安徽醫(yī)科大學(xué)研究生細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)考試重點(diǎn)匯總

1、名詞解釋?zhuān)?. 群體倍增時(shí)間：細(xì)胞指數(shù)增長(zhǎng)期時(shí)，細(xì)胞群倍增所需的時(shí)間。是由于表示群體細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)細(xì)胞分裂活動(dòng)的程度，是判斷細(xì)胞生長(zhǎng)是否旺盛的重要指標(biāo)。2. 接觸抑制(con tactin hibiti on3. 密度抑制 (density):細(xì)胞相互接觸后失去運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。inhibition )：由于細(xì)胞密度過(guò)大，培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)耗盡，代謝產(chǎn)物過(guò)多和生存空間消失所引起的細(xì)胞增殖的抑制現(xiàn)象。4. 腫瘤干細(xì)胞(tu mor stem cells ，TSC)表現(xiàn)為一種特殊類(lèi)型的干細(xì)胞，具備高度增殖能力與自我更新能力，也具備多向分化的潛能。TSC增殖過(guò)程中，通過(guò)不均一分裂，一個(gè)裂形成一個(gè)新的TSC和另一

2、個(gè)可最終分化為包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞的子細(xì)胞， 是維持TSC數(shù)目穩(wěn)定并產(chǎn)生腫瘤。5. 細(xì)胞匯合(Con flue nt):指細(xì)胞增殖生長(zhǎng)相互連接成片占據(jù)所有底物面積現(xiàn)象。6. 飽和密度(Saturationdensity):在特殊培養(yǎng)條件下，每平方厘米(單層培養(yǎng))或每毫升細(xì)胞懸液內(nèi)可達(dá)到的最大細(xì)胞數(shù)。7. 二倍體細(xì)胞系或株(Diploid cell line orstrain):具有二倍體染色體數(shù)的細(xì)胞系或株。8. 二倍體(Diploid):指雙倍數(shù)的染色體數(shù)或具有此數(shù)的細(xì)胞系。9. 組織工程：是應(yīng)用生命科學(xué)和工程學(xué)的原則及方法，在正確認(rèn)識(shí)正常及病理兩種狀態(tài)下的組織結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的基礎(chǔ)上，

3、 研究、開(kāi)發(fā)用于修復(fù)、維護(hù)、 促進(jìn)人體各種組織或器官損傷 后的功能和形態(tài)的生物替代物的一門(mén)新興學(xué)科。10. 細(xì)胞融合(Cell fusion)11. 細(xì)胞富集：數(shù))的程度。12. 三維培養(yǎng)：方法。13. 平衡鹽溶液TSC分其結(jié)果:指兩個(gè)獨(dú)立的細(xì)胞借媒介物 (PEG等)融合成雜種細(xì)胞的過(guò)程。 當(dāng)細(xì)胞分離純化并不完全徹底，培養(yǎng)物中能達(dá)到以某種細(xì)胞為主(占絕大多把細(xì)胞懸液接種在一定立體形態(tài)的支架上，使細(xì)胞生長(zhǎng)在三維環(huán)境中的培養(yǎng)(bala need salt soluti on, BSS):簡(jiǎn)稱(chēng)鹽溶液，集緩沖液的緩沖能力、生 兼具緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、維持量鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)特點(diǎn)于一體

4、。 滲透壓、同時(shí)供給細(xì)胞生存所需的能量和無(wú)機(jī)離子成分的作用。14. 生長(zhǎng)基質(zhì)(growth substratum )：培養(yǎng)器皿表面包被的一層能改善生長(zhǎng)表面的特性，促 進(jìn)細(xì)胞粘附和貼壁的物質(zhì)。15. 去分化(dedifferentiation )：指已成熟的細(xì)胞和組織倒退分化，返回原始幼稚的狀態(tài)。16. 消化液：在原代細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞傳代時(shí)，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二鈉(EDTA,其次是一些特殊的組織細(xì)胞培養(yǎng)用的各型膠原酶。在原代細(xì)胞培養(yǎng)中，使用消化液從組織塊中分離 長(zhǎng)表面并離散成單個(gè)細(xì)胞。17. 消毒 dis infection 滅菌 s terilization 物、繁殖

