氯化膽堿測定之原理與方法

1、氯化膽堿測定之原理與方法大綱 氯化膽堿之簡介 含量測定方法介紹 過氯酸無水滴定法 銀量法 凱氏定氮法 四苯硼鈉重量法 雷氏鹽重量法 離子層析法簡介 屬于水溶性維生素B群(Vitamin B4) 因幼畜自身尚無合成膽堿的功能，體內所需膽堿全部依賴外界供給 膽堿最早于1940年由豬膽汁中被分離出來 膽堿是生物體代謝的中間產物，它常以氯化物等鹽的形式存在簡介 主要的膽堿鹽有氯化膽堿(choline chloride)、氯化琥珀膽堿(succinyl choline chloride)、溴化氨酰膽堿(hexabiscarbacholine )、氯化乙酰膽堿(acetylcholine chloride

2、) 、磷酰膽堿(phosphorylcholine) 、氯化氨甲酰膽堿(bethanechol chloride )等，以氯化膽堿最常做為飼料添加劑簡介 1 mg choline chloride = 0.87 mg choline 分子式：HOCH2CH2N(CH3)3Cl CAS No：67-48-1 分子量：139.63 CA name：2-hydroxy-N,N,N-trimethylethanaminium chloride 膽堿之生理作用 磷脂質(phospholipids)成份之一, 增進脂質傳遞及細胞建構 合成乙酰膽堿(acetylcholine;神經(jīng)傳導物neurotrans

3、mitter)之前驅物(precursor) 參與動物體內的甲基化反應，是重要的甲基供給體氯化膽堿之制備 環(huán)氧己烷法 三甲胺(trimethylamine)與環(huán)氧己烷(ethylene oxide)反應 生成液體氯化膽堿 方法簡單，成本低質量好，但設備要求耐酸耐腐蝕 氯乙醇法 三甲胺、氯乙醇(chloroethanol)與水加熱反應 生成晶體氯化膽堿 氯化膽堿質量優(yōu)劣以三甲胺殘留來衡量 粉末狀氯化膽堿是以液體狀態(tài)均勻浸漬在載體，再經(jīng)干燥除水而成 載體種類： 農產副產品：小麥麩皮、玉米芯粉、玉米桿粉、稻殼粉、花生殼粉、薯類淀粉渣 天然礦物：沸土、膨泣土、海泡石、膨化珍珠巖 人工合成化合物：二氧化

4、硅、水合硅酸 氯化膽堿對其他維生素有破壞作用，特別是有金屬元素存在時，對Vitamin A、D、K的破壞較快，因此在復方制劑中不建議加入膽堿 添加氯化膽堿后之補助飼料應盡快使用氯化膽堿含量測定過氯酸無水滴定法 氯化膽堿與醋酸汞反應，氯化膽堿轉化為醋酸鹽和難電離的氯化汞，在醋酸中以高氯酸對生成的醋酸鹽進行滴定 稱取80下干燥3h的樣品0.7g于250mL三角瓶中，加40mL甲醇，充分搖動30min后過濾，再分別用20mL、15mL、15mL甲醇洗滌沉淀3次，將濾液和洗液合并，在水浴上蒸發(fā)至干，以20mL冰醋酸溶解后，加2mL醋酸酐，10mL醋酸汞和兩滴結晶紫指示劑，用0.1M過氯酸溶液滴定至藍色

5、，同時做空白 X（VV0）C0.1396/M100C: 高氯酸標準溶液實際濃度(M) V: 消耗高氯酸標準溶液體積(ml)V0: 空白試驗消耗硝酸銀標準溶液體積(ml)M: 檢品質量(g) 0.1396: 氯化膽堿莫耳質量(g/m mol) 銀量法 分析檢品中氯含量來確定氯化膽堿的含量 稱取0.5g樣品于250mL定量瓶中，加50mL水搖勻后，加0.5mL鉻酸鉀，用0.1M硝酸銀溶液滴定至磚紅色，同時做空白 C（VV 0） 0.1396/（M50/100）100C: 硝酸銀標準溶液的實際濃度(M)V: 消耗硝酸銀標準溶液體積(ml)V0: 空白試驗消耗硝酸銀標準溶液體積(ml)M: 檢品質量(

6、g)0.1396: 氯化膽堿莫耳質量(g/m mol) 凱氏定氮法 稱取樣品1g左右于帶有白色定性濾紙的漏斗中，用水沖洗10次左右，取出濾紙烘干，以凱氏定氮法測定含氮量N1，同時稱0.5g0.6g直接測定含氮量N2。 氯化膽堿含量= （N2-N1）/10.03 100%四苯硼鈉(Sodium tetraphenylboron)重量法 稱取樣品約1g于100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度搖勻，過濾，精確量取濾液10mL于100mL燒杯中，加20mL水，一滴AlCl3三氯化鋁（10），20mL四苯硼鈉（四苯硼鈉C24H20BNa 2g加水溶解稀釋至100mL，加2滴0.5M NaOH搖勻放置2

