高濃度鉛接觸對小鼠外周血紅細胞形態(tài)的影響

1、    作者：溫曉艷 商萬軍 劉向東  【摘要】  目的:觀察高濃度鉛接觸對紅細胞形態(tài)的影響，并了解其對鉛中毒的臨床提示價值。方法：昆明種成年雄性小鼠15只，隨機分成兩組，實驗組10只飲用2g/L硝酸鉛溶液(1251mgPb2+/L)染毒，共50d。每10d切尾涂片一次，分別鏡檢計數(shù)含HowellJolly小體RBC，嗜堿性點彩RBC，嗜多色性RBC及低色素性RBC的出現(xiàn)率。結(jié)果：在50d的實驗時間內(nèi)，染毒組小鼠四種異常RBC出現(xiàn)率均隨染毒時間而增加（095r1，P001），分別自第50d、30d、20d和第10d

2、起與對照相比有顯著性意義（P001）。結(jié)論：低色素性RBC是提示鉛中毒的較敏感的指標。含Howell-Jolly RBC的診斷價值不大。嗜堿性點彩RBC在鉛中毒早期呈陰性時，應(yīng)注意嗜多色性RBC和低色素性RBC的變化。    【關(guān)鍵詞】  鉛中毒；紅細胞；異常形態(tài)    【ABSTRACT】  Objective：To observe the change of red blood cell when poisoned by high concentration lead, and determine the va

3、lue of abnormal erythrocyte to point out clinical significance.Methods：Fifteen kunming mice (male and adult) were randomly divided into two groups. Experiment group with ten mice was produced by drinking water(1251mgPb2+/L) to induce lead overload. The control group drinked deionized water. On the 1

4、0th ,20th ,30th,40th and 50th day, cut the tail of each mouse to make blood smears, stained the smears by Wrights method, and counted the erythrocyte containing HowellJolly bodies, or containing basophilic stipplings, or showing polychromatophilia, or showing hypochromic.Results：The four kinds of ab

5、normal erythrocyte were all increased with the days of lead poisoning(095r1,P001),significantly higher than that of nonexposed mice from 50th ,30th 20th and 10th day.Conclusion：The hypochromic cell is the best examined element to display lead poisoning.The erythrocyte containined HowellJolly bodies

6、doesnt reveal lead poisoning. The basophilic stippling is not accurate at early stage, and we must pay attention to the polychromatic erythrocyte and the hypochromic cell when considering lead poisoning.    【KEY WORDS】  Lead poisoning;Red blood cell;Abnormal form     鉛對

7、紅細胞（red blood cell, RBC）具有多方面的毒性作用，可以造成紅細胞的各種形態(tài)異常。首先，鉛是弱的致斷劑，可導(dǎo)致DNA損傷1，以使RBC細胞質(zhì)中出現(xiàn)微核，也就是臨床檢驗學(xué)中所講的染色質(zhì)小體（HowellJolly bodies）。其次，鉛抑制RBC中的嘧啶5核苷酸酶（P5N），致使脫核后的RBC中核糖體等不能降解而形成嗜堿性點彩RBC2。第三，鉛可使血紅素合成中的多種巰基酶活性下降3，導(dǎo)致血紅蛋白生成障礙，最終出現(xiàn)小細胞低色素性貧血。第四，鉛可使RBC膜脆性增加、Na+K+ATP酶失活3和缺乏能量2，因而發(fā)生溶血，導(dǎo)致外周血涂片上嗜多色性RBC增加。本研究即是通過小鼠的飲水染毒

8、試驗，來了解高濃度鉛接觸時外周血RBC形態(tài)的變化情況，以及這些異常形態(tài)對鉛中毒的提示作用。    1  材料與方法    11  實驗動物  成年雄性（雄激素有利于紅細胞的生成）昆明種小鼠15只，體重3947g，河北北方學(xué)院動物室提供。    12  實驗方法    121  鉛染毒試驗  15只小鼠隨機分成2組，陰性對照組5只，實驗組10只。所有小鼠以混合飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，以自由飲水方