5、體和芽胞。18. 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：指細(xì)胞發(fā)生了不可逆轉(zhuǎn)的遺傳改變而引起恒定的表型改變的細(xì)胞系。19. 雜交瘤技術(shù)：又稱(chēng)單克隆抗體制備技術(shù)，是指建立雜交瘤細(xì)胞系的技術(shù)，通常指B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，即將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，以建立可以分泌單一性抗體的雜交瘤細(xì)胞系的技術(shù)。20. 指由一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的，只識(shí)別一種抗原決定簇的均質(zhì)抗體。21. 干細(xì)胞：是指具有無(wú)限或較長(zhǎng)期的自我更新能力、多種分化潛能和高度增殖能力的細(xì)胞。22. 全能干細(xì)胞，如ES細(xì)胞。全能干細(xì)胞可以分化成人體的各種細(xì)胞，這些細(xì)胞構(gòu)成人體的各種組織和器官。(散)出單個(gè)的細(xì)胞；在進(jìn)行細(xì)胞傳代時(shí)，消化液使細(xì)胞脫離生殺死物體上病原微

6、生物的方法。殺滅物體上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生23. 成體干細(xì)胞 ：在胎兒、 兒童和成人組織中存在的具有自我更新、 多向分化潛能和增殖特 性的多能干細(xì)胞，統(tǒng)稱(chēng)為“成體干細(xì)胞” 。PEG等。24. 融合劑 ：兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合過(guò)程中，能促使細(xì)胞融合并使細(xì)胞融合的頻率顯著 增大的物質(zhì)，如仙臺(tái)病毒，25. 克隆化：專(zhuān)指一般DNA在與載體DNA分子重組后，重組DNA分子由載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)， 依賴(lài)載體的復(fù)制能力在宿主細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增，形成一個(gè)無(wú)性繁殖系的過(guò)程。26. 細(xì)菌污染 ：包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物（真 菌、細(xì)菌、病毒和支原體） 、化學(xué)

7、物質(zhì)及細(xì)胞。培養(yǎng)的細(xì)胞被細(xì)菌污染均會(huì)造成細(xì)胞受損和死亡， 是細(xì)胞培養(yǎng)工作的大敵。細(xì)胞發(fā)生污染時(shí)，常有培養(yǎng)液變渾濁和 PH發(fā)生改變等現(xiàn)象，鏡下觀察細(xì)胞變形、 生長(zhǎng)緩慢或分裂相消失， 以及細(xì)胞圓縮脫落等現(xiàn)象。常有抗生素預(yù) 防該污染。27. iPS ：誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞即誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，是 指體細(xì)胞經(jīng)過(guò)基因“重新編 排”，回歸到胚胎細(xì)胞的狀態(tài)，從而具有類(lèi)似胚胎干細(xì)胞的分化能力。這種方法 可以不需要用人胚胎或卵母細(xì)胞，就能制造干細(xì)胞。28. 克隆 ：指通過(guò)一定方法獲得由單個(gè)細(xì)胞無(wú)性繁殖形成的細(xì)胞集落。簡(jiǎn)答題：物理污染：溫度、放射線、震動(dòng)、輻射等； 化學(xué)污染：水、血清、容器、孵箱等的有毒物質(zhì)的殘留； 生物

8、污染（支原體污染） ：外界的動(dòng)物、微生物如霉菌、細(xì)菌、支原體和其它類(lèi) 型的細(xì)胞都可能侵入培養(yǎng)環(huán)境引起污染。1）1. 簡(jiǎn)述細(xì)胞培養(yǎng)污染的種類(lèi)及污染的預(yù)防措施種類(lèi)：（1）（2）（3）預(yù)防措施：CO2 孵箱、生良好的規(guī)章制度：只有相關(guān)人員才可進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)，細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)必須和 其他區(qū)域分開(kāi)，細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)應(yīng)布局合理； 良好的無(wú)菌操作：所有玻璃器皿和培養(yǎng)液與試劑的配制應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌，吸入 或吸出液體時(shí)避免傾倒，不要觸碰細(xì)胞培養(yǎng)瓶的瓶口，清潔區(qū)和污染區(qū)的 材料應(yīng)單獨(dú)處理； 保持工作區(qū)清潔：常規(guī)清洗地面和臺(tái)面，定期清潔水浴箱、 物安全柜等，及時(shí)清理廢棄物； 合理利用抗生素 建立細(xì)胞庫(kù)：消除了隱蔽污染的潛在危害 細(xì)胞

