顯色劑的選擇.103.4 供試品提取方法的選擇.104 結(jié)語.10參考文獻

3、.11致謝.123正交試驗法優(yōu)選檸檬桉葉總酚的提取工藝 作者 黃榮威 指導(dǎo)老師 周中流 副教授 （嶺南師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，湛江 524048）摘摘 要：目的要：目的：優(yōu)選檸檬桉葉總酚的提取工藝。方法：方法：采用回流提取法，以總酚含量為考察指標(biāo)，以提取時間、料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取次數(shù)為考察因素進行正交試驗，優(yōu)選提取工藝參數(shù)的最佳提取工藝。結(jié)果：結(jié)果： 檸檬桉葉總酚的最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)90%、料液比 15、提取時間 3 h、提取次數(shù)為 1 次。結(jié)論結(jié)論: : 該提取工藝穩(wěn)定，適合檸檬桉葉總酚的提取。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：檸檬桉葉；總酚；提取工藝；正交試驗Extraction technol

4、ogy of the total phenolic compounds by orthogonal test optimization of Lemon eucalyptusAuthor: Huang Rongwei Instructor: Zhou Zhongliu(The School of Chemistry and Chemical Engineering ,Lingnan Normal University, Zhangjiang, 524048)Abstract：Goals：Optimize the extraction technology of the total phenol

5、ic compounds from Lemon eucalyptus .Methods: The method of reflux extraction, the content of the total phenolic compounds as investigation index, the extraction time, ratio of material to liquid, ethanol concentration, extraction times as factors of the orthogonal test, the best extraction process o

6、f the optimal extraction parameters. Results: The optimum extraction technology of the total phenolic compounds of Lemon eucalyptus was 90% ethanol, solid-liquid ratio 1 ：5, extraction time 3 h, extracting 1 times. Conclusion：The extraction technology is steady and suitable for extracting the total

7、phenolic compounds from Lemon eucalyptus.Key words: Lemon eucalyptus;total phenolic compounds; orthogonal experiment; extraction technology.4前言前言檸檬桉的葉具強烈的檸檬味，令蚊子和蒼蠅等不敢接近，可用來提煉香油，制造香皂。很久以來,人們就用桉葉提制桉葉油,供作香料、醫(yī)藥等工業(yè)原料1;近年來,有關(guān)桉葉中藥成分的研究已有陸續(xù)報道2-7，總酚類是具有多功能生理活性的一類化合物,具有不同的生理活性8。因此,對檸檬按葉總酚類化合物的研究具有一定的經(jīng)濟價值。據(jù)國內(nèi)

8、外有關(guān)文獻按葉總酚類化合物有抗微生物活性9，具有強大的抗氧化活性和清除自由基的能力而備受矚目，國內(nèi)外對總酚類物質(zhì)的研究也主要集中在對其抗氧化功能等方面。隨著對檸檬桉葉研究的逐漸深入，發(fā)現(xiàn)其含有大量的多酚類物質(zhì)， 抗氧化能力顯著。因此，開展對酚類物質(zhì)的研究可成為開發(fā)功能性桉葉品種的一個切入點。本試驗用紫外分光光度法和三氯化鐵-鐵氰化鉀比色法對檸檬桉葉總酚的含量進行測定，試圖建立簡單、 穩(wěn)定的檸檬桉葉總酚提取和測定體系， 為開發(fā)、擴大森林資源利用，尋找檸檬桉葉利用新途徑，為檸檬桉葉總酚的進一歩研究開發(fā)提供資料。OHOHOOOHHOHOOHOHOOHHOOHOHHHOHOHOH圖 1 藥材：檸檬桉葉

9、 圖 2 總酚類化合物的基本骨架 1 1 材料與方法材料與方法1.11.1 試藥試藥剪碎并脫脂的檸檬桉葉（產(chǎn)地：廣東湛江），阿魏酸對照品（藥檢所，批號 110773），乙醇 (分析純，廣州化學(xué)試劑廠)；6%三氯化鐵、9%鐵氰化鉀、50.1 mol/L 的鹽酸、蒸餾水。1.21.2 儀器儀器粉碎機（廣州雷邁機械設(shè)備有限公司）Gold Spectrum lab 53/54 紫外可見分光光度計（上海棱光技術(shù)有限公司）；202A 型電熱恒溫干燥箱 （上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司）；AY120 型電子分析天平 (日本島津公司)；RE-52 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化器廠）；SHZ-D循環(huán)水真空泵（鞏