9、式染毒，對照組飲用去離子水，實驗組飲用2g/L的硝酸鉛溶液（相當1251mgPb2+/L，臨用前以去離子水配制）。試驗時間為50d。    122  紅細胞形態(tài)觀察  試驗期間，所有動物均每10d切尾取血一次，各制血涂片2張，每只小鼠共切尾五次。全部涂片行瑞氏染色后，于顯微鏡下選取細胞分布均勻、染色良好的區(qū)域，分別計數(shù)含HowellJolly小體的RBC，含嗜堿性點彩的RBC，嗜多色性RBC及低色素性RBC，以每1000個RBC中的出現(xiàn)率報告，同次兩涂片計數(shù)結(jié)果取均值。    2 &#

10、160;結(jié)果    21  含HowellJolly小體的RBC  這種異常形態(tài)的出現(xiàn)率在小鼠染毒后變化最不明顯，雖也有隨時間而增多的趨勢（r=0965，P001），但直到第50d才與陰性對照值有顯著性差異（P001），見表1。HowellJolly小體呈或深或淺的紫紅色，直徑051m，均為單個出現(xiàn)于成熟或嗜多色性紅細胞質(zhì)中。    22  嗜堿性點彩RBC  飲用去離子水的陰性對照組，在試驗全程共計數(shù)50000個RBC，僅見到1個含有嗜堿性點彩。染鉛小鼠外周血點彩RBC出現(xiàn)

11、率與染毒時間呈正相關(guān)（r=0955，P005）。實驗組染毒第20d的嗜堿性點彩RBC出現(xiàn)率已顯著高于對照組（P005），第30d后差異更加顯著（P001），見表2。嗜堿性點彩顆粒呈藍色，散在分布于成熟RBC、嗜多色性RBC或低色素RBC中，同一細胞中的顆粒大小較為均一。早期出現(xiàn)的點彩顆粒大多細小而染色淺，不易發(fā)現(xiàn)和辨認；隨著染毒時間的延長，顆粒漸變得粗大而色深。從第40d后，實驗組小鼠血片上的點彩紅細胞才容易進入視線而引起人的注意，這時的平均出現(xiàn)率已達15以上。    23  嗜多色性RBC  計數(shù)結(jié)果見表3。實驗組小鼠嗜多色性RBC

12、出現(xiàn)率在染毒的50d內(nèi)隨著時間而增加（r=0957），并且具有統(tǒng)計學(xué)意義（P005）。染毒第2050d的實驗組計數(shù)結(jié)果全部顯著高于對照組（P001）。    24  低色素性RBC  實驗組低色素性RBC出現(xiàn)率與染毒時間呈正相關(guān)（r=0993，P001），5次計數(shù)結(jié)果均高于對照組，并且有顯著性意義（P001），見表4。實驗組小鼠的低色素性RBC直徑相差懸殊，有些是小細胞，但也有相當大一部分表現(xiàn)為低色素性大紅細胞。2006年4月溫曉艷等：高濃度鉛接觸對小鼠外周血紅細胞形態(tài)的影響表1  染鉛小鼠外周血含HowellJo

13、lly小體RBC出現(xiàn)率表2  染鉛小鼠外周血嗜堿性點彩RBC出現(xiàn)率表3  染鉛小鼠外周血嗜多色性RBC出現(xiàn)率表4  染鉛小鼠外周血低色素性RBC出現(xiàn)率    3  討論    31  根據(jù)徐氏4的研究結(jié)果，小鼠飲用546mgPb2+/L的三水醋酸鉛溶液10d，血鉛含量可達123±039g/g，也就是每升血含鉛在1200g以上，可知2g/L的Pb(NO3)2溶液（1251mgPb2+/L）飲水，足以造成小鼠的急性鉛中毒。   