9、污染的檢測(cè)2. 試述細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念、原理、優(yōu)缺點(diǎn)及實(shí)際意義1） 概念：細(xì)胞（組織）培養(yǎng)是指從生物體內(nèi)取出細(xì)胞（組織），模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無(wú) 菌、適當(dāng)溫度和一定營(yíng)養(yǎng)條件下，使之生存、生長(zhǎng)并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。2）原理及優(yōu)缺點(diǎn)： 細(xì)胞培養(yǎng)是將確定所選組織用剪碎的小組織塊或分離的單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培 養(yǎng)，這種培養(yǎng)失去了原有組織類(lèi)型及某些生化特征，但它們可以增殖，特性化，獲得遺傳 背景相同的群體，可以保存。3）實(shí)際意義：組織（細(xì)胞）培養(yǎng)對(duì)醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)的意義 培養(yǎng)的組織器官或細(xì)胞，能再一定范圍和程度上反映生命活動(dòng)規(guī)律和機(jī)體功能特點(diǎn)。 培養(yǎng)的細(xì)胞為生命科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)各種研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。如藥物篩選

10、，療劑評(píng)價(jià)， 新生物制品研發(fā)， 研究病毒及其他微生物， 發(fā)現(xiàn)新的傳染因子， 組織工程中的支撐技術(shù)等。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為商品化生物技術(shù)產(chǎn)品的核心。如目前可提供的產(chǎn)品，病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗體型免疫調(diào)節(jié)劑：干擾素、 白介素和集落刺激因子等；多肽生長(zhǎng)因子：表皮生長(zhǎng)因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子等；酶類(lèi)：組織型纖溶酶原激活劑；激素：EPO和促黃體生成素等；殺蟲(chóng)劑：桿狀病毒；腫瘤特異抗 原；癌胚抗原；通過(guò)雜交瘤生產(chǎn)的各種單克隆抗體；細(xì)胞本身（如干細(xì)胞）；皮膚重植等。4）組織（細(xì)胞）培養(yǎng)的局限性：細(xì)胞（組織）培養(yǎng)，包括器官培養(yǎng)終歸是離體培養(yǎng)，缺少 生物整體的嚴(yán)密聯(lián)系， 不能代表整個(gè)機(jī)體。 在進(jìn)

11、行醫(yī)學(xué)生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程及對(duì)結(jié)果的 評(píng)估都必須考慮這些。把好每一個(gè)關(guān)口，盡可能禁止任何有污染的物品進(jìn)入培養(yǎng)操作環(huán)節(jié)； 抗生素：一般用常用量的 510 倍作沖擊療法。用藥 2448h 后， 再換常規(guī)培養(yǎng)液。 加溫處理：根據(jù)支原體對(duì)熱敏感的特點(diǎn)，將受支原體污染的細(xì)胞放置在41 C作用510h,最長(zhǎng)不超過(guò)18h后，以殺滅支原體。動(dòng)物體內(nèi)接種：將支原體污染的細(xì)胞接種在同種動(dòng)物的皮下或腹腔，借動(dòng)物體內(nèi)的免3. 簡(jiǎn)述細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如何進(jìn)行微生物污染防治1）2）3）4）疫系統(tǒng)消滅支原體。待一定時(shí)間后取出細(xì)胞，做原代培養(yǎng)再進(jìn)行繁殖。4. 試述目前體外細(xì)胞培養(yǎng)中廣泛使用最多的天然培養(yǎng)基類(lèi)型及其作用天然培養(yǎng)基 （液）的

12、種類(lèi)很多， 包括生物性體液 （如血清、 血漿）、組織浸液 （胚胎浸液） 、 水解乳蛋白等。1 ）血清：血清中含有基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 血清中含有激素與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子 血清中含有促進(jìn)細(xì)胞粘附和鋪展的因子 血清中含有結(jié)合蛋白 血清中含有抗機(jī)械損害的非特異性保護(hù)物質(zhì) 血清中含有 pH 緩沖物質(zhì) 血清中含有蛋白酶抑制劑2）胚胎浸出液（ embryonic extract ）是早期動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用的天然培養(yǎng)基，如雞胚浸出液、牛胚浸出液等。胚胎浸出液主要成分為大分子蛋白和小分子氨基酸， 有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。3） 水解乳蛋白（ lactalbumin hydrolysate）為乳白蛋白經(jīng)蛋白酶水解的產(chǎn)物，含有富

