急性胃腸炎病毒（輪狀病毒）

1、急性胃腸炎病毒（輪狀病毒） 人類輪狀病毒（human rotavirus, hrv）是引起嬰幼兒急性胃腸炎的主要病原體，特殊是a組輪狀病毒是世界范圍內(nèi)嬰幼兒重癥腹瀉最主要的病原休，也是嬰幼兒死亡的主要緣由之一。1973年澳大利亞學(xué)者bishop等在急性非細(xì)菌性胃腸炎兒童十二指腸黏膜超薄切片中首次發(fā)覺了hrv，現(xiàn)歸類于呼腸病毒科。1983年我國病毒學(xué)家洪濤等發(fā)覺了成人腹瀉輪狀病毒（adult diarrhea rotavirus, adrv) 一、分類 輪狀病毒屬于呼腸病毒科（reoviridae）輪狀病毒屬（rotavirus)，按照病毒基因組結(jié)構(gòu)和抗原性（vp6)將輪狀病毒（rv）分為7個組

2、（ag)，其中a組rv的感染最為常見，主要引起嬰幼兒腹瀉，a組輪狀病毒按照vp6又可分為4個亞組（、+、非非）。另外，a組輪狀病毒按照其表面中和抗原vp7和vp4又可分為16個g血清型和27個p血清型。b組rv主要引起成人腹瀉，故又稱為成人腹瀉輪狀病毒（adrv)；少數(shù)報(bào)告顯示c組rv也可致人感染，但dg等4組rv只引起動物腹瀉。 二、生物學(xué)特性 該病毒顆粒為球形，直徑為6080 nm，二十面體立體對稱，雙層衣殼，無包膜。負(fù)染后在電鏡下觀看，病毒形狀呈車輪狀。核心含有病毒核酸和rna合成酶，病毒核酸為雙鏈rna，約18550 bp，由11個基因片段組成。每個片段含一個開放閱讀框架（orf)，分

3、離編碼6個結(jié)構(gòu)蛋白（vpl,vp2,vp3,vp4,vp6,vp7）和5個非結(jié)構(gòu)蛋白（nsp1nsp5)vplvp3位于核心，分離為病毒聚合酶、轉(zhuǎn)錄酶成分和與帽形成有關(guān)的蛋白。vp4和vp7位于外衣殼，打算病毒的血清型。vp7為糖蛋白，是中和抗原，vp4為病毒的血凝素，與病毒吸附到易感細(xì)胞表面有關(guān)，亦為重要的中和抗原。vp6位于內(nèi)衣殼，帶有組和亞組特異性抗原。非結(jié)構(gòu)蛋自為病毒酶或調(diào)整蛋白，在病毒復(fù)制中起主要作用。 輪狀病毒的敏感細(xì)胞是小腸黏膜上皮細(xì)胞，因?yàn)榇祟惛叨确只募?xì)胞培養(yǎng)非常困難，故培養(yǎng)輪狀病毒常用的細(xì)胞為原代猴腎細(xì)胞和傳代綠猴腎細(xì)胞。 三、臨床意義 輪狀病毒主要經(jīng)糞一口途徑傳揚(yáng)，另外也

4、可通過接觸傳揚(yáng)，臨床上主要引起急性胃腸炎。該病毒呈世界性分布，ac組輪狀病毒能引起人類和動物腹瀉,dg組只引起動物腹瀉。病毒侵入人體后在小腸黏膜絨毛細(xì)胞內(nèi)增殖，致細(xì)胞溶解死亡，微絨毛萎縮、變短、變鈍、脫落，取而代之的是腺窩細(xì)胞增生，分泌增強(qiáng)，導(dǎo)致嚴(yán)峻腹瀉，水、電解質(zhì)大量喪失。 1. a組感染 a組hrv感染見于世界各地，溫帶地區(qū)以秋末冬初為主，俗稱“秋季腹瀉”。年長兒童和成人常呈無癥狀感染，四月齡至兩歲嬰幼兒常呈急性胃腸炎感染，占病毒性胃腸炎的80以上，是嬰幼兒死亡的重要因素之一。病毒侵入機(jī)體后，在胃腸道先被部分消化，失去外衣殼，裂解vp4，產(chǎn)生感染型亞病毒顆粒（infectious subv

5、iral particle,isvp)，然后穿入小腸豁膜絨毛細(xì)胞內(nèi)增殖，感染后8h就可查見由rna和病毒蛋白形成的胞質(zhì)融合體。動物試驗(yàn)和患兒活檢標(biāo)本顯示hrv感染造成了微絨毛萎縮、變短、脫落和細(xì)胞溶解死亡，使腸道汲取功能受損；刺激腺窩細(xì)胞增生，使分泌功能加強(qiáng)。導(dǎo)致水和電解質(zhì)分泌增強(qiáng)，重汲取削減，浮現(xiàn)嚴(yán)峻腹瀉。此外，非結(jié)構(gòu)蛋白p4 (nsp4)有毒素樣作用，通過作用于鈣離子通道而影響水的汲取。 感染后埋伏期為2472 h，發(fā)病急，80患兒先發(fā)熱、嘔吐和腹痛，隨即頻繁腹瀉，每日1020次，為淡黃色水樣便或蛋花湯樣酸性便或白色米湯樣便，無黏液、膿血及惡臭。病程普通為26天。當(dāng)嬰幼兒的免疫功能低下時(shí)，

