ClC3在人肺癌中的表達(dá)及分布

1、ClC3 在人肺癌中的表達(dá)及分布 作者：王丙清，宋立強(qiáng)，吳昌歸 【Abstract】 AIM: To investigate the expression and biological significance of CIC3 in pulmonary carcinoma. METHODS: The expression of CIC3 in pulmonary carcinoma samples from 76 patients with lung cancer was detected by immunohistochemistry. RESULTS: There were 69 samp

2、les (90.8%) with positive response in 76 lung cancer samples. No sample was positive in normal control group(n=10). CIC3 was mainly located in the membrance and plasma of oncocytes and capillary endothelial cells. The expression of CIC3 rose as TNM stage of cancer stepped up. CONCLUSION: CIC3 expres

3、ses commonly in pulmonary carcinoma and its metastasis, which may be related to TNM staging. 【Keywords】 pulmonary carcinoma;CIC3 protein; immunohistochemistry; chloride channel 【摘要】 目的： 探討ClC3 在人肺癌組織中的表達(dá)及其生物學(xué)意義. 方法： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測76 例人肺癌標(biāo)本中ClC3 蛋白的表達(dá). 結(jié)果： 76 例人肺癌標(biāo)本中陽性表達(dá)69例（90.8），對(duì)照組10 例正常肺組織ClC3 蛋白的

4、表達(dá)為陰性;而蛋白表達(dá)陽性的69例肺癌中,ClC3 主要位于瘤細(xì)胞和微血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)或細(xì)胞膜上. 隨著TNM分期升級(jí)，ClC3 蛋白表達(dá)也呈逐漸上調(diào)趨勢（P<0.01）. 結(jié)論： ClC3 在人肺癌及肺轉(zhuǎn)移癌組織中普遍表達(dá),并且可能與肺癌TNM分期相關(guān). 【關(guān)鍵詞】 肺癌；蛋白質(zhì)ClC3；免疫化學(xué)；氯化物通道 0引言 肺癌是人體內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,其突出的病理學(xué)特征是浸潤臨近肺組織和發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，使治療失敗或復(fù)發(fā). 因此,弄清肺癌細(xì)胞的浸潤機(jī)制,尋求有效的治療措施,是當(dāng)前臨床和基礎(chǔ)研究的重要課題. 肺癌細(xì)胞浸潤過程涉及許多因素,其中由Cl通道(chloride chan

5、nel) 介導(dǎo)的細(xì)胞形狀容積改變賦予細(xì)胞的“主動(dòng)”浸潤潛能學(xué)說近年來很受關(guān)注. ClC3是一種電壓門控Cl通道,主要分布于細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的脂膜中. 近年研究認(rèn)為,ClC3參與調(diào)節(jié)性容積回縮(regulatory volume decrease, RVD) ,可能參與肺癌細(xì)胞的調(diào)節(jié)性體積改變,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤過程;但詳細(xì)作用機(jī)制和特點(diǎn)尚未闡明. ClC3蛋白在我國肺癌患者的分布和表達(dá)規(guī)律也缺乏研究資料. 本研究我們采用免疫組化染色法，觀察CLC3在人肺癌標(biāo)本（包括腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌、胸膜轉(zhuǎn)移癌）中的表達(dá)情況，及其與肺癌患者年齡、性別、分期及轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系，探討其與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系.

6、 1對(duì)象和方法 1.1對(duì)象西京醫(yī)院200505/200606經(jīng)皮肺穿刺活檢標(biāo)本76 （男49,女27） 例,年齡2653（平均36.6 ）歲. 所用標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)病理檢查證實(shí)，其中腺癌期5 例，鱗癌期3 例，大細(xì)胞癌期4例，腺癌級(jí)29 例， 鱗癌級(jí)12例，肺轉(zhuǎn)移低分化鱗癌7例及肺轉(zhuǎn)移性腺癌16例;10例正常肺組織切片作為對(duì)照. 所有石蠟標(biāo)本作4 m厚的連續(xù)切片. Trizol 試劑(購自Invitrogen 公司) ;ClC3 抗體(購自Santa Cruz公司) ;免疫組化超敏UltrasensitiveTMSP試劑盒,DAB顯色試劑盒均購自福州邁新公司. 人肺腺癌A549細(xì)胞系由上海醫(yī)藥工業(yè)

7、研究所惠贈(zèng)；IMP2型倒置生物學(xué)顯微鏡購自日本OIympus公司. 1.2方法免疫組化SP染色檢查ClC3的蛋白表達(dá). 空白對(duì)照采用PBS 代替一抗. 結(jié)果判斷： 每張切片均有2位病理科專家分別隨機(jī)觀察具有代表性的10個(gè)高倍視野，根據(jù)胞膜和胞漿顏色程度及染色細(xì)胞的百分率（）進(jìn)行評(píng)分，基本不著色0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分，著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率5為0分，625為1分，2550為2分，51%為3分，將每張切片著色程度得分與細(xì)胞百分率的分相乘為其最后得分，01為陰性（-），23為弱陽性（），4為強(qiáng)陽性（）. 正常肺組織及不同分期肺癌ClC3陽性染色的例數(shù)百分?jǐn)?shù)為陽性率.