13、的氨基酸，是常用的天然培養(yǎng)基，可用于許多細(xì)胞系和原代細(xì)胞的培養(yǎng)。5. 血清的優(yōu)缺點(diǎn)：1）優(yōu)點(diǎn)： 血清中含有基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 血清中含有激素與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子 血清中含有促進(jìn)細(xì)胞粘附和鋪展的因子 血清中含有結(jié)合蛋白 血清中含有抗機(jī)械損害的非特異性保護(hù)物質(zhì) 血清中含有 pH 緩沖物質(zhì) 血清中含有蛋白酶抑制劑2 ）缺點(diǎn)： 血清中也存在不少有害于細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的物質(zhì) 血清的成分不明確，影響對(duì)結(jié)果的分析 對(duì)多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞來(lái)講， 血清并不是細(xì)胞在體時(shí)直接接觸的生理性液體， 只有在傷口愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)。血清也具有潛在的細(xì)胞毒作用, 除了特異性抑制成分、

14、 細(xì)菌毒素以及脂類(lèi)成 分之外,還含有多胺氧化酶等。不同動(dòng)物、 不同批次的血清成分和活性差別較大, 要分批篩選,而且永遠(yuǎn)不可能保持批次間的一致； 在培養(yǎng)液中使用血清會(huì)增加成本,尤其是對(duì)于動(dòng)物細(xì) 使用胎牛血清培養(yǎng)的情況更如此； 血清中有時(shí)所含的生長(zhǎng)因子水平不足而需要補(bǔ)充,使得培養(yǎng)結(jié)果不穩(wěn)定。 需胞的大規(guī)模培養(yǎng)以及若補(bǔ)充過(guò)量會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。培養(yǎng)批次與血清批次不同,生長(zhǎng)因子水平是難以控制的。6. 簡(jiǎn)述體外培養(yǎng)細(xì)胞的主要生物學(xué)特點(diǎn) 去分化；貼壁鋪陳；接觸抑制；密度依賴(lài)性生長(zhǎng)抑制7. 體外培養(yǎng)用液的種類(lèi)及用途主要包括 ：培養(yǎng)液 （維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的基本溶液, 是組織細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)最重要的條 件。）、緩沖

15、液（中和培養(yǎng)液中的酸性物質(zhì)） 、平衡鹽溶液（配抗生素、消化液、洗滌細(xì)胞 等）、消化液（分離細(xì)胞）、血清、pH調(diào)整液和抗生素等其它常用液。8. 比較天然和合成培養(yǎng)基的優(yōu)缺點(diǎn)1）天然培養(yǎng)基：最初的體外細(xì)胞培養(yǎng),均采用天然培養(yǎng)基。其主要取自動(dòng)物體液或從動(dòng)物 組織中分離提取。優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)豐富,培養(yǎng)效果良好；缺點(diǎn)： 成分復(fù)雜, 來(lái)源受限, 影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和結(jié)果的分析, 易發(fā)生支原體染。2）合成培養(yǎng)基：細(xì)胞在體內(nèi)生存生長(zhǎng)所需物質(zhì)的種類(lèi)和數(shù)量,用人工方法模擬合成的。優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn),組分和含量相對(duì)固定成本低。缺點(diǎn)：缺少某些成分,不能完全滿(mǎn)足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。9. 試述細(xì)胞體外培養(yǎng)的條件 體外培養(yǎng)細(xì)胞

16、的基本要求主要包括細(xì)胞接種、培養(yǎng)液成分、酸堿度、氣體條件、溫度、水 的純度及無(wú)菌條件。1）2）細(xì)胞接種：接種細(xì)胞密度 10-4-10 -5。選擇對(duì)數(shù)期的細(xì)胞接種。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：天然培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)成分復(fù)雜，包括血清、組織浸出液、淋巴液、水解乳蛋白等；合成培養(yǎng)基：包括水、無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、維生素、氨基酸等；3）酸堿度：細(xì)胞能耐受的 pH范圍是6.6-7.8，最是的pH為1.2-1.4，要依靠緩沖系統(tǒng)調(diào) 節(jié),主要是 CO2-NaHCO3 系統(tǒng)。pH,同時(shí)也用于合成細(xì)胞物質(zhì)。4）氣體：細(xì)胞生長(zhǎng)需要,主要用于調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的5 ）溫度：最適宜生長(zhǎng)的溫度為 3537C;6 ）水：一般使用的是去離子水或三蒸水,適宜細(xì)

