選修三基礎(chǔ)知識(shí)匯總

1、選修三、背誦材料：1、 基因工程是在DNA 分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的， 又叫做 DNA 重組技術(shù)。變異類型基因重組2、基因工程的基本工具限制酶、DNA 連接酶、運(yùn)載體（常見的是質(zhì)粒）3、限制酶的功能：能夠識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)將兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。切割時(shí)不能破壞目的基因、標(biāo)記基因。4、酶DNA 連接酶：連接兩個(gè)雙鏈DNA 片段形成磷酸二酯鍵；限制酶：催化磷酸二酯鍵水解，形成DNA 片段；DNA 聚合酶：單個(gè)脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵，解旋酶：氫鍵斷開RNA 聚合酶：單個(gè)核糖核苷酸之間形成磷酸二酯鍵DNA 酶：催化磷酸二酯鍵水解，形成脫氧核苷酸5、

2、基因工程的基本操作程序是：目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測與鑒定7、目的基因的來源：（ 1）從自然界中已有的物種中分離。（ 2）人工合成【常用方法有逆轉(zhuǎn)錄法（提取目的基因的 mRNA）_ 和化學(xué)合成法_， 】獲取目的基因的方法有： 從基因文庫中獲取、 利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因，人工合成9、基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建（限制酶+DNA 連接酶處理質(zhì)粒和目的基因） ?；虮磉_(dá)載體的組成是：啟動(dòng)子目的基因終止子標(biāo)記基因+復(fù)制原點(diǎn)。啟動(dòng)子：位于DNA 上，其上有RNA 聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄起始密碼：位于 mRNA 上，開始翻譯標(biāo)記基因的作

3、用：鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因（培養(yǎng)基中加入抗生素進(jìn)行篩選） 。目的基因與標(biāo)記基因一般不是同一種基因。11、1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（ Ti 質(zhì)粒上的 T-DNA 可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的染色體） ， 其次還有 基因槍法和 花粉管 通道法等。受體細(xì)胞若是體細(xì)胞，還要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)。2） 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞： 最常用的方法是顯微注射技術(shù)。 受體細(xì)胞一般是 受精卵（具有全能性） ，若為體細(xì)胞，則需采用細(xì)胞核移植技術(shù)。3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：鈣離子處理，使細(xì)胞成為感受態(tài)細(xì)胞。12、目的基因

4、的檢測與鑒定：首先要檢測 轉(zhuǎn)基因生物的染色體 DNA 上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA 分子雜交技術(shù)。其次還要檢測 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA ，方法是采用分子雜交技術(shù)。（都用基因探針：用放射性同位素標(biāo)記的目的基因的單鏈，原 理都是堿基互補(bǔ)配對）最后檢測 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是抗原抗體雜交。都是觀察有沒有雜交帶。有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定， 即接種實(shí)驗(yàn) （即用病原體感染或讓蟲子吃） ?；蚬こ痰膬?yōu)點(diǎn)：定向改造生物的遺傳性狀14、 蛋白質(zhì)工程通過基因修飾或基因合成， 對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造， 或制造一種新的蛋白質(zhì)， 以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。 基因工程在原則上只能生產(chǎn)

5、自然界已存在的蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)的蛋白質(zhì)是自然界不存在的。程序：15、植物組織培養(yǎng)技術(shù)原理：植物細(xì)胞的全能性；植物體細(xì)胞雜交技術(shù)原理是：細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性，意義： 克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和的障礙。植物細(xì)胞全能性實(shí)現(xiàn)的條件：離體、一定的營養(yǎng)物質(zhì)、植物激素（生長素、細(xì)胞分裂素）、適宜的外界條件。16、植物組織培養(yǎng)技術(shù)（無菌操作）過程：離體的植物器官、組織或細(xì)胞典二 愈襁鈴胚狀體、叢芽等一-植物體。20、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）一剪碎一用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞一制成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中到10代（原代培養(yǎng)）一出現(xiàn)接觸抑制的細(xì)