8、 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 陽性率用%表示,組間比較應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行檢驗(yàn). 2結(jié)果 2.1肺癌中ClC3蛋白的表達(dá)ClC3蛋白主要表達(dá)在癌細(xì)胞和微血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)或胞膜上(圖1) . 在10例正常肺組織中ClC3表達(dá)陰性. 在76例肺癌標(biāo)本中69 例ClC3表達(dá)陽性（90.8），強(qiáng)陽性43例（56.6），弱陽性26例（34.2）,陰性7例（9.2），ClC3蛋白表達(dá)與性別、年齡及組織學(xué)分型未見一定關(guān)系（P>0.05）. A：正常肺組織；B：肺腺癌期；C： 肺鱗癌期；D： 肺腺癌期；E： 肺轉(zhuǎn)移性鱗癌. 圖1肺癌中CLC3蛋白的表達(dá)×400（略） 2.2ClC3蛋白表達(dá)

9、與肺癌臨床病理關(guān)系ClC3蛋白表達(dá)與肺癌的特征有一定關(guān)系（表1）. 表1ClC3蛋白表達(dá)與肺癌關(guān)系（略） 3討論 腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)序貫、復(fù)雜的過程，包括腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶、黏附基底膜和細(xì)胞基質(zhì)，并對(duì)其水解破壞，癌細(xì)胞侵入周圍脈管，繼續(xù)生長形成轉(zhuǎn)移癌，腫瘤侵襲序貫于轉(zhuǎn)移全過程，控制侵襲是抑制轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵，肺與其它全身惡性腫瘤就發(fā)生的分子機(jī)制而言具有很多相同的特點(diǎn),但同時(shí)也具有其獨(dú)特性. 首先,它在肺內(nèi)彌漫浸潤,且很快有肺外轉(zhuǎn)移;其次，瘤細(xì)胞的浸潤可視為一個(gè)“主動(dòng)”運(yùn)動(dòng)過程,即具浸潤潛能的瘤細(xì)胞要有特殊的適應(yīng)性改變以完成轉(zhuǎn)移和浸潤,其中就包括瘤細(xì)胞容積和形狀的改變. 此外,腺癌常伴有明顯的瘤周水腫

10、腔液形成,而毗鄰水腫區(qū)的腫瘤細(xì)胞并沒有發(fā)生明顯膨脹. 有研究證實(shí)低滲環(huán)境下,腺癌細(xì)胞僅可實(shí)現(xiàn)容積的部分恢復(fù),而鱗癌細(xì)胞可調(diào)節(jié)細(xì)胞回復(fù)原有的或甚至更小的容積,說明與正常肺組織細(xì)胞相比,肺癌細(xì)胞具有強(qiáng)有力的機(jī)制來調(diào)控細(xì)胞大小以保持其旺盛的生存能力. 細(xì)胞的調(diào)節(jié)性體積改變包括調(diào)節(jié)性細(xì)胞容積增大(regulatory volume increase, RVI) 和調(diào)節(jié)性細(xì)胞容積回縮(RVD) . 其中,RVD 是當(dāng)細(xì)胞暴露于低滲環(huán)境時(shí),細(xì)胞膨脹,該膨脹會(huì)激活細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制,使已增大的細(xì)胞容積減小并向正常體積轉(zhuǎn)變. RVD 被認(rèn)為是與細(xì)胞的增殖、分化、遷移及細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)的生理功能之一. 國內(nèi)已有文

11、章報(bào)道在鼻咽癌細(xì)胞中,Cl通道(特別是容積調(diào)控性Cl通道) 通過RVD 參與了細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移1-2. ClC3 屬Cl離子通道家族中亞族,ClC3可能是容量調(diào)節(jié)性Cl通道的分子基礎(chǔ)3-5,參與RVD 過程6-7. Soroceanu等和Ransom 等分別證實(shí),用Cl通道抑制劑能夠阻止腫瘤的侵襲;還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)ClC2及ClC3在多株惡性肺癌細(xì)胞膜上的表達(dá)明顯上調(diào),提示腺癌細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的Cl轉(zhuǎn)運(yùn)能力,進(jìn)而使細(xì)胞發(fā)生快速變形以增加其分裂增殖及浸潤潛能. 本研究結(jié)果表明人肺癌及其它肺轉(zhuǎn)移癌手術(shù)標(biāo)本中ClC3蛋白及mRNA 普遍表達(dá),而在正常肺組織中幾乎未見表達(dá). 提示ClC3可能與肺癌細(xì)胞

12、的容積調(diào)控、增殖及浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān);腺癌細(xì)胞瘤期ClC3蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯高于其級(jí),提示ClC3的表達(dá)可能與腺癌的病理分級(jí)相關(guān). 因此,研究Cl通道在肺癌中的作用,有助于進(jìn)一步了解肺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性. 【參考文獻(xiàn)】 1 陳麗新，王立偉，Tim JacobCl. 在鼻咽癌細(xì)胞調(diào)節(jié)性容積回縮中的作用J. 中國病理生理雜志, 2002, 18(5):490-493. 2 王立偉，陳麗新，朱林燕. 抑制氯通道阻抑鼻咽癌細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖J. 中國病理生理雜志, 2004,20(5):715-718. 3 Yoshikawa M, Uchida S , Ezaki J , et al. ClC3

13、deficiency leads to phenotypes similar to human neuronal ceroid lipofuscinosisJ. Genes Cells, 2002,7(6):597-605. 4 YamamotoMizuma S, Wang GX, Liu LL , et al. Altered properties of volumesensitive osmolyte and anion channels (VSOACs) and membrane protein expression in cardiac and smooth muscle myocyt

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