17、胞培養(yǎng)；7 ）抗生素：加入兩性霉素可控制微生物的生長(zhǎng)。10. 體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的三個(gè)顯著特征：永生性、不受控增殖性、致瘤性。（ 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的特征 ）1 ）永生性也稱(chēng)不死性。在體外培養(yǎng)中表現(xiàn)為細(xì)胞可無(wú)限傳代而不凋亡。體外培養(yǎng)中的腫 瘤細(xì)胞系（株）都表現(xiàn)有這種性狀。2）細(xì)胞接種同種動(dòng)物或裸鼠后的致瘤性是客觀反映細(xì)胞惡性程度的指標(biāo)。3）失去接觸抑制,細(xì)胞能相互重疊向三維空間發(fā)展,形成堆積物。 失去錨著依賴(lài)性（停泊依賴(lài)性） ,可在瓊脂、甲基纖維素等支撐物上生長(zhǎng)。癌細(xì)胞或培養(yǎng)中發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化后的單細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),形成集落的能力比正常細(xì)胞強(qiáng)。11. 簡(jiǎn)述原代腫瘤細(xì)胞制備過(guò)程及其注意事項(xiàng)及如何建成永久性細(xì)胞系 癌

18、細(xì)胞建系的方法和程序相似于正常細(xì)胞， 包括標(biāo)本收集和處理、 原代培養(yǎng)、 傳代、 換液、 凍存、復(fù)蘇等過(guò)程。1 ）取材：取材部位非常重要，要挑選活力較好的部位，一般是癌組織最外層最活躍細(xì)胞。 注意去除標(biāo)本中混雜的間質(zhì)組織。2 ）分離：機(jī)械方法、酶消化法，其中酶消化法是分散癌細(xì)胞的好方法。3 ）接種細(xì)胞：消化后制備的癌細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)應(yīng)有足夠的細(xì)胞密度，通常接種細(xì)胞濃度為5X 105/ml, 37C培養(yǎng)。4 ）成纖維細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)的去除：常采用機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法等。5 ）選擇性培養(yǎng)基： 選擇性培養(yǎng)基是針對(duì)特殊細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)要求設(shè)計(jì)的。在癌細(xì)胞建系中，選擇性培養(yǎng)基的應(yīng)用是提高癌細(xì)胞體外存活、抑制成纖維

19、細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)鍵技術(shù)改進(jìn)。6 ）飼養(yǎng)層： 在培養(yǎng)器皿底部接種能形成接觸性抑制的成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層，可以有利于癌細(xì)胞生長(zhǎng)和抑制癌組織中正常成纖維細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)。7）及時(shí)換液癌細(xì)胞系建立注意事項(xiàng) ：取材應(yīng)選擇活力較好的部位，盡快培養(yǎng)且要防止污染。及時(shí)去 除生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞。掌握好傳代時(shí)間，細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)到足夠量時(shí)不要急于傳代。早期應(yīng) 先以高濃度接種，再逐漸降低。對(duì)于增殖能力低的細(xì)胞，應(yīng)放入飼養(yǎng)層中培養(yǎng)，并加入 一些促生長(zhǎng)物質(zhì)。精心傳代、換液、避免污染，需經(jīng)半年以上的細(xì)胞培養(yǎng)，方能夠達(dá)到 建立細(xì)胞系的目的。50 次以上如何建成永久性細(xì)胞系： 建立癌細(xì)胞系需要在體外進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)和傳代，傳代 才能被認(rèn)為是永久性細(xì)

