實(shí)驗(yàn)三、微生物的分離純化與觀察(1).

1、福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)二微生物的分離純化、接種培養(yǎng)與保藏一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解微生物分離和純化的原理2、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化接種 培養(yǎng)的基本操作技術(shù)，掌握微生物的無菌操作技 術(shù)實(shí)驗(yàn)原理為了生產(chǎn)和科學(xué)研究的需要，往往需要從自然界混雜的微 生物群中分離單的菌種，這種獲得單一-菌株純培養(yǎng)的方 法稱為微住物的分離。為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，町采用下列兩種方法：一 種是捉供有利于該微生物生K繁殖的眾適培養(yǎng)基及培養(yǎng)條 件。如耍從土壤中分離門生固氮菌，則其培養(yǎng)基中是不能 含有N源，這種培養(yǎng)基就比較適于能利用空氣中N2的微生 物。期一種方法是在培養(yǎng)某中加入茱種化學(xué)物質(zhì)，以抑制 人們所不需要

2、的微生物的生K繁殖。分離上壤中真菌，往 往在分離貞菌的PDA培養(yǎng)基中加入適肖的孟加拉紅，鏈霉 素和金需素等化學(xué)藥品，H的在丁抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，這樣更 冇利r獲得其純培養(yǎng)。福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院平板分離的方法主要有:1.平板劃線分離法;2、稀釋涂布平板法。/ 除能有效分離純化微生物外 ,還可用于測(cè)定樣品中活菌 數(shù)量。土壤屮微牛物數(shù)量眾多，在肥沃上壤屮固氮 菌數(shù)顯:也很多，門然界中多數(shù)氮索養(yǎng)料是由微生 物固氮的結(jié)果，固氮菌般可分為口牛固氮菌和 共生固氮菌兩類。要分離H生固氮閑，常用阿斯畢無氮培養(yǎng)基 這種選擇培養(yǎng)基，控制其適宜環(huán)境條件，使它在 培養(yǎng)基上大量繁夕TI,然后通過稀釋法和劃線分離 純化法，使

3、它在培養(yǎng)基上形成單菌落，如分離所 得不純，需要進(jìn)一步純化，直到得到純種福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)基：阿斯畢無氮培養(yǎng)基。2、菜園土。-3、滅菌培養(yǎng)皿、銀子、剪刀.接種針、酒精燈等。（）富集培養(yǎng)：仁用已滅菌后冷卻至50OC左右的阿斯畢培 養(yǎng)基倒成平板。-2、用己滅菌的銀了將黃豆粒大的菜園上擺 入已冷凝的平板培養(yǎng)基上。-3、止曲放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，28OC培養(yǎng)34 天后，在土粒周圍有混濁半透明的膠狀菌 落出現(xiàn)，冇的在后期會(huì)產(chǎn)牛褐色的色素。福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（二）劃線分離純化：（下次實(shí)驗(yàn)）1、用已溶化至50OC阿斯畢培養(yǎng)皐倒入平板。2、川接種環(huán)挑取上述菌落少許，在冷凝平板上進(jìn) 行劃線分離

4、，而后置28OC培養(yǎng)4犬。ATuni plate llirough 90°Flanie loopTurn Pliiie throuaV 90 khmicliim plateI Uitough 90'福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院®（三）純化、鏡檢，得到純種培養(yǎng)（下次實(shí)驗(yàn)）1、平板上出現(xiàn)單菌落，按無閑操作移入阿斯畢培養(yǎng)基斜 面試管中，28OC培養(yǎng)4天。2、鏡檢：將斜而菌株進(jìn)行涂片、染色、鏡檢。如足粗短 桿狀或球狀的單一形態(tài)的菌體細(xì)胞較人，常呈單個(gè)或“8” 字排列，在細(xì)胞衣面冇較”的莢膜者，即為口生固氮菌。 如有朵閑，需耍進(jìn)一步劃線純化。-3、將得到純化菌株，移接到另一阿斯畢培養(yǎng)基斜而f?, 28OC培養(yǎng)34天，即獲得純培養(yǎng)菌，可冷凍保存，備用。五注意事項(xiàng)-在微生物分離、純化每一操作環(huán)節(jié)，要嚴(yán) 格按照無菌操作進(jìn)行。平板劃線時(shí)，劃線部位不可重疊。劃線時(shí)，每次都要將接種壞上多余菌體燒 掉。-培養(yǎng)皿要貼標(biāo)簽，包括班級(jí)、姓名福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院六思考題-1、分析阿斯畢培養(yǎng)基成分，說明其適用于 分離門生固氮菌的原因。-2、劃線分離時(shí)，為