14、本研究發(fā)現(xiàn)，高濃度鉛接觸時最早出現(xiàn)的異常形態(tài)是低色素性RBC，染毒第10d時就已顯著高于對照組。這是因為血紅素合成中的氨基乙烯丙酸脫水酶（ALAD）與微量鉛接觸后活性即可迅速喪失2，血鉛達50g/L時即顯著低于對照組5。而反映RBC破壞增加、骨髓代償性增生的嗜多色性RBC從染毒第20d才明顯高于對照組。顯然與“急性鉛中毒時溶血作用較明顯，慢性鉛中毒時以影響卟啉代謝為主”的報告不符3。說明低色素性RBC對急性鉛中毒的診斷很敏感。    血細胞分析儀參數(shù)MCHC降低的意義為RBC呈低色素，但這種情況遠較血涂片上低色素性RBC的增加出現(xiàn)為晚。因為MCHC的本質(zhì)是平均數(shù)，只有低色素

15、性RBC的數(shù)量多到能夠影響總體的水平時，這個參數(shù)才會減低。所以通過RBC參數(shù)來推測其形態(tài)，不如直接的鏡下觀察更敏感。此外，本實驗中出現(xiàn)的低色素性RBC并非直徑都小，有些甚至大于正常，造成這一現(xiàn)象的原因雖有待進一步研究，但說明存在明顯的RBC大小不均，反映到血細胞分析儀的結(jié)果上就是紅細胞體積分布寬度（RDW）增加。有文獻報道接觸鉛的工人其它紅細胞測定值均尚在正常范圍內(nèi)時，只有RDW一項高于參考值6。    32  實驗組含HowellJolly小體RBC出現(xiàn)率直到染毒第50d才與對照組有顯著差異，而且均值只有125。說明鉛的致畸變作用是較弱的，需要相當高的

16、劑量或較長的作用時間。因此外周血HowellJolly小體的變化，不足以對鉛中毒起到提示作用。    33  Wright染色下的嗜多色性RBC和嗜堿性點彩RBC，在新亞甲藍等活體染色時均形成網(wǎng)織紅細胞（reticulocyte，Ret），因此鉛中毒時Ret的計數(shù)值大體相當于前兩者的和。Ret的顯著升高，是溶血發(fā)生的有力證據(jù)。鉛從三個方面導(dǎo)致RBC的破壞，染毒第20d嗜多色性RBC的計數(shù)值就非常顯著地高于對照組，說明溶血作用是很明顯的。所以，當病人有溶血性貧血的臨床表現(xiàn)如黃疸（血清總膽紅素及結(jié)合膽紅素升高）等時，無論鉛中毒的癥狀是否典型，都不應(yīng)草率忽視這

17、種可能性，而應(yīng)在需要的時候進行血鉛等相關(guān)檢測，以避免誤診。    34  嗜堿點彩RBC計數(shù)是經(jīng)典的鉛中毒檢測項目。有報道目前獲得性P5N缺陷還僅見于鉛中毒2，說明嗜堿性點彩顆粒對鉛中毒的診斷有較強的特異性。但實驗組小鼠的嗜堿性點彩RBC計數(shù)結(jié)果在第20d時才與對照組有顯著差異（P005），且均值只有120。這是因為P5N受鉛抑制是一個緩慢的病理過程2，在鉛中毒的較早期反映不出來。此外，染毒40d以前觀察到的點彩紅細胞不僅數(shù)量少，而且顆粒細小、染色淺，很容易被檢驗師忽視而漏報。某些鉛中毒患者點彩RBC計數(shù)陰性，可能就是以上原因。所以嗜堿性點彩RBC對鉛中毒的敏感性不高，當懷疑有鉛中毒、特別是點彩RBC陰性時，還應(yīng)注意低色素性RBC和嗜多色性RBC的出現(xiàn)情況。    參考文獻    1  張帆，李崇高.鉛誘發(fā)人類染色體畸變和微核的研究J.中國優(yōu)生與遺傳雜志，1998，6（1）：40    2  譚楓，萬伯健.鉛致獲得性P5N缺陷的研究概況J.中國公共衛(wèi)生，1993，9（11）：510511    3  厲有名，姜玲玲.鉛中毒病理生理機制的若干研究進展J.廣東微量元素科