20、胞系。建系過(guò)程需要不斷凍存以防細(xì)胞系中斷。12. 雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的三個(gè)技術(shù)基礎(chǔ)（關(guān)鍵） ：1） B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞： B淋巴細(xì)胞（B lymphocytes ）:接受抗原刺激后，能分泌 針對(duì)該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。本身是一種終末分化細(xì)胞，通 常不再進(jìn)行細(xì)胞分裂， 存活一段時(shí)間后便會(huì)死亡短命細(xì)胞。 骨髓瘤細(xì)胞 （myeloma cells） ：惡性增殖的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，只要營(yíng)養(yǎng)條件適合可永遠(yuǎn)分裂和存活長(zhǎng)命細(xì)胞。沒(méi) 有抗體分泌。經(jīng)篩選HGPRT或TK-O2） 細(xì)胞融合技術(shù)：分泌抗體短命脾細(xì)胞（B 淋巴細(xì)胞 ） 、長(zhǎng)命不分泌抗體骨髓瘤細(xì)胞、分 泌抗體長(zhǎng)命雜交瘤細(xì)胞。3 ）雜交瘤細(xì)

21、胞的篩選：用HAT選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，只有雜交瘤細(xì)胞被篩選出。13. 試述雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體三個(gè)基本環(huán)節(jié)和兩個(gè)決定因素 三個(gè)基本環(huán)節(jié)1）漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系，骨髓瘤細(xì)胞NS1或SP2/0，需通過(guò)8-氮鳥(niǎo)嘌呤選擇出來(lái)，有利于 HAT選擇培養(yǎng)基篩選。而且NS1或SP2/0必須是對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度控制在105/ml,細(xì)胞8活力達(dá) 95%，進(jìn)行細(xì)胞融合時(shí) 1.5*10 8細(xì)胞數(shù)。2 ）免疫鼠脾細(xì)胞良好、合適，大多數(shù)情況下，并不需要高度免疫；3 ）融合劑良好合適，50%PEG。兩個(gè)決定因素1 ）選擇培養(yǎng)基（ HAT）2 ）飼養(yǎng)細(xì)胞（ 104/ml 以上）：來(lái)自同系小鼠的胸腺細(xì)胞或腹腔巨噬細(xì)胞14. 與

22、胚胎干細(xì)胞相比較，成體干細(xì)胞有以下幾個(gè)特點(diǎn)：（1）成體干細(xì)胞體積小，細(xì)胞器稀少，RNA含量較低，在增殖過(guò)程中處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)，在組織結(jié)構(gòu)中位置相對(duì)固定。（2）成體干細(xì)胞數(shù)量很少，其基本功能是參與組織更新，創(chuàng)傷修復(fù)及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。（3）成體干細(xì)胞常處于一個(gè)有干細(xì)胞細(xì)胞基質(zhì)、對(duì)干細(xì)胞的增殖和分化起調(diào)控作用的各種信 號(hào)分子的特定微環(huán)境或稱(chēng)生物位中， 干細(xì)胞是自我復(fù)制還是分化為功能細(xì)胞， 取決于所在 的微環(huán)境和自身的功能狀態(tài)。（4）成體干細(xì)胞沒(méi)有確定的來(lái)源。15. 干細(xì)胞研究的意義 干細(xì)胞在生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域都有著重要而深遠(yuǎn)的影響，如移植治療、克隆動(dòng)物及轉(zhuǎn)基 因動(dòng)物的生產(chǎn)、細(xì)胞組織和器官的修復(fù)、

23、組織工程等有著廣闊的應(yīng)用前景。1 ）移植治療： 移植治療目前已成為治療疾病的一個(gè)重要手段，如器官移植、細(xì)胞移植等。2 ）克隆動(dòng)物及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的生產(chǎn)：利用這項(xiàng)技術(shù)人們還可以將一些在發(fā)育過(guò)程中非必需 的基因敲除（ knock out ），在體內(nèi)進(jìn)行功能缺失研究；還可以通過(guò)基因功能獲得性突變， 使特定基因在發(fā)育的某一時(shí)期表達(dá)，從而研究該基因在胚胎不同發(fā)育時(shí)期中的作用。3 ）轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞基因治療：現(xiàn)有的基因治療有兩類(lèi)：轉(zhuǎn)基因細(xì)胞治療核酸治療。4 ）為發(fā)育生物學(xué)研究提供理想的體外模型：胚胎干細(xì)胞提供了在細(xì)胞和分子水平上研究 個(gè)體發(fā)育過(guò)程中極早期事件的良好材料和方法。5）高效新型藥物的發(fā)現(xiàn)、篩選及動(dòng)物和人