6、急性胃腸炎可變?yōu)槁?，患兒糞便中長久排出病毒，而成為本病的傳染源。另外a組hrv感染還可致新生兒壞死性小腸炎、嬰幼兒腸套疊、肺炎、腦炎、腦膜炎。嚴(yán)峻感染還可伴有突發(fā)性嬰兒死亡綜合征（sudden infant death syndrome)、雷耶（reye）綜合征、溶血性尿毒綜合征、川崎（kawazaki）病和克羅恩(crohn)病等。其傳染源為患者和無癥狀攜帶者，患者每克糞便中排出的病毒體可達(dá)1010個。 2. b組感染b組hrv的感染以年長兒童和成人多見，無顯然時(shí)節(jié)性，多為自限性感染。其暴發(fā)流行僅見于我國大陸，1982-1983年，該組病毒在我國東北、西北礦區(qū)青壯年工人中引發(fā)了大規(guī)模霍亂樣

7、腹瀉流行，患者數(shù)多達(dá)數(shù)十萬人。b組hrv感染主要引起成人腹瀉，埋伏期為3866 h，起病急，呈黃色水樣便，無黏液和膿血，每日腹瀉510次，重者每日可超過20次，伴有腹痛、腹脹、惡心、嘔吐、脫水、乏力等癥狀，病程為36天。 3. c組感染對人的致病性類似a組，但發(fā)病率很低。感染后機(jī)體可產(chǎn)生型特異性抗體igm,igg和siga，對同型病毒感染有庇護(hù)作用，其中以腸道siga最為重要。抗體對異型惟獨(dú)部分庇護(hù)作用，加上嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完美，siga含量低，所以病愈后還可重復(fù)感染。 四、微生物學(xué)檢驗(yàn) （一）檢驗(yàn)程序 1標(biāo)本采集與處理發(fā)病早期采集糞便，患者每克糞便中排出的病毒體可達(dá)1010個，水樣便可

8、用吸管吸至塑料或玻璃容器中，密封后送試驗(yàn)室。稱取糞便加pbs制成10懸液，3000 r/min離心10 min，取上清液檢測或凍存。 2標(biāo)本挺直檢查 (1)電鏡和免疫電鏡檢查：取糞便懸液超速離心，取沉渣經(jīng)染色電鏡觀看，或舉行免疫電鏡觀看，因?yàn)椴《绢w粒聚攏而易被檢出。電鏡下常見病毒顆粒，大小為6080nm，有雙層殼，核心呈發(fā)射狀，類似車輪羅列，此為完整的病毒顆粒，也可見空心的或不完整病毒顆粒。 (2)抗原檢測：常用elisa雙抗夾心法，用組特異性單克隆抗體（mcab)和亞組、血清型特異的mcab協(xié)作用法，可檢出a組輪狀病毒，并判定亞組和血清型。elisa約有5的假陽性，系糞便中類風(fēng)濕因子所致，此

9、假陽性可用阻斷實(shí)驗(yàn)加以排解。也可選用膠乳凝集實(shí)驗(yàn)，以組特異性抗體附著乳膠顆粒，加糞便懸液舉行凝集反應(yīng)，其具有良好的特異性，但不及elisa敏感，當(dāng)糞便中含有大量病毒顆粒（大于107個g）時(shí)，乳膠凝集實(shí)驗(yàn)才干浮現(xiàn)陽性結(jié)果。 (3)病毒rna凝膠電泳（page）分析：抽提病毒rna后，經(jīng)page染色舉行分析，按照a,b,c三組hrv 11個基因片段電泳位置的特別分布圖形舉行推斷。以a組hrv的11條rna基因片段電泳為例，第一組包括14片段，其次組包括56片段，第三組包括79片段，第四組為10.11片段，全部a組hrv均具有相像的4，2，3：2型rna圖譜。而且按照a組rhv的第10,11片段在page上的遷移率不同分為兩型，即長型和短型。a組hrv的亞組i多屬于10,11片段遷移率短型。 (4)核酸檢測。 核酸雜交：用地高辛等標(biāo)志組特異性探針（vp6基因）或型特異性探針（vp4或vp7基因型特異性序列）檢測輪狀病毒rna。 pcr檢測：因?yàn)閿U(kuò)增hrv的rna基因片段，首先需要將特異rna片段逆轉(zhuǎn)錄成cdna，但糞便中存在某種抑制逆轉(zhuǎn)錄的物質(zhì)，使該法的敏捷度受到一定影響。 （二）病毒分別培養(yǎng) 用傳代非洲綠猴腎細(xì)胞（ma104）