10、義市予華儀器有限責(zé)任公司）；SB3200DT 型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。 1.31.3 方法方法 實驗設(shè)計采用乙醇回流提取法，選擇主要影響提取效率的乙醇濃度(A)，提取時間(B)，提取時間(C)，提取次數(shù)(D)為考察因素，以提取物中檸檬桉葉總酚的含量為考察指標(biāo)，采用 L9(34)正交表進行實驗,因素水平表見表 1。表表 1 1 因素水平因素水平水平A（乙醇濃度/%）B（料液比）C（提取時間/h）D(提取次數(shù))1601:5112751:15223901:25332 2 正交試驗正交試驗2.1 原料藥預(yù)處理原料藥預(yù)處理將實驗用的已脫脂的檸檬桉葉用粉碎機粉碎，裝于密封袋置于干燥

11、器中備用。62.22.2 供試品溶液的制備供試品溶液的制備稱取 10 g 檸檬桉葉粉末，按最佳提取工藝提取，即提取溫度為 80 ,提取液為 70%的乙醇溶液，物料比為 1:25，提取時間為 2 h/次，提取次數(shù)為 2 次。減壓抽濾，濃縮，濃縮液置于 25 mL 的容量瓶中用 50%乙醇溶液定容，備用。2.32.3 對照品溶液的制備對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品 0.0109 g 于 50 mL 容量瓶中，加 50%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為 0.218 mg/mL 的阿魏酸對照品。2.42.4 測定方法測定方法主要采用三氯化鐵鐵氰化鉀比色法測定總酚的含量。分別吸取阿魏酸對照品

12、溶液和樣品溶液適量，置 25 mL 容量瓶中，加入 1 mL 0.6%三氯化鐵溶液，再加入 0.9 mL 0.9%鐵氰化鉀溶液,搖勻，避光放置 5 分鐘后，加入 0.1 mol/L 的鹽酸稀釋至刻度。搖勻，再避光放置 30 min。按紫外分光光度法測定吸光度，計算檸檬桉葉總酚的量。2.5 測定波長的選擇測定波長的選擇 分別吸取阿魏酸對照品溶液和樣品溶液適量，置 25 mL 容量瓶中，加入 1 mL 0.6%三氯化鐵溶液，再加入 0.9 mL 0.9%鐵氰化鉀溶液,搖勻，避光放置 5 分鐘后，加入 0.1 mol/L 的鹽酸稀釋至刻度，搖勻，再避光放置 30 min。在200800 nm 范圍內(nèi)

13、對樣品溶液和對照品溶液在顯色前后的吸收情況進行掃描，阿魏酸對照品和供試品的吸收光譜圖見圖 3 和圖 4。7圖圖 3 阿魏酸對照品吸收光譜圖阿魏酸對照品吸收光譜圖圖圖 4 檸檬桉葉總酚吸收光譜圖檸檬桉葉總酚吸收光譜圖由上圖可知，對照品和供試品溶液均在(76010) nm 處有最大吸收，空白溶液無明顯吸收，因此確定 760 nm 作為檸檬桉葉中總酚含量的測定波長。2.6 線性關(guān)系考察線性關(guān)系考察精密吸取對照品溶液(濃度為0.218 mg /mL) 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL,于25 mL 棕色容量瓶中，加入1 mL 0.6%8三氯化鐵溶液，再加入0.9 ml 0.

14、9%鐵氰化鉀溶液，搖勻，避光放置5分鐘后，加入0.1 mol/L 的鹽酸稀釋至刻度。搖勻，再避光放置30 min，隨行空白。以對照品取樣量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)（表2），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖5），并進行線性回歸，得回歸方程為Y= 0.2428 X -0.0004, r=0.9997, n=7。結(jié)果表明，對照品在0.04360.3052 mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。表2 對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果序號1234567體積（ml)0.20.40.60.811.21.4質(zhì)量（mg)0.04360.08720.13080.17440.2180.26160.3052A0.1090.2210.320.4310

15、.5390.6430.765標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 2.4828x - 0.0004R2 = 0.999600.10.20.30.40.50.60.70.80.900.050.10.150.20.250.30.35mgA圖圖5 阿魏酸對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線阿魏酸對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線2.7 測定測定方法方法取脫脂后的檸檬桉葉 10 g，置于燒瓶中，按 L9(34)正交試驗表設(shè)計加入不同濃度的乙醇水浴回流（約 80 ）提取不同時間、次數(shù)，制備相應(yīng)的提取物，收集提取液，抽濾，取水相并定容于容量瓶，備用。按“2.4”項下測吸光度，計算檸檬桉葉總酚含量，進行方差分析，結(jié)果見9表 34。2.8 結(jié)果結(jié)果經(jīng)直觀分析和方差分析