24、類(lèi)疾病的模型：胚胎干細(xì)胞提供了新藥物的藥 理藥效、 毒理及藥物代謝等研究的細(xì)胞水平的研究手段。 利用胚胎干細(xì)胞體外分化的細(xì)胞 組織檢驗(yàn)篩選新藥，可大大減少藥物實(shí)驗(yàn)所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量及其人群數(shù)量?？傊?，干細(xì)胞研究對(duì)細(xì)胞組織移植治療，體外研究動(dòng)物、人胚胎的發(fā)生、發(fā)展，新的人類(lèi) 因發(fā)現(xiàn)，藥物的篩選和致畸實(shí)驗(yàn)及克隆動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等領(lǐng)域?qū)a(chǎn)生重要的影響。16. 試述進(jìn)行成體干細(xì)胞研究有哪些優(yōu)勢(shì)1 ）成體干細(xì)胞則可從患者自身獲得， 而不存在組織相容性的問(wèn)題， 治療時(shí)可避免長(zhǎng)期應(yīng)用 免疫抑制劑對(duì)患者的傷害。 此外，少量的骨髓切除治療有助于形成部分造血嵌合體， 可使 異體成體干細(xì)胞的治療成為可能。2）成體干

25、細(xì)胞不會(huì)引發(fā)畸胎瘤。3） 成體干細(xì)胞也具有類(lèi)胚胎干細(xì)胞的高度分化能力。在人體發(fā)育的過(guò)程中， 可能成體干細(xì) 胞是存留在多種組織中具有多系分化能力的亞全能干細(xì)胞群體， 這些細(xì)胞都具有相同或相 似的細(xì)胞表型，在適合的微環(huán)境下可分化成多種組織細(xì)胞。17. 試述癌細(xì)胞系鑒定要點(diǎn)（ 簡(jiǎn)述體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)的常規(guī)項(xiàng)目 ）培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)成形態(tài)上單一的細(xì)胞群體或細(xì)胞系（或株） 后，需要做一系列的細(xì)胞生物學(xué)測(cè)定， 主要的目的在于： 證明所培養(yǎng)的細(xì)胞系的確來(lái)源于原體內(nèi)具有惡性的細(xì)胞， 而非正常細(xì)胞或其它細(xì)胞。細(xì)胞生長(zhǎng)增殖：檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、細(xì)胞周期時(shí)間。 細(xì)胞核型分析：檢測(cè)核型特

26、點(diǎn)，染色體數(shù)量、標(biāo)記染色體的有無(wú)、帶型等。 軟瓊脂培養(yǎng)：檢測(cè)集落形成能力。異體動(dòng)物接種：向異體動(dòng)物體內(nèi) （皮下 ） 接種細(xì)胞懸液，觀察成瘤能力。其它：根據(jù)需要還可做同位素標(biāo)記、組織化學(xué)成分分析，熒光顯微鏡觀察等。1）形態(tài)觀察：主要觀察細(xì)胞的一般形態(tài)，如大體形態(tài)、核漿比例、染色質(zhì)和核仁大小、 多少等以及細(xì)胞骨架微絲微管的排列狀態(tài)等。2）3）4）5）6）18. 簡(jiǎn)述細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程及各期細(xì)胞的特點(diǎn)培養(yǎng)細(xì)胞成分混雜， 呈現(xiàn)異質(zhì)性。 細(xì) 原代與體內(nèi)原組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng) 為保持二倍體體細(xì)胞性質(zhì)，應(yīng)在初1）原代培養(yǎng)期： 取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱(chēng)為原代培養(yǎng)。組織到第一次傳代

27、時(shí)間大約為 14周。特點(diǎn)：胞活躍移動(dòng) ,分裂,但不旺盛 ,多呈二倍體核型。 基本相似，適宜進(jìn)行疫苗制備、藥物測(cè)試、移植等。代或傳代后早期冰凍。子機(jī)制；2) 傳代培養(yǎng)期：首次傳代開(kāi)始經(jīng)反復(fù)傳代一直到培養(yǎng)細(xì)胞開(kāi)始衰退之前的全部時(shí)間。初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代便稱(chēng)之為細(xì)胞系(cell line)。特點(diǎn)：細(xì)胞增殖旺盛，并維持二倍體核型，也叫二倍體細(xì)胞系 (diploid cell line) 一般細(xì)胞在10代以?xún)?nèi)凍存。 細(xì)胞 逐漸進(jìn)入去分化狀態(tài)。原本成分混雜的培養(yǎng)物中，某一種增殖能力較強(qiáng)的細(xì)胞會(huì)逐漸處于優(yōu)勢(shì) , 比例越來(lái)越大 , 而將其它數(shù)量較少比例較小的細(xì)胞逐漸淘汰掉。3) 衰退期： 細(xì)胞仍然生存，但不增

