血清總蛋白測定雙縮脲試劑法

1、IllL清總蛋白測定（雙縮服試劑法）南方眼科上學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名：學(xué)號：專業(yè)年級：組另IJ:生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)名稱血清總蛋白測定(雙縮服試劑法)實(shí)驗(yàn)日期2014-11-21實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)第五實(shí)驗(yàn)室合作者指導(dǎo)老師評分教師簽名批改日期一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握雙縮服測定血清總蛋白的基本原理、操作；2、熟悉血清總蛋白的臨床意義；3、了解雙縮服法測定血清總蛋白的特點(diǎn)和注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)原理(一)：雙縮服反應(yīng)在堿性溶液中,雙縮胭(H2NOC-NH-CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮胭反應(yīng)。兩分子尿素加熱脫氨縮合成的雙縮胭(H2N-0C-NH-C0-NH2)

2、,因分子內(nèi)含有兩個(gè)鄰接的肽鍵，在堿性溶液中可與Cu2+發(fā)生雙縮胭反應(yīng)，生成紫紅色絡(luò)合物；蛋白質(zhì)分子含有大量彼此相連的肽鍵(-C0-NH-),同樣能在堿性條件下與Cu2+發(fā)生雙縮胭反應(yīng)，生成的紫紅色絡(luò)合物，且在540nm處的吸光度與蛋白質(zhì)的含量在10120g/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。三、材料與方法：實(shí)驗(yàn)材料樣品：大牛血清試劑：雙縮服試劑、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(70g/L)生理鹽水(0.9%)器材：試管、加樣槍、刻度吸管、洗耳球設(shè)備：1100分光光度計(jì)、水浴鍋實(shí)驗(yàn)步驟，取3支試管，做好標(biāo)記（B空白對照，S標(biāo)準(zhǔn)液，U為待測大牛血清），按下表操作:加入物（ml）B （空白）S （標(biāo)準(zhǔn)）U （待測）大牛血清（

3、1： 10）0.5蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（1： 10）0.5一0. 9%氯化鈉溶液0.5雙縮服試劑4.04.04.0a.各管混勻，觀察各試管顏色b.將各試管置于37c水浴鍋中加熱20min,觀察顏色c.將試管中的液體倒入比色杯中，置于1100分光光度計(jì)的樣品槽內(nèi)，在波長540nm,以空白管調(diào)零，測S和U管吸的光度。d.測定結(jié)束后，將比色杯中的樣品回收進(jìn)試管7血清總蛋白（創(chuàng)，）=媼乂蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度（g/L）依據(jù)公式算出結(jié)果As四、結(jié)果與討論:（一）：實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象:a、在實(shí)驗(yàn)中首先加入雙縮腺試劑，再依次加入0.9%氯化鈉溶液、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液、相應(yīng)的大牛血清后溶液沒有明顯的顏色變化，呈淡藍(lán)色透明狀;b、

4、水浴20分鐘之后，B試管試管顯淡藍(lán)色；S試管和U試管顯淺紫色且S試管的顏色比U試管的顏色稍深。2、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：管號測定次數(shù)平均吸光度123S0.1870.1880.1870.1873U0.1200.1190.1190.11933、結(jié)果計(jì)算：將大牛血清和蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸光度帶入公式：血清總蛋白(g/L)=(Au/As)X蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液濃度(g/L),得出結(jié)果：血清總蛋白=44.586g/L(-):結(jié)果討論查閱資料得知，大牛血清總蛋白含量一般為60-80g/L,可是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻是44.586g/L,即使按照實(shí)驗(yàn)要求及步驟操作,結(jié)果還是出現(xiàn)了比較大的誤差，實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過討論，分析如下：1、成功的方面：a

5、.在本次試驗(yàn)出現(xiàn)了預(yù)期的結(jié)果：S和U試管溶液顯淡紫色，B試管顯淡藍(lán)色。S和U試管顯淡紫色是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)發(fā)生了雙縮服反應(yīng)，但是由于蛋白質(zhì)的含量偏少顯色較淺，B試管顯淺藍(lán)色的原因是B試管中沒有發(fā)生任何反應(yīng)，顯雙縮服試劑的淡藍(lán)色。b.水浴，吸光度測試等環(huán)節(jié)都能夠按照預(yù)定的步驟進(jìn)行，操作比較嚴(yán)謹(jǐn)。2、誤差分析：a.所測得的蛋白質(zhì)含量偏低，可能是由于樣品存儲(chǔ)不當(dāng)，造成待測的大牛蛋白水解，待測樣品中的蛋白質(zhì)總量本身就很低b.待測的大牛蛋白溶液正常，但是，標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液的濃度比標(biāo)示的高，造成測量結(jié)果偏C.操作過程有偏差，由于量取蛋白質(zhì)溶液的量比較少，在每個(gè)加樣步驟的少量偏差，都會(huì)造成結(jié)果誤差較大五：結(jié)論樣品的蛋白質(zhì)含偏低復(fù)習(xí)思考題1 .什么叫雙縮朦