7、4h，過濾，可保存5天），不斷振搖30min，用預先烘干稱重坩堝過濾，水洗燒杯4次，每次10mL左右，并將濾液一并過濾，將沉淀在105烘干2h，取出放入干燥器內冷卻，稱重。 氯化膽堿含量=沉淀質量(g)0.3298100/樣品質量(g)10 1g沉淀=0.3298g氯化膽堿。 雷氏鹽 (二氨基四硫代氰酸鉻銨; Reinecke salt)重量法 試液中氯化膽堿與雷氏鹽(二氨基四硫代氰酸鉻銨)反應，形成結晶沉淀，用重量法測定氯化膽堿含量 W 2 ( m 2 -m 1 )/m100.33045100 m 2: 沉淀(g)m 1: 空白試驗沉淀(g)m: 檢品(g) 0.33045: 氯化膽堿分子量

8、與沉淀物分子比值10: 樣品溶液稀釋倍數(shù)The Council on Pharmacy and Chemistry of American Medical Association (AMA)離子層析法（Ion Chromatography） 利用離子交換原理將帶有不同電荷、離子半徑和結構等有差異的離子分離 測定膽堿離子測定方法之盲點 不肖廠商為獲取高額利潤，于產品中摻假以降低成本。 利用檢測方法之非特異性，摻入在標準規(guī)定條件下亦能發(fā)生此反應且現(xiàn)象基本相同的物質，以致無法正確反映出氯化膽堿的真實含量。 根據(jù)氯化膽堿的分子式C5H14NClO（分子量：13963），純氯化膽堿氮含量為10，氯含量為

9、25.4 常見摻假物：三甲胺鹽酸鹽(trimethyl amine hydrochloride; C3H10NCl ) 、氯化銨(ammonium chloride; NH4Cl) 、氯化鈉(sodium chloride; NaCl) 、氯化鉀(potassium chloride; KCl) 、硝酸鹽(nitrate)、亞硝酸鹽(nitrite) 、尿素(urea)、脲醛聚合物(ureaformaldehyde polymer) 過氯酸無水滴定法 氯化銨、氯化鈉、氯化鉀、三甲胺鹽酸鹽等也能與過氯酸反應，所以該檢測方法對氯化膽堿不具特異性 在合成氯化膽堿過程中，其中間產物三甲胺鹽酸鹽的殘留量

10、每多1，用此法測定時，所測得之氯化膽堿含量就會多1.4銀量法 由于該方法測定的是氯離子，可溶性氯化物或三甲胺鹽酸鹽均會使測定結果偏高凱氏定氮法 凱氏法所測得的氮含量并不全是氯化膽堿中所含氮，還有其他物質所含的氮 含有硝酸鹽，亞硝酸鹽，尿素，脲醛聚合物等含氮化合物，均會使檢測結果偏高四苯硼鈉重量法 Pb2+、Ag+、鉀鹽、銨鹽、有機胺、生物堿及其他四級胺鹽類化合物均能與四苯硼鈉生成沉淀而干擾測定，使結果偏高雷氏鹽 Reinecke salt （二氨基四硫代氰酸鉻銨） 重量法 環(huán)六次甲基四胺 (hexamethylene tetramine)不會被堿分解，能與雷氏鹽反應生成粉紅色沉淀，使測定結果偏

11、高 采用酸堿水解雷氏鹽重量法測定 即先將樣品加2M硫酸溶液10mL煮沸30min，使環(huán)六次甲基四胺分解后，再加堿煮沸去氨，在pH6左右與雷氏鹽反應，形成的粉紅色沉淀用重量法即可檢測出氯化膽堿的含量離子層析法（Ion Chromatography） 可能有不同化合物與氯化膽堿有同樣或相近滯留時間結論 多重測試方法以確定含量 離子層析法是未來趨勢大綱 氯化膽堿之簡介 含量測定方法介紹 過氯酸無水滴定法 銀量法 凱氏定氮法 四苯硼鈉重量法 雷氏鹽重量法 離子層析法簡介 主要的膽堿鹽有氯化膽堿(choline chloride)、氯化琥珀膽堿(succinyl choline chloride)、溴化

12、氨酰膽堿(hexabiscarbacholine )、氯化乙酰膽堿(acetylcholine chloride) 、磷酰膽堿(phosphorylcholine) 、氯化氨甲酰膽堿(bethanechol chloride )等，以氯化膽堿最常做為飼料添加劑銀量法 分析檢品中氯含量來確定氯化膽堿的含量 稱取0.5g樣品于250mL定量瓶中，加50mL水搖勻后，加0.5mL鉻酸鉀，用0.1M硝酸銀溶液滴定至磚紅色，同時做空白 C（VV 0） 0.1396/（M50/100）100C: 硝酸銀標準溶液的實際濃度(M)V: 消耗硝酸銀標準溶液體積(ml)V0: 空白試驗消耗硝酸銀標準溶液體積(ml)M: 檢品質量(g)0.1396: 氯化膽堿莫耳質量(g/m mol) 凱氏定氮法 稱取樣品1g左右于帶有白色定性濾紙的漏斗中，用水沖洗10次左右，取出濾紙烘干，以凱氏定氮法測定含氮量N1，同時稱0.5g0.6g直接測定含氮量N2。 氯化膽堿含量= （N2-N