28、殖或增殖很慢，最后衰退死亡。輪廓增強(qiáng)，色澤變暗，胞質(zhì)出現(xiàn)顆粒樣及空泡狀結(jié)構(gòu)。在細(xì)胞生命期階段，少數(shù)情況下，在不明原因的影響，細(xì)胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化。標(biāo)志之一， 是細(xì)胞獲得不死性即持久性增殖能力，這樣的細(xì)胞群體稱(chēng)“無(wú)限細(xì)胞系”。核型大多變成異倍體，接觸抑制消失。19. 干細(xì)胞研究的主要內(nèi)容與問(wèn)題1. 主要內(nèi)容1 )干細(xì)胞的分離與鑒定2 )干細(xì)胞的自我更新3 )干細(xì)胞的定向分化4 )干細(xì)胞的臨床應(yīng)用2. 問(wèn)題1) 胚胎干細(xì)胞建系及定向誘導(dǎo)成組織細(xì)胞的分2) 成體干細(xì)胞橫向分化的條件；3) 各種組織的成體干細(xì)胞庫(kù)的建立及臨床治療試驗(yàn)；4) 細(xì)胞移植的免疫排斥問(wèn)題。20. 粘附生長(zhǎng)型細(xì)胞根據(jù)形態(tài)分為幾種

29、類(lèi)型，試述各型主要特點(diǎn)。1)粘附型細(xì)胞(Mo no layer cells):附著在某一固相支持物表面才能生長(zhǎng)的細(xì)胞。a成纖維細(xì)胞型：形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則，三角形，胞質(zhì)向外伸出 2 3個(gè)長(zhǎng)短不等的 片狀偽足 ，中有卵圓形核。 生長(zhǎng)特點(diǎn)： 排列成放射狀， 漩 渦狀，并不緊靠連成片，細(xì)胞細(xì)胞接觸易斷開(kāi)而單獨(dú)行動(dòng)，游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì) 胞，常有幾個(gè)伸長(zhǎng)的細(xì)胞 突起。b上皮細(xì)胞型：形態(tài)：類(lèi)似體內(nèi)的上皮細(xì)胞，扁平、不規(guī)則 多角形，中有圓形核。生長(zhǎng)特點(diǎn)：易相連成片，相靠一緊密相連一成薄層一鋪路石狀生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng)，很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng)。c 游走型細(xì)胞：培養(yǎng)需要 支持物 ，分

30、散生長(zhǎng)， 不連接成片 ，在培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)位置不定，處 于活躍的游走或 變形運(yùn)動(dòng)， 因此外形不規(guī)則且不斷變化 ， 密度大連接成片呈 多角形 不易 與其他類(lèi)型的細(xì)胞區(qū)別。d 多型性細(xì)胞：無(wú)規(guī)律的形態(tài)，細(xì)胞分胞體和胞突。胞突細(xì)長(zhǎng)形，似絲狀偽足，胞體略呈多角形。21. 試述“克隆”的基本概念并舉例說(shuō)明其在細(xì)胞培養(yǎng)工作中的實(shí)際意義1)2)實(shí)際意義：克?。褐竿ㄟ^(guò)一定方法獲得由單個(gè)細(xì)胞無(wú)性繁殖形成的細(xì)胞集落。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)診斷試劑： 單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、 放射免疫分析、 免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)。 目前，單克隆抗體商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于： 病原微生物抗原、 抗體的檢測(cè)； 腫瘤抗原的檢測(cè)； 免疫細(xì)胞及其亞群的的檢測(cè)； 激素測(cè)定； 細(xì)胞因子的測(cè)定。b 蛋白質(zhì)的提純： 單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個(gè)惰性的固相基質(zhì)上， 并制備成層析柱。 當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時(shí)， 待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合， 其余成分不能與之結(jié)合。 將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強(qiáng)度或 pH,欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。2. 試述原代細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念、原理、優(yōu)缺點(diǎn)及實(shí)際意義。1）概念： 一般指細(xì)胞從組織中分離在體外生長(zhǎng)至傳代之前的細(xì)胞