6、胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理 分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)到 50代左右絕大多數(shù)細(xì)胞死亡，少數(shù)成為無 限增殖的細(xì)胞系（癌變特征）。原理：細(xì)胞增殖21、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加 一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。止匕外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防 止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。營養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素 等。通常需加入血清、血漿等天然成分。溫度：適宜溫度：哺乳動(dòng)物多是 36.5C + 0.5C； pH: 7.27.4。氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要

7、作用是維持培養(yǎng)液的pH。22、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)中選用去核卵（母）細(xì)胞做受體細(xì)胞的原因：含有使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)原理：細(xì)胞核的全能性。25、動(dòng)物細(xì)胞融合最大的應(yīng)用一一制備單克隆抗體。 單克隆抗體的制備中必須 事先對小鼠注射特定抗原，使其產(chǎn)生漿細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)，然后與骨髓瘤 細(xì)胞融合，得到3種融合的細(xì)胞；因此需要經(jīng)過兩次篩選，第一次用選擇 性培養(yǎng)基，選出雜交瘤細(xì)胞，第二次需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，選 出能分泌所需單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。26、(1)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。(2)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。27、精卵結(jié)合首先發(fā)生的是頂體

8、反應(yīng)防止多精入卵的的兩道屏障：透明帶反應(yīng)，卵黃膜封閉作用判斷受精的依據(jù)：透明帶和卵黃膜間隙有兩個(gè)極體28、動(dòng)物早期胚胎發(fā)育的基本過程是：受精卵 桑棋U 囊雁 原腸胚 (1)卵裂期的特點(diǎn)是：細(xì)胞有絲分裂，細(xì)胞數(shù)量不斷增加，但胚胎的總體 積并不增加，或略有減??；(2)桑根胚前細(xì)胞具有全能性；(3)囊胚的特點(diǎn)是：開始出現(xiàn)分化(內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞仍有全能性)，聚集在 胚胎一端個(gè)體較大的細(xì)胞稱為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將來發(fā)育成胎兒的各種組織， 外圍的細(xì)胞為滋養(yǎng)層細(xì)胞，中間的空腔稱為囊胚腔；29、胚胎干細(xì)胞來源于早期胚胎或從原始性腺中分離出來，主要特性是：在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能

9、性， 可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。30、試管動(dòng)物的培養(yǎng)過程：體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植。(1)體外受精過程是：卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)精子的采集和獲能 受精。(2) 采集的卵母細(xì)胞必需培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期，采集的精子必需進(jìn)行獲能處理獲得更多卵母細(xì)胞的方法：超數(shù)排卵處理,（注射促性腺激素）31、 胚胎移植時(shí)要移植到同種的、 生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi)， 其中胚胎移植是胚胎工程的最后一道“工序” 。胚胎移植的意義：充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖能力。32、胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)：動(dòng)物發(fā)情排卵后，同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。這就為供體的胚胎移入提供相同的生理環(huán)境。早

10、期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)。這就為胚胎收集提供了可能。受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。 這為胚胎的存活提供了可能。供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系， 但供體胚胎的遺傳特性在孕育過程中不受影響。33、胚胎移植的基本程序主要包括：對供、受體的選擇和處理?！具x擇：供體要求遺傳性能和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的個(gè)體， 受體要求有健康的體質(zhì)和正常的繁殖能力； 處理： 首先用激素對供體和受體母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理。 然后用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理）配種或人工授精（屬于體內(nèi)受精）。對胚胎收集（沖卵一一早期胚胎）、檢查、培養(yǎng)或保存。胚胎移植。移 植后檢查受體是否妊娠。產(chǎn)下胚胎移植的新個(gè)體。胚胎移植時(shí)間：囊胚或桑椹胚如何對胚胎進(jìn)行性別鑒定？取滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA 分析34、胚胎分割一般選擇發(fā)育良好，形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。對囊胚階段的胚胎分割時(shí)， 要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割， 否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。意義：提高胚胎的利用率。 屬于無性繁殖。35、利用的技術(shù)：（ 1）轉(zhuǎn)基因植物：基因工程、植物組織培養(yǎng)。（ 2）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：基因工程、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植。（ 3）克隆動(dòng)物：細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。（ 4）轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物：基因工程、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。 （ 5）試管動(dòng)物：體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植。（ 6）制備