16、可見，各因素的影響順序為提取時間乙醇濃度固液比提取次數(shù)。提取時間對檸檬桉葉中總酚的提取率的影響最具有統(tǒng)計學(xué)意義，而提取時間和乙醇濃度對檸檬桉葉中總酚的提取率的影響是顯著的，其余 2 個因素對檸檬桉葉中總酚的提取率的影響不顯著的，對因素 C 進行分析，確定優(yōu)水平是 C3，對因素 A 進行分析，確定優(yōu)水平是 A3，因素 B、D 的水平改變對試驗結(jié)果影響小，從經(jīng)濟角度考慮，選 B1、D1 ，優(yōu)水平組合為 A3B1C3D1，即檸檬桉葉中總酚的最佳提取工藝條件為乙醇濃度為 90%，料液比為 1:5，提取時間為 3h,提取次數(shù)為 1 次。10表表 3 正交試驗結(jié)果與直觀分析正交試驗結(jié)果與直觀分析因 素總酚

17、含量試驗號A/%B g/ml C/hD/次 提取率(%)111111.27212221.34313332.13421232.27522312.43623121.95731322.47832131.56933211.78K14.74 6.01 4.78 5.48 K26.65 5.33 5.39 5.76 K35.81 5.86 7.03 5.96 R0.64 0.23 0.75 0.16 K1222.47 36.12 22.85 30.03 K2244.22 28.41 29.05 33.18 K3233.76 34.34 49.42 35.52 T2285.4310-4主次順序CABD優(yōu)水平

18、A2 B1C3 D3 優(yōu)組合A2B1C3 D3 11表 4 正交試驗方差分析表SS（離差平方和10-4）自由度 f 方差S（10-4）F 值Fa顯著水平A0.61 20.3110.33F0.05(2,4)=6.94*B0.09 20.041.33F0.01(2,4)=18C0.90 20.4515*D0.04 20.020.67誤差 E0.1240.032.9 驗證試驗驗證試驗分別取三份已晾干的檸檬桉葉，精密稱定，按上述確定的最佳工藝進行提取，測定總酚含量。結(jié)果表明，三份總酚平均得率為 15.13 %，RSD 為0.76%，表明提取工藝合理、穩(wěn)定。表表 5 驗證性實驗結(jié)果驗證性實驗結(jié)果編號吸光

19、度（A）得率（%）平均得率（%）RSD（%）10.12714.7820.13015.5930.13215.0315.130.763 討論討論3.1 提取方法的選擇提取方法的選擇實驗前進行預(yù)實驗，分別采用乙醇回流提取法、恒溫水域搖床振蕩提取法和超聲波輔助提取法對檸檬桉葉酚類物質(zhì)進行提取，經(jīng)對比，乙醇回流提取法12的提取效率高，提取速度快，操作簡便，選作本實驗的提取方法。3.2 測定方法的選擇測定方法的選擇本實驗采用紫外分光光度法測定檸檬桉葉總酚的含量，操作簡單，分析周期短，是測定總酚含量的一種可行的方法。3.3 顯色劑的選擇顯色劑的選擇本文采用 0.6%三氯化鐵-0.9%鐵氰化鉀顯色法使對照品溶

20、液和供試品溶液顯色，測定檸檬桉葉總酚含量效果較佳，本法操作簡單，顯效時間短，是理想的顯色方法。3.4 供試品提取方法的選擇供試品提取方法的選擇本試驗采用正交試驗優(yōu)化提取條件，以極差R值確定影響因素的主次排序，以K值選擇各因素最優(yōu)水平，再通過方差分析判斷各因素對實驗結(jié)果是否有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗表明，4個因素中提取時間和乙醇濃度對結(jié)果有顯著性影響，為保證總酚的提取效率，將最佳工藝確定為90%的乙醇，料液比1:5，提取時間3 h/次，80 提取 1 次。4 結(jié)語結(jié)語檸檬桉醇具有抗結(jié)核作用，其 1:100 萬濃度即能抑制人型結(jié)核桿菌(H37Rv)的生長，效力與異菸肼相當(dāng)；1:60 萬能抑制金黃色葡萄球菌

21、；1:6 萬能抑制草分支桿菌的生長。對某些真菌也有抑制作用，但對大腸桿菌無效。同屬植物Eucalyptous maculata Hook.的樹干中有刺激皮膚的成分，而其所產(chǎn)生的樹膠有高度的收斂性質(zhì)。對于優(yōu)化檸檬桉葉的工藝條件，提取有效成分，提高產(chǎn)量，不斷開發(fā)檸檬桉葉的藥用價值，具有重大的意義。13參考文獻參考文獻1 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典J. 2000 年版(一部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000, 23(6):100-105. 2 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會，中華本草J . 上海:上?？萍汲霭嫔?，1998, 44(8):71-87.3 廣東雷州林業(yè)局，按樹葉的綜合利用